高效薄层色谱法测定棉籽油中游离棉酚含量_沈静

参考文献
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光谱实验室
第 28 卷
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光谱实验室
第 28 卷
2. 2 实验方法
2. 2. 1 棉酚标准品溶液的制备
准确称取 10m g 棉酚标准品, 用丙酮溶解, 转移至 50mL 棕色容量瓶中, 用丙酮稀释定容, 得 200 g ·mL - 1的棉酚丙酮贮备液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备
称 取棉籽油 5g 于 10mL 离 心管中, 加入 乙醇 5mL , 用 混匀器 混匀 5min, 离心 10min ( 4℃, 5000r/ m in) , 移取上部乙 醇层置于比色管中, 再加入乙 醇 5m L , 用 混匀器混匀 5min, 离心 10min ( 4℃, 5000r/ m in) , 合并 2 次乙醇层溶液, 氮气吹至 2m L , 得待测样品。
第 28 卷, 第 1 期 2011年 1月
光 谱 实 验 室 Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor at ory
Vol . 2 8 , No . 1 January , 2 0 1 1
高效薄层色谱法测定棉籽油中游离棉酚含量
沈 静 阳 胜a 于 红a 张煌涛a
3. 4 加标回收率试验
在不含游离棉酚的空白棉籽油中加入适量对照品溶液, 制备成棉酚含量为 16 g ·mL - 1的本
底样品 25mL , 分别加入 200 g·m L- 1的棉酚丙酮贮备液 5、10、15m L, 空白棉籽油定容至 50mL 。按
“2. 2. 2”项下制备待测样品, 按上述色谱条件测定。回收率情况列表如表 1。
3. 3 精密度试验
同板精密度试验: 自动点样器吸取 64 g ·mL - 1的棉酚对照品溶液, 点样 10 L 于薄层板上, 共 点 6 个 点, 按上 述薄层色 谱条件展 开, 显色, 密封后 按上述 薄层条件 扫描测定, 峰面积 RSD 为 2. 8% 。异板精密度试验: 方法如上, 点于 6 块薄层板上, 依次扫描测定, 峰面积 RSD 为 3. 9% 。
g·mL - 1 。
4 结论
图 3 棉酚对照品及样品高效薄 层展开图
( 1) 实验对展开剂的选择进行了研究, 发现甲苯-甲 酸乙酯-甲酸-丁酮( 体积比50∶8∶1. 5∶1) 展开系统有利于棉酚与棉籽油中其他物质分离, 展开效 果好, 故选其作为本实验的展开剂。
( 2) 实验发现 1 次展开, 斑点分离不完 全, 扫描效果差。增量 3 次展开, 充分利用薄
Determination of Free Gossypol in Cottonseed Oil by HPTLC
SHEN Jing YANG Shenga Y U Honga ZHANG Huang -T aoa
( D epartment of P har macy , T he Fif th Af f il iat ed H ospital , X inj iang M ed ical U niversity , Urumqi 830011, P . R. China) a( X inj iang Product Qualit y S uperv ision and T est Institute, U rumqi 830002, P. R . China)
点 10 L 上述对照品系列标准溶液于薄层板前半段。
另 取棉籽 油Ⅰ—Ⅴ, 按“2. 2. 2”项 下进 行处 理, 分别 点 10 L 于后半 段, 将薄层板按“2. 2. 3”项下进行展开 及显 色, 薄层色谱图见图 3; 按“2. 2. 4”项下进行测定, 薄层色 谱扫描图见图 4。根据外标法计算棉籽油Ⅰ—Ⅴ中游离棉 酚 含 量, 含 量 分 别 为 43. 3、41. 2பைடு நூலகம்56. 3、85. 6、9. 8
2 实验部分
2. 1 材料、试剂与仪器 棉籽油Ⅰ、棉籽油Ⅱ、棉籽油Ⅲ、棉籽油Ⅳ、棉籽油Ⅴ、购自新疆阿拉尔市, 均无脱毒处理。高效
薄层 G 板( 批号: 20090403, 规格: 20×10cm, 青岛海洋公司分厂) 。 棉酚对照品( 批号: 1517-200001, 规格: 20mg ) 由中国药品生物制品检定所提供; 甲苯、甲酸乙
联系人, 手机: ( 0) 13999897711; E-mail: m yw ay356@ yahoo. com. cn 作者简介: 沈静( 1977—) , 女, 乌鲁木齐市人, 主管药师, 硕士学位, 主要从事色谱分析及其它仪器分析方法的研究和应用工作。 收稿日期: 2010-03-22; 接受日期: 2010-06-02
( 新疆医科大学第五附属医院药剂科 乌鲁木齐市新市区河南路 118 号 830011) a( 新疆产品质量监督检验研究院 乌鲁木齐市新华南路 167 号 830002)
摘 要 利用高效薄层色谱法测定棉 籽油中游离棉酚的 含量。自动点样仪、自动展开仪、扫描仪均采 用瑞士卡 玛薄层色谱系统; 使用含 0. 5% CM C-N a 的硅胶 G 高效薄层板; 以甲苯-甲酸 乙酯-甲酸-丁酮( 体 积比 50∶8∶1. 5∶1) 为展 开剂; 饱和三氯化 锑氯仿溶 液为显色剂; 扫描 方式: 双波长 紫外反 射法; 检测波 长: 550nm , 参比波长: 750nm。结果表明棉酚对照品溶液 点样量在 0. 080—1. 28 g 范围内 与峰面积呈良好 的线性关系, r 为 0. 9949; 平均回收率( n= 6) 为 91. 5% —100. 2% 。本法操作简单、灵敏, 结果 准确可靠。
