人急性单核细胞白血病细胞;THP-1贴壁培养
RANKL和M-CSF诱导THP-1细胞向破骨细胞样细胞分化的研究
RANKL和M-CSF诱导THP-1细胞向破骨细胞样细胞分化的研究刘天云【摘要】目的探讨建立有效诱导THP-1细胞分化为破骨细胞样细胞的方法.方法THP-1细胞首先在TPA的刺激下分化为贴壁细胞,然后在破骨细胞生成因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的联合诱导下向破骨细胞样细胞分化.通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测分化来的细胞是否为破骨细胞样细胞.结果 THP-1在RANKL和M-CSF的作用下分化为TRAP阳性的破骨细胞样细胞.结论 RANKL和M-CSF可联合诱导THP-1细胞分化为破骨细胞样细胞.%Objective To establish a method that can induce THP-1 cells to differentiate into osteoclast-like cells efficiently. Methods Firstly, THP-1 cells was induced to differentiate into adherent cells by TPA, then differentiated into osteoclast-like cells induced by RANKL and M-CSF. Lastly. Using tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) method to determine whether the multinuclear-cells were osteoclast-like cell or not. Results THP-1 cell could differentiate into osteoclast-like cells under the stimulation of RANKL and M-CSF. Conclusions The expression level of RANK in THP-1 cells is high enough for it to response to RANKL. THP-1 cells can differentiate into osteoclast-like cells induced by RANKL and M-CSF.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2011(051)033【总页数】3页(P19-21)【关键词】THP-1;破骨细胞生成因子;巨噬细胞集落刺激因子;破骨细胞样细胞【作者】刘天云【作者单位】天津医科大学口腔医院,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R329.2很多骨骼疾病是由破骨细胞的分化和功能异常引起的，如巨颌症、类风湿性关节炎、女性绝经后骨质疏松等。
THP-1 细胞培养
生物实验：THP-1 细胞培养THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。
属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。
其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。
工具/原料•培养基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)•胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)•二甲亚砜：DMSO (SIGMA D2650)•双抗P/S (Penicillin/Streptomycin)（GIBCO #15140-122）1. 1细胞培养：THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。
可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。
2. 2细胞传代：当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。
由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。
传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。
3. 3细胞冻存：取差不多1x10^7个细胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管，于-80℃冰箱过夜。
第二天移入液氮中长期保存。
END注意事项•细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上10 5到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。
•细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。
•注意细胞的密度一定要高，介于5×105——106/ML之间，增值的快。
细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数会增加。
这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。
•THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以尽量使用相同Ph的1640。
