5、蛙坐骨神经腓肠肌标本制作与刺激反应

蛙腓肠肌标本的制作和刺激与反应的关系

（一、蛙反射实验及反射弧的分析）

一、实验目的

了解反射弧的组成部分，明确反射弧的完整性与反射活动的关系二、实验原理

反射弧：完成反射活动所需的结构基础（感受器、传入神经、神经中枢、传出神经、效应器）

三、实验步骤及结果分析

将蟾蜍悬挂在铁支架上

1、分别将左右后肢趾浸入剩有浓度为1%的硫酸的玻璃皿

结果：产生屈腿反射分析：因反射弧完整

2、去感受器：在左肢趾关节上做个环形皮肤切口，将切口以下的皮肤全部剥除，

用浓度为1%的硫酸浸泡趾尖

结果：没有屈腿反射活动出现。

分析：破坏了脚掌和脚趾皮肤中的感受器，反射弧不完整，不能引起屈腿反射。

3、剪断传入和传出神经：剪断右侧坐骨神经，用连续阈上刺激右后肢趾的皮肤

结果：无屈腿反射

分析：反射弧的传入神经破坏，造成反射弧不完整

4、损毁中枢：以探针捣毁蟾蜍的脊髓

结果：刺激躯体任何部位都无反射活动出现。

分析：神经中枢破坏，反射弧不完整。

四、注意事项

用硫酸刺激后，要立即用清水冲洗，并用纱布擦干，以免硫酸被稀释。

剥离神经时，要用玻璃分针，不要用金属器械刺激神经

（二、腓肠肌的制备）

一、实验目的

•掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。

•应用电刺激方法测出肌肉阈刺激、阈上刺激与最适刺激的强度值

•了解刺激与肌肉收缩的关系

二、实验原理

蛙类坐骨神经－腓肠肌标本是研究神经冲动和肌肉收缩机能等生理试验最常用的试验

材料，常用于研究兴奋性、兴奋过程、刺激的一些规律和特性。

三、实验用品器材

•实验动物：蟾蜍

•试剂与器材：计算机、BL-420F生物信号处理系统、手术剪、手术镊、玻璃分针、•蛙板、连接导线、烧杯、任氏液

•棉球、棉线等

四、实验操作步骤

㈠坐骨神经-腓肠肌标本的制备

1、破坏脑和脊髓

2、去除躯干上部、皮肤及脏

3、剥离皮肤

将标本放在盛有任氏液的玻璃器皿中。将手及使用过的全部器械冲洗干净。

4、分离双下肢

将标本提起，剪去向上突起的骶骨，然后沿正中线将脊柱剪为两半，并从耻骨联合处剪开两侧下肢，浸入盛有任氏液的培养皿中使用。

5、辨认蛙后肢主要肌肉，找出腓肠肌。

6、游离坐骨神经和腓肠肌

取一侧下肢固定于蛙板上，固定时，坐骨神经、腓肠肌向上，先用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经腹腔段，分离坐骨神经直至腘窝（不要伤及神经）；再用玻璃分针分离腓肠肌，并在肌腱上穿线结扎。

7、剪去其他不用的组织

在坐骨神经两端各留一块骨头和肌肉，以便于固定。

注意：剥离时一定要保持标本完整性；尽可能用玻璃分针，少用镊子，避免刺激神经。

9、将坐骨神经-腓肠肌标本固定于蛙板上，把跟腱端的接线与力换能器相连，调节高度与弛度。

实验项目

刺激强度与反应关系

刺激腓肠肌：改变刺激强度（从弱到强），观察对肌肉收缩的影响；找出阈强度、最适刺激强度；

刺激神经：改变刺激强度（从弱到强），观察对肌肉收缩的影响；找出阈强度、最适刺激强度；

刺激频率与反应的关系

五、注意事项

制备标本及实验中，随时用任氏液润湿神经和肌肉，防止干燥。

刺激参数确认后，再进行刺激，防止神经肌肉损伤。

每改变一次刺激频率后，应休息0.5-1 min, 每次刺激不要超过3-4 秒，以免标本疲劳。

六、实验结果及分析

（一）刺激频率与骨骼肌收缩反应的关系

腓肠肌标本刺激频率与骨骼肌收缩反应的关系：

刺激频率渐渐变大

单刺激完全强直收缩不完全强直收缩

结论：

1、随刺激频率的增大，骨骼肌分别进行单收缩、不完全强直收缩、强直收缩，后二者是新的收缩过程与上次尚未结束的收缩过程发生综合的结果。

2、单收缩、不完全强直收缩、强直收缩三者中强直收缩的收缩幅度最大，不完全强直收缩其次，单收缩再次。

3、不完全强直收缩是刺激落在前一次收缩过程的舒期；强直收缩是每一个刺激都落在前一个收缩过程的收缩期

（二）刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系结果：

蛙肌肉电刺激

单刺激

肌肉刺激强度不同

刺激强度加强

阈刺激强度为0.035V，最适刺激强度为0.125V。最大反应的收缩幅度为17.33g。结论：当给予阈下刺激时，不能引起肌肉收缩反应；当给予阈刺激时，引起肌肉的最小收缩；

当给予的刺激强度由阈刺激至最适刺激逐渐增加时，肌肉的收缩反应随之升高；

当给予的刺激强度达到最适刺激后，肌肉的收缩幅度不再随刺激强度的增加而升高。

蛙神经刺激

分析：神经刺激引起的动作电位较肌肉刺激弱，幅度较小且不明显，可能是坐骨神经分离时受到损伤，影响了实验结果。