图 1 棉酚对 照品高效薄层展开图( 白光)
图 2 棉酚对照品高效薄层扫描色 谱图
3. 2 稳定性试验
将上述薄层板按“2. 2. 4”项下条件, 每隔 30min 扫描 1 次, 扫描 6 次, 结果在 30—180min 内, 5
第 1期
沈 静等: 高效薄层色谱法测定棉籽油中游离棉酚含量
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个斑点峰面积 RSD 依次为 2. 3% 、3. 1% 、1. 8% 、2. 9% 、4. 1% 。
表 1 本法的回收率与相对标 准偏差
( n= 5)
本底样品中棉酚量 ( g)
400
加入量
( g) 1000 2000 3000
实测棉酚量
( g) 1315±24 2404±18 3268±28
平均回收率 (%)
91. 5 100. 2
95. 6
RSD (%)
2. 6 0. 89 0. 97
3. 5 棉籽油中游离棉酚含量测定
酯、甲酸、丁酮、三氯化锑、氯仿、乙醇均为分析纯。 L INOM AT 5 薄层自动点样器 ( 瑞士卡玛公司) ; T L C SCANNER3 薄层扫描仪( 瑞士 卡玛公
司) ; REPROST AR3 薄 层 成像 系 统( 瑞 士 卡玛 公 司) ; ADC2 薄层 展 开 系统 ( 瑞 士卡 玛 公 司) ; GL -20G离心机( 上海安亭科学仪器厂) ; SK-1 混匀器( 江苏金坛医疗仪器厂) ; BS 224S 电子天平 ( 北京 Sart orius 公司) 。
层板, 使得不同斑点分离更好而且斑点浓集, 展开效果更好, 故采用增量 3 次展开。
( 3) 显色方式实验发现, 利用浸入式方 式显色, 显色充分, 10s 显色, 快捷、方 便、不 污染环境。
( 4) 本实验表明, 用薄层扫描法测定棉 籽油中游离棉酚含量, 方法准确、简单、可行。
图 4 棉酚对照品及样品高效薄层扫描色谱图
Abstract T he cont ent of free g ossy pol in cott onseed oil w as determined by HP T L C. T he CAMAG T L C sy stem consist s of aut omatic spott ing, aut omatic developing , autom at ic scanner, et c. T he experim ental condit ions are as follow s: silica g el thin lay er w ith 0. 5% CM C-Na, methylbenzene-ethyl formate-formic acid-butanone ( 50 ∶ 8 ∶ 1. 5 ∶ 1 ) as developing solvent , chlorof orm solution of sat urat ed antimony trichloride as colorat ion. Quant it at iv e measurement w as
2. 2. 3 薄层色谱条件
薄层板: 青岛海洋公司分厂高效硅胶 G 板( 规格: 20×10cm) 。展开剂: 甲苯-甲酸乙酯-甲酸-丁 酮( 体积比 50∶8∶1. 5∶1) 。展开方式: 3 次增量展开, 即展开至薄层板长度的 30、60、90mm 时分别 取出吹干。显色剂: 饱和三氯化锑氯仿溶液; 显色方式: 浸入式显色 10s 取出, 擦干背面显色剂置于 加热板上 105℃加热 3m in。
2. 2. 4 薄层扫描条件
经对棉酚对照品溶液的薄层板点和供试品溶液薄层斑点的对应点进行扫描, 确定扫描方式: 双 波长紫外反射法, 以 550nm 为测定波长, 参比波长: 750nm; 狭缝宽度: 10mm ×0. 2mm。
3 结果与讨论
3. 1 校准曲线及线性范围
分别准确吸取对照品储备液 1、2、4、8、16m L 置于 25mL 容量瓶中, 丙酮定容, 得浓度分别为 8、 16、32、64、128 g·mL - 1的系列对照品溶液, 用自动点样器分别吸取上述系列对照品溶液点于同一 薄层板上, 条带点样, 带宽 10mm, 点样量 10 L , 在卡玛展开系统按上述薄层条件 3 次增量展开; 取 出吹干, 将薄层板浸入饱和三氯化锑氯仿溶液中 10s, 取出, 背面擦干后于加热板 105℃加热 3min。 用另一相同大小玻璃板覆盖, 边缘密封, 放置 10min 后, 卡玛成像系统以 366nm 光源进行照相, 如 图 1, 按上述薄层扫描条件进行扫描, 如图 2, 以斑点面积积分值为纵坐标( y ) , 点样量为横坐标( x ) 作 图, 浓 度 8—128 g · mL - 1 范 围 内 呈 良 好 的 线 性 关 系, 回 归 方 程: y = 146. 7x - 1350. 1, r= 0. 9949。
关键词 棉籽油; 游离棉酚; 高效薄层色谱 中图分类号: O 657. 7 文献标识码: B 文章编号: 1004-8138( 2011) 01-0235-04
1 引言
棉酚又称棉籽醇, 集中在棉籽仁的球状色腺体中, 是一种姜黄色无气味的多酚类物质。其毒性 能引低血钾症和男性不可逆性不孕[ 1] , 大量棉酚进入消化道, 可刺激胃肠黏膜, 引起胃肠炎。吸收入 血液中, 能损害心、肝、肾等器官。正是由于棉酚的以上危害, 近年来, 国家制定了棉籽油中游离棉酚 的测定方法[ 2] 、棉籽饼中游离棉酚的测定方法和脱酚方法[ 3] 。目前棉酚含量测定的方法有紫外分光 光度法[ 4] 、高效液相色谱法[ 5] 、薄层色谱法[ 6] , 但利用薄层色谱法测定棉籽油中游离棉酚未见报道, 本文用薄层扫描法对棉籽油中游离棉酚含量进行测定, 结果令人满意。该法方便、快捷、准确, 可作 为棉籽油中游离棉酚含量测定方法。