thp1细胞电转方法
thp1细胞电转方法THP-1细胞是一种具有单核细胞功能的人类白血病单核细胞系，常用于炎症和免疫反应的研究。
THP-1细胞可以通过电转某些基因来进行功能研究，如炎症因子的表达和调控，信号通路的研究等。
下面将介绍THP-1细胞电转的方法。
一、细胞培养1.1 THP-1细胞维持：THP-1细胞应在37°C、5% CO2的恒温培养箱中维持。
培养基一般为RPMI-1640培养基，含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素。
1.2 细胞传代：THP-1细胞密度应在8×10^5至1×10^6个细胞/ml之间，每2-3天传代一次。
二、电转试剂2.1 质粒DNA：选择合适的质粒表达载体，含有目的基因的表达序列。
2.2 转染试剂：常用的转染试剂有聚乙烯亚胺（PEI）和脂质体转染试剂。
2.3 负载DNA：将质粒DNA与转染试剂混合，形成复合物。
三、电转过程3.1 THP-1细胞培养：在电转前需将THP-1细胞培养至对数生长期，细胞密度应在1×10^6个细胞/ml以上。
3.2 转染：将负载DNA的复合物滴加到THP-1细胞培养基中，轻轻摇动培养皿使复合物均匀分布。
3.3 电转：将培养皿放置于电转仪中进行电转；电转条件一般为电压1500-1800V、电容时间20-30ms。
3.4 处理：将电转后的THP-1细胞培养液转移至含有适当抗生素的培养基中，并培养至目的。
四、结果检测4.1 抗生素筛选：通过加入抗生素筛选培养THP-1细胞，检测是否成功转染。
4.2 蛋白表达：通过Western blot或ELISA等方法检测目的基因的蛋白表达水平。
4.3 mRNA表达：通过RT-PCR或Real-time PCR等方法检测目的基因的mRNA表达水平。
4.4 细胞功能：通过细胞功能实验检测目的基因的功能变化，如细胞增殖、凋亡、炎症因子的表达等。
总结：THP-1细胞的电转是一种用于基因功能研究的有效方法，通过该技术可以实现外源基因的表达和功能研究。
THP-1细胞
THP-1（人单核细胞白血病）1.背景知识THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。
属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验，其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2，对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。
THP-1细胞可以用佛波醇、TPA诱导单核细胞分化。
相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。
相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。
因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。
2.THP-1细胞培养基本信息细胞照片注意要点(1)THP-1细胞为悬浮生长，部分细胞聚集成团，部分细胞分散。
(2)THP-1细胞更喜欢酸性环境，在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可。
(3)THP-1细胞有密度依赖性，THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在4~8×105 /mL为宜；超过2.0×106/mL则需要传代。
(4)THP-1细胞对机械力较敏感。
正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。
暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
(5)血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
(6)THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作3.THP-1的应用——巨噬细胞分化与炎症模型THP-1与人原代单核细胞都可以被诱导分化为巨噬细胞M1和M2，并释放相应的细胞因子。
人单核细胞THP-1说明书
人单核细胞THP-1说明书目录号：SCSP-567细胞名称：THP-1细胞描述：人单核细胞，急性髓细胞白血病。
该细胞来源于一岁男孩的外周血，对乳胶微粒和致敏红细胞有吞噬作用，可在佛波酯（TPA，也称为PMA，全名12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate）诱导下分化成为巨噬细胞。
物种：人，男性，1岁组织：外周血细胞来源：2014年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考传代周期：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考换液频率：传代时换液冻存液配方：完全培养液95%，DMSO5%细胞形态：悬浮生长支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：D5S818:11,12D13S317:13,13D7S820:10,10D16S539:11,12vWA:16,16THO1:8,9.3Amelogenin:X,YTPOX:8,11CSF1PO:11,13THP-1细胞照片参考文献：备注：1.人单核细胞THP-1完全培养液配方（100ml）：RPMI Medium1640(Invitrogen,11875-093)90mlFBS10mlβ-Mer(Invitrogen21985)0.05mM2.注意事项：a)该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。
