肿瘤靶向治疗,基因检测ppt课件

STMN1表达检测意义
• 疗效：
低表达接受长春瑞滨/顺铂治疗 的效果较好，中位生存期较长；
STMN1高表达接受长春瑞滨/顺铂 的疗效较差。 • 预后： 表达水平越高，患者的生存率越 低，肿瘤发生转移的风险越高。
Elizabeth A et al. Cancer Res. 2002;62:6864-6869
检测方法：RT-PCR, FISH, PCR-测序等
靶向EGFR的抗肿瘤药物
类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR －TKI)
作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活 性，阻断EGFR信号通路； 药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替 尼（罗氏）。
类别二：单克隆抗体(mAb)
作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与 EGFR的结合； 药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗 氏）。
Ion Torrent半导体测序原理
Ion Torrent半导体测序平台及芯片
PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb）
目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测
基因表达量（mRNA）检测
——指导个体化化疗
可使标准化疗方案得到个体化应用
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HER2基因检测
——乳腺癌患者预后指标及曲妥珠单抗治疗的 靶点 ——胃癌曲妥珠单抗靶向治疗的靶点
FDA 2013年关于胃癌HER2检测流程建议
ASCO/CAP2013指南关于乳腺癌HER2检测推荐：
IHC检测HER2蛋白表达水平 FISH检测HER2基因扩增
靶向药物敏感性解决方案
化疗药物敏感性解决方案
一个PCR体系中：1对引物，1条探针
每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！
应用：对微量突变进行检测。
SNP位点检测应用
EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较
测序技术发展历程
Ion Semiconductor Sequencing
（2011）
Next-Gen Sequencing （2005以后） Sanger Sequencing （1977）
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Q-PCR检测基因表达数据库
基础：>5000例样本
人种：中国患者样本
标准：正态分布 定位：精确到1% 统计：p<0.05
RRM1表达与吉西他滨疗效相关的临床数据
NCCN 2012年版临床治疗指南明确 指出： 患者接受吉西他滨化疗前进行 RRM1 mRNA检测可提高治疗有 效率和患者生存率。
Biblioteka Baidu
RRM1 mRNA
方法：
2条正向引物（针对正
常DNA，突变DNA）
1条反向引物
2个平行的PCR反应
普通PCR仪
TaqMan-ARMS技术
TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了 ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。
Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。
等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA） 建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统 （Amplification Refractory Mutation System ， ARMS）、等位 基因特异性PCR（Allele Specific PCR， ASPCR）等。
肿瘤靶向治疗, 基因检测
肿瘤分子诊断 1.肿瘤个体化治疗 循环肿瘤细胞
2. 肿瘤个体化治疗 发展趋势
临床上治疗肿瘤的方法
• 患者对药物是否敏感？毒性是否可耐受？ • 患者治疗后转移复发风险有多高？
个体化治疗：医学概念。应用它不仅降低并发症的发生,还
降低医疗费用。 肿瘤标准化治疗
病理分型
Ⅰ期患者：手术/化疗
No. Patients
Median Survival
P
<1.4
>1.4
8
8
15.5 mos
6.8 mos
0.0028
ERCC1表达与铂类药物疗效相关 的临床数据
ERCC1低表达患者，能从铂类辅助化疗中获益.
BRCA1/2表达与铂类药物疗效 相关的临床数据
BRCA1过度表达
•铂类耐药的预测因子 •抗微管类药物的敏感因子
Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术 局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向
肿瘤个体化治疗
分子分型
标本→基因检测→遗传特性 →选择化疗/靶向药物
克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因
EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染 色体的p21和p23带
已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体： v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7
World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.
基因KRAS热点突变位点
KRAS主要突变在： 外显子2（密码子12，13 ），3（密码子61） 10
个体化检测平台
基因突变检测
——ARMS技术，测序等
ARMS技术——普通PCR
基因EGFR热点突变位点
•EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21 •耐药突变：T790M
靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测
NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药 之前须检测K-ras基因突变检测； 野生型 突变型 K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱 必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治 疗费用； 中国人群中K-ras基因突变率15% ！ 15%的病人不应该使用爱必妥！
TS高表达影响氟类和培美曲塞药效
• 低TS mRNA水平的肿瘤 患者接受氟类化疗的效 果较好，中位生存期较 长。 • TS低表达的患者对培 美曲赛的疗效好。
Shirota Y et al. J Clin Oncol. 2001;19:4298-304
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TUBB3高表达对紫杉醇和长春碱类不敏感
• TUBB3阳性表达是抗微管类药物敏感预测因子
mRNA检测主要技术特色
• 采用荧光定量PCR技术，采用内参比 RNA作为质控对照，应用beta-actin作 为内对照，定量检测检测目的基因 mRNA表达水平。
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适用于各种肿瘤组织检测，包括石蜡标 本、穿刺标本、冰冻活检标本等。
• 国内采用校准RNA（Calibrator RNA）方法进行基因表达定量。