凝胶柱层析的操作与应用
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固定相（凝胶）是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状 结构的物质，凝胶的每个颗粒的细微结构就如一个筛子，小 的分子可以进入凝胶网孔，而大的分子则排阻于凝胶颗粒之 外，因而具分子筛的性质。又因整个层析过程一般不变换洗 脱液，好像过滤一样，故也称凝胶过滤。
（2）湿法装柱 将吸附剂加入合适量的色谱最初用洗脱剂调成稀糊 状，先把放好棉花、砂子的色谱柱下口打开，然后 徐徐将制好的糊浆灌人柱子。注意，整个操作要慢， 不要将气泡压人吸附剂中，而且要始终保持吸附剂 上有溶剂，切勿流干，最后让吸附剂自然下沉。当 洗脱剂刚好覆盖吸附剂平面时，关紧下口活塞。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
二、离子交换层析剂的种类
（一）离子交换剂的基质 （二）离子交换剂的电荷基团 根据与基质共价结合的电荷基团的性质，可以将离子交换 剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。 （三）交换容量 交换容量是指离子交换剂能提供交换离子的量，它反映离 子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。通常所说的离子 交换剂的交换容量是指离子交换剂所能提供交换离子的总 量，又称为总交换容量，它只和离子交换剂本身的性质有 关。
二、纸层析基本操作技术
• • • • （一）滤纸 （二）展开剂 （三）操作方法 （四）在抗生素中的应用
三、薄层层析基本操作技术
（一）基本原理 （二）吸附剂和展开剂的选择 （三）基本操作 1.薄层板的制备 2.样品的预处理 3.点样、展层与显色 4.影响Rf的主要因素 5.薄层色谱法的应用
第三节 吸附柱层
（三）层析的基本概念
• • • • • • 1.固定相 2.流动相 3.分配系数及迁移率（或比移值） 4.分辨率（或分离度） 5.正相色谱与反相色谱 6.操作容量（或交换容量）
二、层析分离技术的分类
（一）依操作形式分 分为纸层析、薄层层析和柱层析。
（二）依流动相分 根据流动相的形式分类，层析可以分为液相层析和气 相层析。
（一）离子交换柱层析的操作 1．层析柱 2．平衡缓冲液 3．上样 4．洗脱缓冲液 5．洗脱速度 6．样品的浓缩、脱盐 （二）离子交换柱层析的应用 1.水处理 2.分离纯化小分子物质 3.分离纯化生物大分子物质
第五节 凝胶柱层析
一、凝胶层析的原理
凝胶层析又称分子排阻层析、分子筛层析或凝胶过 滤。它是指混合物随流动相经固定相（凝胶）的层 析柱时，混合物中各组分按其分子大小不同而被分 离的技术。
（三）依分离机理分 1.吸附层析 2.分配层析 3.凝胶过滤 4.离子交换层析 5.亲和层析 6.疏水层析
第二节 层析分离的基本操作技术
一、柱层析基本操作技术 （一）柱层析的基本装置 1、固定相 2、流动相 3、收集系统 4、检测系统 5、蠕动泵
（二）柱层析系统的基本操作技术
1.装柱 2.平衡 3.加样 4.洗脱 5.流速控制 6.分部收集 7.洗脱峰检测、合并收集 8.层析介质的再生
第四节 离子交换柱层析
• 一、原理与特点
离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂 的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相 是离子交换剂，它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物
基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。
电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行 离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子， 它能与溶液中其他的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离 子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用， 称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电 的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。