同时，您在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。
b)细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。
thp-1细胞的培养方法和注意事项
HP-1细胞是一种单核细胞白血病细胞系，广泛应用于免疫学、血液学和肿瘤学研究。
THP-1细胞的培养方法和注意事项：
一、培养方法：
1.培养基：使用含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基，
确保无菌且不含抗生素。
2.细胞接种：以每孔1×10^5个细胞接种到96孔板，在37℃、
5%二氧化碳的细胞培养箱中培养。
3.培养时间：通常情况下，每2-3天更换一次培养基，根据细胞生
长情况决定传代时间。
4.细胞传代：当细胞达到80%-90%汇合时，使用0.25%胰蛋白酶
和0.02% EDTA溶液进行消化，并按照1：3-1：5的比例传代。
5.细胞冻存：当细胞达到80%-90%汇合时，使用细胞冻存液进行
冻存，并置于-80℃冰箱中保存。
二、注意事项：
1.无菌操作：确保所有操作过程在无菌条件下进行，以防止污染。
2.细胞密度：注意控制细胞密度，避免细胞过度堆积导致生长状态
恶化。
3.培养液更换：定期更换培养液，以保持营养充足，防止有害代谢
产物积累。
4.避免刺激：在操作过程中，尽量避免对细胞产生机械性或化学性
刺激。
5.观察记录：定期观察细胞生长情况，记录实验数据，以便分析和
总结。
THP-1单核细胞培养-文档
这个是急性单核白血病细胞，悬浮的（如果养的时间很长了有的会贴壁），培养基用普通的1640就可以了，这里是这个细胞株的详细资料供参考。
THP-1： human acute monocytic leukemiaOrigin: established from the peripheral blood of a 1-year-old boy with acute monocytic leukemia (AML) at relapse in 1978; the cells can be used for induction of differentiation studies; the cells were described to produce lysozyme and to be phagocytic; carries t(9;11)(p21;q23) leading to MLL-AF9 fusion gene Morphology: round, single cells in suspension, partly in clustersMedium: 90% RPMI 1640 + 10% FBSSubculture: maintain at 0.1-1.0 x 106 cells/ml; split 1:2 to 1:3 every 3-4 days; seed out at ca. 0.5 x 106 cells/mlIncubation: at 37 °C with 5% CO2Doubling time: ca. 35-50 hoursHarvest: saturation density at about 1.0 x 106 cells/mlStorage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 5 x 106 cells/ml Mycoplasma: contamination was eliminated with Ciprobay (ciprofloxacin), then negative in DAPI, microbiological culture, PCR assaysImmunology: CD3 -, CD4 +, CD13 +, CD14 (+), CD15 +, CD19 -, CD33 (+), CD34 -, CD68 +, HLA-DR +Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile Species: confirmed as human with IEF of AST, MDH, NPCytogenetics: human near-tetraploid karyotype - 94(88-96)<4n>XY/XXY, -Y, +1, +3, +6, +6, -8, -13, -19, -22, -22, +2mar, add(1)(p11), del(1)(q42.2), i(2q), del(p21)x2-4, i(7p), der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2, der(11)t(9;11)(p22;q23)x2, add(12)(q24)x1-2, der(13)t(8;13)(p11;p12), add(?18)(q21) - carries t(9;11) associated with AML M5Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -, HIV -, HTLV-I/II -THP-1单核细胞是悬浮生长的细胞，用1640＋10％FBS是很容易养的，但复的细胞可适当加量至20%FBS。
thp-1诱导向m1极化实验步骤
thp-1诱导向m1极化实验步骤通过实验可以有效诱导THP-1细胞向M1巨噬细胞极化。
本文将详细介绍THP-1细胞的培养、诱导向M1巨噬细胞极化的步骤，以及相关的实验控制。
该实验步骤包括培养条件的设定、细胞处理、细胞相关试验和数据分析。
1. THP-1细胞培养- THP-1细胞的培养基为RPMI 1640，加入10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素。