第七章 层析分离技术
第一节 层析的基本原理与分类
• 一、层析分离的基本原理与特点 • （一）基本原理 • 层析分离是一种物理的分离方法，利用多 组分混合物中各组分物理化学性质的差别， 使各组分以不同的程度分布在两个相中。
• （二）层析分离具有如下基本特点 • 优点：（l）分离效率高。 • （2）应用范围广。 • （3）选择性强。 • （4）设备简单，操作方便。 • 缺点：处理量小、操作周期长、不能连续 操作，因此主要用于实验室，工业生产上 还应用较少。
上 样
三、吸附柱层析的基本操作与应用
在装好吸附剂的色谱柱中缓缓加入洗脱剂，进行梯 度洗脱，各组分先后被洗出。若用50g吸附剂，一般 每份洗脱液量常为50rnLo但若所用洗脱剂极性较大 或各成分的结构很近似时，每份的收集量要小。
洗 脱Байду номын сангаас
整个操作过程必须注意不使吸附柱表面的溶液流干， 即吸附柱上端要保持一层溶剂。此外，应控制洗脱 液的流速，流速不应太快。着流速过快，柱中交换 来不及达到平衡，因而影响分离效果。
• 一、吸附层析的原理与特点 基本原理同吸附薄层色谱法。 • 二、吸附剂的选择 • 常用的吸附剂除氧化铝、硅胶和聚酞胺外， 还有活性炭。 • 吸附剂的种类很多，而对吸附剂的选择尚 无固定的法则，一般需通过小样实验来确 定。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
（1）干法装柱
装 柱
在柱下端加少许棉花或玻璃棉，再轻轻地撒上一层 干净的砂粒，打开下口，然后将吸附剂经漏斗缓缓 加入柱中，同时轻轻敲动色谱柱，使吸附剂松紧一 致，最后，将色谱柱用最初洗脱剂小心沿壁加入， 至刚好覆盖吸附剂顶部平面，关紧下口活塞。
（1）湿法上样 把被分离的物质溶在少量色谱最初 用的洗脱剂中，小心加在吸附剂上层，注意保持吸 附剂上表面仍为一水平面，打开下口，待溶液面正 好与吸附剂上表面一致时，在上面撒一层细砂，关 紧柱活塞口。
（2）干法上样 多数情况下，被分离物质难溶于最 初使用的洗脱剂，这时可选用一种对其溶解度大而 且沸点低的溶剂，取尽可能少的溶剂将其溶解。在 溶液中加入少量吸附剂，拌匀，挥干溶剂，研磨使 之成松散均匀的粉末，轻轻撒在色谱柱吸附剂上面， 再撒一层细砂。
（四）离子交换剂的选择、处理和保存 1、离子交换剂的选择 取决于被分离的物质在其稳定的pH值下所 带的电荷，离子交换层析柱的分辨率和流 速也都与所用的离子交换剂颗粒大小有关。 2、离子交换剂的处理和保存 处理：干粉状的离子交换剂首先要进行膨 化，再用酸碱分别浸泡 3、离子交换树脂的选择依据
三、离子交换柱层析的操作与应用
（2）湿法装柱 将吸附剂加入合适量的色谱最初用洗脱剂调成稀糊 状，先把放好棉花、砂子的色谱柱下口打开，然后 徐徐将制好的糊浆灌人柱子。注意，整个操作要慢， 不要将气泡压人吸附剂中，而且要始终保持吸附剂 上有溶剂，切勿流干，最后让吸附剂自然下沉。当 洗脱剂刚好覆盖吸附剂平面时，关紧下口活塞。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
二、离子交换层析剂的种类
（一）离子交换剂的基质 （二）离子交换剂的电荷基团 根据与基质共价结合的电荷基团的性质，可以将离子交换 剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。 （三）交换容量 交换容量是指离子交换剂能提供交换离子的量，它反映离 子交换剂与溶液中离子进行交换的能力。通常所说的离子 交换剂的交换容量是指离子交换剂所能提供交换离子的总 量，又称为总交换容量，它只和离子交换剂本身的性质有 关。
二、纸层析基本操作技术
• • • • （一）滤纸 （二）展开剂 （三）操作方法 （四）在抗生素中的应用
三、薄层层析基本操作技术
（一）基本原理 （二）吸附剂和展开剂的选择 （三）基本操作 1.薄层板的制备 2.样品的预处理 3.点样、展层与显色 4.影响Rf的主要因素 5.薄层色谱法的应用
第三节 吸附柱层
（三）层析的基本概念
• • • • • • 1.固定相 2.流动相 3.分配系数及迁移率（或比移值） 4.分辨率（或分离度） 5.正相色谱与反相色谱 6.操作容量（或交换容量）
二、层析分离技术的分类
（一）依操作形式分 分为纸层析、薄层层析和柱层析。
（二）依流动相分 根据流动相的形式分类，层析可以分为液相层析和气 相层析。
（一）离子交换柱层析的操作 1．层析柱 2．平衡缓冲液 3．上样 4．洗脱缓冲液 5．洗脱速度 6．样品的浓缩、脱盐 （二）离子交换柱层析的应用 1.水处理 2.分离纯化小分子物质 3.分离纯化生物大分子物质