细胞在37°C下的5% CO2培养箱中培养。
- 每两天检查细胞的状态，当细胞密度达到70-80%时，进行细胞的传代。
- 将细胞用无菌的PBS洗涤，并加入培养基中，用细胞刮板轻轻离心，混匀细胞悬液。
- 取部分细胞悬液加入计数板中，用显微镜和血细胞计数室统计细胞数目。
- 根据需要的细胞数目，离心收集细胞，以2000 rpm离心5分钟。
- 用培养基重新悬浮细胞，调整细胞密度至所需浓度。
2. THP-1细胞诱导向M1巨噬细胞极化- 将THP-1细胞按照所需密度加入6孔板或96孔板中，每个孔中细胞数目相同。
- 对于M1极化，可以使用LPS（脂多糖）和IFN-γ（干扰素-γ）进行处理。
根据实验需要的浓度添加适量的LPS和IFN-γ到细胞培养基中。
- 将孔盖好，将细胞培养在37°C的CO2培养箱中。
- 根据实验设计的需要，选择适当的时间点进行处理。
- 在处理完毕后，可根据不同实验的需求收集细胞进行下一步的实验处理。
3. 细胞相关试验- 可以通过免疫荧光染色、Western blot、RT-PCR等手段来检测M1巨噬细胞的特征标记物，如iNOS（一氧化氮合酶）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）等。
- 对于免疫荧光染色实验，先用PBS洗涤细胞，然后用4% paraformaldehyde固定细胞，再用0.1% Triton X-100进行渗透处理。
随后，使用适当的抗体与细胞进行孵育，进行特定标记物的检测。
- 对于Western blot实验，收集细胞后，细胞裂解并进行蛋白质浓度测定。
乌索酸诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1分化的研究
乌索酸诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1分化的研究张婷;沈晶;任天年;刘昆梅;奚涛【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2010()6【摘要】乌索酸是一种常见的五环三萜类化合物,本文考察了其对原单核白血病细胞株THP-1的分化诱导作用。
乌索酸作用72h后,通过显微镜形态观察,部分THP-1细胞贴壁生长,形态具有向巨噬细胞分化的特征。
结晶紫染色结果显示细胞贴壁程度呈剂量依赖型增长。
利用流式细胞分析技术分化标志物,发现CD11b和CD14阳性细胞百分比均有显著上调。
Western blotting结果表明乌索酸能上调分化相关蛋白C/EBPα的p42亚基并且下调分化负调控因子c-myc的蛋白水平,且对二者的表达调控作用具有浓度和时间相关性。
因此,乌索酸能够诱导THP-1细胞向单核/巨噬细胞方向分化。
其作用机制可能是上调C/EBPα的p42亚基,进而下调c-myc,从而达到分化诱导作用。
【总页数】5页(P572-576)【关键词】乌索酸;分化;白血病;人单核细胞白血病细胞株THP-1【作者】张婷;沈晶;任天年;刘昆梅;奚涛【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】R557.2【相关文献】1.肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究 [J], 何平;梅春丽;成蓓;刘玮;王彦富;万晶晶2.人类DOT1L基因在地西他滨抑制人单核细胞白血病细胞株THP-1增殖中的作用r及机制研究 [J], 牛志云;王颖;张敬宇;王艳3.PMA诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞表面标志物CD14和CD11b的表达 [J], 李晓琴;陈利荣4.乌索酸对高糖诱导人系膜细胞损伤的作用 [J], 岳媛;范秋灵;都姝妍;远方;徐莉;李琳;刘楠;姜奕;王力宁5.乌索酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株HL-60分化的机制 [J], 邓琳;张蕊;李辰;邢莹莹;奚涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
THP-1 (人急性单核白血病细胞) 产品说明书
THP -1 (人急性单核白血病细胞)产品编号 产品名称包装 C6960THP-1 (人急性单核白血病细胞)1支/瓶产品简介：Organism Tissue Morphology Culture Properties Homo sapiens (Human)Peripheral bloodRoundSuspension本细胞株详细信息如下:General Information Cell Line Name THP -1 (Human Acute Monocytic Leukemia Cells) Synonyms THP1; THP 1; THPI; THP -1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics -1 Organism Homo sapiens (Human) Tissue Peripheral blood Cell Type Monocyte Morphology Round Disease Acute monocytic leukemia Strain － Biosafety Level* 1 Age at Sampling 1 year infantGender Male Genetics Fc,C3b receptor.HLA -A2,-A9,-B5,-DRW1,-DRW2. Ethnicity － Applications These cells are suitable as a transfection host. Category Cancer cell line* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.CharacteristicsKaryotype － Virus Susceptibility－Derivation － Clinical Data－Antigen Expression HLA A2, A9, B5, DRw1, DRw2 Receptor ExpressionComplement (C3), expressed Oncogene －Genes Expressed Lysozyme,HLA A2, A9, B5, DRw1, DRw2Gene expression databases ArrayExpress: E-MTAB-2706; E-MTAB-2770; E-MTAB-3610; GEO: GSM236807; GSM236843; GSM482495; GSM887706; GSM888799; GSM1374962; GSM1446742; GSM1670543 Metastasis No Tumorigenic － Effects－CommentsThe cells are phagocytic (for both latex beads and sensitized erythrocytes) and lack surface and cytoplasmic immunoglobulin.Monocytic differentiation can be induced with the phorbol ester 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA).Culture Method Doubling Time26~70 hrsBeyotime Biotechnology 400-1683301800-8283301 e -mail *********************************** Methods for Passages Split cells to new flask with fresh medium. No need to treat them enzymatically to detach them from the surface of the culture vessel.Medium RPMI-1640+10% FBSSpecial Remarks－Medium Renewal Every 2 to 3 daysSubcultivation Ratio－Growth Condition95% air+ 5% CO2, 37ºCFreeze medium RPMI-1640+20% FBS+10% DMSO本细胞株经过支原体检测(Mycoplasma Test)，检测结果为阴性。
PMA诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞表面标志物CD14和CD11b的表达
PMA诱导人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞表面标志物CD14和CD11b的表达李晓琴;陈利荣【摘要】目的考察豆蔻佛波醇乙酯(PMA)对体外培养的原单核细胞THP-1的分化诱导条件. 方法首先用PMA梯度剂量(0,25,50,100,200,400 ng/ml)作用于THP-1细胞24h,通过CCK-8法检测细胞活力,再分别采用0,10,50 ng/ml PMA体外刺激THP-1细胞24h、48 h,流式细胞术检测细胞表面标志物CD11b、CD14. 结果梯度PMA剂量(0-100 ng/ml)对细胞活力没有影响(P＞0.05).10 ng/ml、50 ng/ml PMA处理后,CD11b、CD14阳性细胞百分比均有显著上调(与0 ng/ml相比,P＜0.05). 结论 10 ng/ml PMA能够诱导THP-1细胞向巨噬细胞方向分化,为PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞模型提供依据.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2018(049)009【总页数】4页(P1051-1054)【关键词】PMA;THP-1细胞;CD14;CD11b【作者】李晓琴;陈利荣【作者单位】山西医科大学汾阳学院医学检验系,汾阳032200;山西医科大学汾阳学院医学检验系,汾阳032200【正文语种】中文【中图分类】R733.7巨噬细胞(macrophage)是一类由血液中单核细胞分化而来的固有免疫细胞[1],是机体固有免疫系统的重要成分之一,具有吞噬、抗原提呈和分泌多种细胞因子的功能,在炎症、防御、修复、代谢等生理过程中发挥重要作用,同时也是机体维持自身稳定的关键因素[2]。
在激活和平衡宿主免疫系统的促炎和抑炎途径中,巨噬细胞发挥着核心作用[3]。
但是由于细胞数量少,分离过程较复杂,因此多用豆蔻佛波醇乙酯(phorbol myristate acetate, PMA)诱导THP-1单核细胞分化而来的THP-1-巨噬细胞作为研究巨噬细胞功能的体外细胞模型[1],因在某些方面可替代人血液及组织中的单核/巨噬细胞,成为目前最常用的巨噬细胞模型之一[4]。
细胞学堂THP-1（人单核细胞白血病）如何诱导分化？
细胞学堂THP-1（人单核细胞白血病）如何诱导分化？THP-1（人单核细胞白血病）来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，在实验研究中，常常诱导其分化为巨噬细胞和泡沫细胞。
本期普诺赛为大家总结了分化类型及其具体实验操作。
THP-1分化为巨噬细胞巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用。