第五节 凝胶柱层析
一、凝胶层析的原理
凝胶层析又称分子排阻层析、分子筛层析或凝胶过 滤。它是指混合物随流动相经固定相（凝胶）的层 析柱时，混合物中各组分按其分子大小不同而被分 离的技术。
（三）依分离机理分 1.吸附层析 2.分配层析 3.凝胶过滤 4.离子交换层析 5.亲和层析 6.疏水层析
第二节 层析分离的基本操作技术
一、柱层析基本操作技术 （一）柱层析的基本装置 1、固定相 2、流动相 3、收集系统 4、检测系统 5、蠕动泵
（二）柱层析系统的基本操作技术
1.装柱 2.平衡 3.加样 4.洗脱 5.流速控制 6.分部收集 7.洗脱峰检测、合并收集 8.层析介质的再生
第四节 离子交换柱层析
• 一、原理与特点
离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂 的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相 是离子交换剂，它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物
基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。
电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行 离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子， 它能与溶液中其他的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离 子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用， 称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电 的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。
第七章 层析分离技术
第一节 层析的基本原理与分类
• 一、层析分离的基本原理与特点 • （一）基本原理 • 层析分离是一种物理的分离方法，利用多 组分混合物中各组分物理化学性质的差别， 使各组分以不同的程度分布在两个相中。
• （二）层析分离具有如下基本特点 • 优点：（l）分离效率高。 • （2）应用范围广。 • （3）选择性强。 • （4）设备简单，操作方便。 • 缺点：处理量小、操作周期长、不能连续 操作，因此主要用于实验室，工业生产上 还应用较少。
上 样
三、吸附柱层析的基本操作与应用
在装好吸附剂的色谱柱中缓缓加入洗脱剂，进行梯 度洗脱，各组分先后被洗出。若用50g吸附剂，一般 每份洗脱液量常为50rnLo但若所用洗脱剂极性较大 或各成分的结构很近似时，每份的收集量要小。
洗 脱Байду номын сангаас
整个操作过程必须注意不使吸附柱表面的溶液流干， 即吸附柱上端要保持一层溶剂。此外，应控制洗脱 液的流速，流速不应太快。着流速过快，柱中交换 来不及达到平衡，因而影响分离效果。
• 一、吸附层析的原理与特点 基本原理同吸附薄层色谱法。 • 二、吸附剂的选择 • 常用的吸附剂除氧化铝、硅胶和聚酞胺外， 还有活性炭。 • 吸附剂的种类很多，而对吸附剂的选择尚 无固定的法则，一般需通过小样实验来确 定。
三、吸附柱层析的基本操作与应用
（1）干法装柱
装 柱
在柱下端加少许棉花或玻璃棉，再轻轻地撒上一层 干净的砂粒，打开下口，然后将吸附剂经漏斗缓缓 加入柱中，同时轻轻敲动色谱柱，使吸附剂松紧一 致，最后，将色谱柱用最初洗脱剂小心沿壁加入， 至刚好覆盖吸附剂顶部平面，关紧下口活塞。
（1）湿法上样 把被分离的物质溶在少量色谱最初 用的洗脱剂中，小心加在吸附剂上层，注意保持吸 附剂上表面仍为一水平面，打开下口，待溶液面正 好与吸附剂上表面一致时，在上面撒一层细砂，关 紧柱活塞口。
（2）干法上样 多数情况下，被分离物质难溶于最 初使用的洗脱剂，这时可选用一种对其溶解度大而 且沸点低的溶剂，取尽可能少的溶剂将其溶解。在 溶液中加入少量吸附剂，拌匀，挥干溶剂，研磨使 之成松散均匀的粉末，轻轻撒在色谱柱吸附剂上面， 再撒一层细砂。
（四）离子交换剂的选择、处理和保存 1、离子交换剂的选择 取决于被分离的物质在其稳定的pH值下所 带的电荷，离子交换层析柱的分辨率和流 速也都与所用的离子交换剂颗粒大小有关。 2、离子交换剂的处理和保存 处理：干粉状的离子交换剂首先要进行膨 化，再用酸碱分别浸泡 3、离子交换树脂的选择依据
三、离子交换柱层析的操作与应用