同时，它也是高度异质性的细胞，受局部微环境的影响，可活化为不同的类型，展现出不同的表型和功能。
由于巨噬细胞在不同的组织环境和生理、病理条件下的异质性，巨噬细胞被分为两种主要类型：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。
THP-1细胞通常用佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞，然后在PMA仍然存在的情况下：脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培养48h，诱导其向M1极化；IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培养48h，诱导其向M2极化；最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640培养基重悬细胞，可保持72h。
图1. 巨噬细胞分化为M1和M2PMA诱导THP-1步骤：将处于对数生长期的THP-1细胞离心，用RPMI-1640培养基重悬；加入PMA，显微镜下细胞计数，调整THP-1细胞密度为5*10^5/mL；使PMA终浓度为100ng/mL，将细胞种入六孔板，每孔加入细胞2mL；48h后，显微镜下观察巨噬细胞构建成功。
单核细胞THP-1用PMA诱导后，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起。
图2. THP-1经PMA诱导分化为巨噬细胞THP-1分化为泡沫细胞THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞后，可以通过摄取大量脂质转变为泡沫细胞，这也是动脉粥样硬化产生的原因。
将THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后，可用RPMI-1640培养基配制氧化修饰低密度脂蛋白OX-LDL，使其终浓度为80mg/L，加入六孔板中，每孔量为2mL，干预24h。
人单核细胞白血病（THP-1）细胞培养方法
人单核细胞白血病（THP-1）细胞培养方法THP-1细胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。
它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，有分化为多种巨噬细胞的能力，是各领域研究常用的细胞系之一。
THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。
属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。
其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。
细胞复苏细胞复苏步骤1. 预热水浴锅至37℃2. 准备一个15mL离心管，加入2-3mL左右完全培养基待用3. 将细胞从-80℃冰箱或液氮中取出后，放进一次性PE手套中，立即投入水浴锅，迅速用力摇晃管子，使其1分钟内融化4. 酒精擦拭冻存管，进入生物安全柜，把融化的细胞悬液缓慢滴加到步骤2准备好的离心管中5. 1200rpm（约250g）离心3分钟6. 同时准备1个新的T25培养瓶，加入5mL完全培养基7. 去上清，新鲜培养基重悬细胞后滴加到步骤6的培养瓶里，放入培养箱小贴士：THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。
细胞冻存细胞冻存步骤1. 预先配制好冻存液2. 细胞1200rpm（约250g）3分钟离心后3. 去上清，用配好的冻存液重悬细胞4. 转移入冻存管5. 冻存管放进程序冻存盒6. 冻存盒放进-80度冰箱过夜，再放液氮长期保存小贴士：由于THP-1是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万-300万/mL为宜，以提高复苏存活率。
细胞培养条件培养基：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S推荐传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳，温度：37℃传代操作当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。
由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。
rLukS-PV体外诱导人急性髓系白血病细胞THP-1分化作用研究
rLukS-PV体外诱导人急性髓系白血病细胞THP-1分化作用研究章成芳;马筱玲;戴春阳;孙晓曦【摘要】Objective To investigate the induction differentiation effect of the subunit of Panton-Valentine leukoci-din ( LukS-PV) on the acute myeloid leukemia THP-1 cell lines and search a promising therapeutic strategy of mye-loid leukemia. Methods THP-1 cells were treated with different concentrations (0,0. 50,1. 00,1. 50 μmol/L) of n<br> recombinant LukS-PV( rLukS-PV). After 24, 48 h, the morphology of induced cells was observed with Wright-Gi-emsa staining under optical microscope. The expression of differentiation markers CD14 and CD11b was determined by flow cytometry. The cell phagocytosis of fluorescent particles was examined by fluorescence microscope. Results THP-1 cells treated with rLukS were changed from dispersal and suspended into adhesive and fusiform. Cell vol-ume and cytoplasm content increased, nucleo-cytoplasmic ratio decreased. The shape of cell nucleus was reniform, triangle and irregular. The cell nucleus was located at the side of cells. The expression of CD11b and CD14 was significantly increased, especially CD14. The cell phagocytosis of fluorescent particles was also obviously en-hanced. The above effects were both in a dose-and time-dependent manner. Conclusion rLukS-PV has the dif-ferentiation effect of inducing THP-1 cell lines into monocyte-macrophages system. These findings suggest the rLukS-PV maybe as a novel approach for treatment of myeloidleukemia.%目的：研究金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞毒素亚组分( LukS-PV)对人急性髓系白血病细胞THP-1的诱导分化作用,为寻求白血病新的靶向治疗药物奠定基础。
冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的作用研究
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
佛波酯诱导THP_1细胞分化条件的优化及自噬模型的建立_陈亮
Tetradecanoylphorbol acetate；
Autophagy；
细胞自噬是从酵母到人类都很保守的古老代谢 过程 ， 传统观点认为自噬已进化为一种重复利用
［1 ］
血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司 ； ＲPMI 1640 培养基（ 简写为“1640 培养基 ” ） 和 FirstStrand cDNA synthesis MMLV Kit 购于 Invitrogen 公司 （ 美 国） ； E． Z． N． A． EndoFree Plasmid Mini Kit 购于 Omega 公司（ 美国 ） ； Lipofectamine TM 2000 购于 Invitrogen MEM Ⅰ Medium 购自 Gibco 公司 公司（ 美国） ； Opti（ 美国 ） ； TＲIzol Ｒeagent 购 自 Invitrogen 公 司 （ 美 国） 。PCＲ 引物由生工生物工程（ 上海 ） 股份有限公 司合成。 反转录普通 PCＲ 仪 （ SENSOＲ ） 、 荧光定量 PCＲ 仪 （ CFX96 ） 购自 BIOＲAD 公司 （ 美国 ） ； 低速 离心机和高速离心机、 细胞培养箱购自 Thermo 公司 （ 美国） ； 倒置相差显微镜购自 OLYMPUS 公司 （ 日 73 购 自 OLYMPUS 公 司 本） ； 倒 置 荧 光 显 微 镜 IX（ 日本 ） ； NanoDrop 2000 分 光 光 度 计 购 自 Thermo Scientific 公司（ 美国） 。 LC3 点聚集示踪细胞自噬模型的建立 二、 （ 一） PMA 诱导 THP1 细胞分化 根据细胞生长状态和形态取 2 ～ 4 代细胞进行 。 1 进行 实验 收集形态典型、 生长状态良好的 THPTHP1 细胞呈单个圆形悬浮， 实验［ 密度约（ 5 ～ 10 ） × 10 6 / ml， 。 THP1 细胞使用 分布均匀， 折光度较好 ］ 1% 谷氨酰胺、 1% 双抗 （ 青霉素 含有 10% 胎牛血清、 5% CO2 和链霉素配制 ） 的 1640 培养基， 在 37 ℃ 、 的细胞培养箱内培养， 每 12 ～ 16 h 观察一次。 待细 胞到达对数生长期时（ 培养约 24 ～ 36 h 后） ， 用 1640 5 培养基调整细胞浓度为 6 × 10 个 / 孔接种于 6 孔板 10 、 20 、 中， 加入 PMA， 调整 PMA 最终浓度依次为 0 、 50 、 100 、 200 ng / ml， 最后补充 1640 培养基至2 ml， 以 0 ng / ml PMA 孔作为阴性对照孔。培养 24 h 后观察 各孔细胞贴壁、 形态变化情况并摄影。 当细胞形态 由单个圆形悬浮细胞， 逐渐变为贴壁、 形态不规则并 综合观察比较各孔分化形态和分化比例 ， 伸出伪足， 1 分化的优化浓度， 以确定 PMA 诱导 THP以分化细 胞比例大的和巨噬细胞形态典型的为优 。确定最优 PMA 浓度后， 1细 使用此 PMA 浓度分别诱导 THP24 、 48 、 60 h 后再次观察各孔细胞形态变化并 胞 0、 摄影， 综合观察比较各孔分化形态和分化比例 ， 以确 1 分化的优化作用时间， 定 PMA 诱导 THP其中 0 h 作用孔作为阴性对照孔。 细胞培养严格无菌操作， 若有污染则弃去细胞， 重新复苏。 （ 二） 细胞的转染与筛选 1． YFPLC3 质粒 DNA 的制备： 首先使用本室保
急性单核细胞白血病细胞系_THP-1
急性单核细胞白血病细胞系_THP-1THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。
相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。
相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。
因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。
基因敲入：CRISPR-U™基因敲入THP-1细胞：通过核转染法将gRNA、Cas9和Donor共转入细胞中，gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶位点。
CRISPR-U™可以通过核转染法高效地将CRISPR/Cas9以及Donor载体共转入THP-1细胞中，筛选后挑选单克隆培养。
选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序，筛选出成功敲入的阳性克隆。
若敲入的是荧光蛋白等报告基因，也可以通过直接观察荧光进行初步筛选。
应用案例：通过建立基因敲除和敲入的THP-1细胞模型，明确胞内抗病毒反应的信号通路DNA通常定位于细胞核中，而异常定位在胞浆中的DNA与通常与病毒感染或肿瘤发生有关。
cGAS-cGAMP-STING信号通路可检测胞浆dsDNA的存在，并诱导强效的免疫反应，产生干扰素和激活其他免疫应答基因。
与之对应的，RIG1-MAVS 可以检测胞浆内的pppRNA（一类dsRNA，某些病毒的基因组），并诱导免疫应答。
有时候胞浆内会出现RNA和DNA的杂交复合物，这种分子通常在某些病毒感染的情况下出现。
为了研究这种RNA-DNA复合物是通过哪个通路激活免疫应答，研究者分别构建了MAVS、cGAS、STING敲除的THP-1细胞，分别将dsDNA、pppRNA、RNA-DNA复合物导入细胞，发现RNA-DNA复合物是通过cGAS-cGAMP-STING通路进行免疫激活。
thp-1细胞培养要点
thp-1细胞培养要点THP-1细胞培养要点引言：THP-1细胞是一种人类单核细胞系，常用于体外炎症和免疫研究中。
为了保证实验结果的准确性和可重复性，正确的培养方法是至关重要的。
本文将介绍THP-1细胞的培养要点，以帮助研究人员获得高质量的实验结果。
一、培养基选择：THP-1细胞可以在含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基中维持生长。
此外，可以添加适量的抗生素（如青霉素和链霉素）来防止细菌污染。
二、细胞传代：当THP-1细胞达到80%~90%的密度时，需要进行细胞传代。
首先，将细胞培养液离心，以去除细胞沉淀。
然后，用无菌PBS洗涤细胞，以去除残留的培养基。
接下来，加入适量的消化酶（如胰蛋白酶）来解离细胞。
将细胞转移到新的培养瓶中，并加入新的培养基。
每3-4天进行一次传代，以保持细胞的健康生长。
三、细胞密度控制：THP-1细胞的密度对于实验结果的可靠性至关重要。
细胞过于稀疏会导致实验结果不准确，而细胞过于密集则会影响细胞生长和功能。
通常，将细胞密度控制在1×10^5~1×10^6个细胞/ml之间，以保证实验的稳定性和可重复性。
四、细胞分化：THP-1细胞可以通过添加诱导剂（如12-酰化平衡子）来诱导其分化成巨噬细胞。
分化后的THP-1细胞具有更接近体内巨噬细胞的特性，适用于更多类型的研究。
通常，在培养基中添加适量的诱导剂，并将细胞培养至48-72小时，即可实现细胞的分化。
五、细胞处理：在进行实验前，需要将THP-1细胞从培养瓶中转移到实验板或培养皿中。
在转移过程中，需要注意保持细胞的活力和完整性。
使用无菌的工具和培养基，并避免过度处理和长时间的离心，以减少细胞损伤和死亡。
六、细胞检测：为了确保培养的THP-1细胞的纯度和活性，需要进行细胞检测。
可以使用染色法（如朗格罗斯染色）来检测细胞的形态和数量。
此外，还可以使用流式细胞术或免疫荧光染色来检测细胞表面标记物的表达和细胞功能。
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北京索莱宝科技有限公司
人急性单核细胞白血病细胞；THP-1贴壁培养
细胞名称：人急性单核细胞白血病细胞；THP-1
形态特性：单核细胞
生长特性：悬浮生长
培养条件：RPMI1640(w/o Hepes)+10%FBS
传代方法：维持细胞浓度在2×105~1×106cells/ml；2~3天换液1次
冻存条件：基础培养基+5%DMSO+20%FBS
特征特性：该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
细胞处理方法：
1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超
净台中操作。
2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分
瓶培养。
注意：
我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1.收到细胞后请尽快更换为含10%FBS的新鲜培养基。
2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
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