ELISA检测方法的建立及其在食品分析中的应用

豆，其原理就是用ELISA方法，用特异性抗体检测RounDup大豆 的特异基因产物CP4-EPSPS蛋白。
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产量、生长高度、结穗高度等；还有土地状况，包括种植规模、 专业化生产的程度、农田基本建设、机耕道等因素直接影响不同 机具在不同地区的适用性。此外还有耕作模式、产业结构、经济 环境、人文环境、配套机具和服务等。以上九种因素可归为两 类，一类是与作业直接有关的作业环节因素，如地区自然条件、 作物、耕作模式、土地状况、配套机具；另一类为保障作业的外 部环境因素．如人文环境、经济环境、产业结构、服务。影响适 用性的因素很复杂，研发、生产、销售、服务、鉴定、推广部门 都应当研究这些问题，以全面提高产品的适用性[3]。 3.研究历程 农业机械适用性事关农民的利益以及农业生产稳定。从农业 机械的生产制造阶段，我们就必须考虑到它的适用性问题。我国 对农机适用性研究总共经历了三个历程： 第一阶段是对拖拉机的适用性研究，从上个世纪 60 年代开 始，国家实施计划性农机制造企业新建或改造、扩建，一些规模 较小的县、社农具制造厂就此诞生，第一拖拉机制造厂、天津拖 拉机制造厂、江西拖拉机制造厂和鞍山红旗拖拉机厂等一批农机 制造骨干企业陆续投产，农机工业蓬勃发展[4]。在这一阶段，我 国生产的农业机械产品种类非常少，一些简单的农业机械，如拖 拉机，开发研制后直接卖给农民使用。受地域、农时及农艺的差 异的影响，部分农业机械甚至不能正常使用，不仅造成经济损失 还直接影响到农业生产。而当时专家学者对于农业机械的适用性 的研究也大多停留在拖拉机上； 第二阶段适用性研究范围开始扩大，改革开放后，随着经济 体制的改革，农业机械化的市场化发展进程不断加快，国家开始 减少对农业机械化的直接投入，同时也放宽对农机工业的计划管 制，农民可以自主购买和使用农业机械，农业机械经营形式日趋
农业机械的适用性是指在一定的作业条件下，农业机械性能 满足农艺要求的能力，也可以说是农业作业性能相对于作业条件 的协调融合的程度，是对应于一定的作业条件而言的，有其相对 性和局限性[1]。农业机械适用性代表着农业机械的基本性能，关 系到其能否满足农业生产需要，进而提高农民收入。 随着农业生产力的提高和产业结构的调整，农机产品的市场 需求不断增加，越来越多的新型农机产品研发上市，大大地推动 了我国农业水平的发展。然而我国市场条件不够完善，没有形成 健全的市场秩序，加之企业的经济实力和技术水平相对较低，一 些农机产品研制成功后，未进行适用性评价就投放到市场上，结 果导致部分农机产品并不能较好的满足农业生产需要，不仅给农 民用户造成经济损失，还影响了农业生产。一直以来，我国缺乏 对农机适用性评价方法的深入研究，国内目前尚未形成统一的规 范化的农机适用性评价方法，在一定程度上影响了农机适用性评 价工作的开展。 一、农业机械适用性概述 1.概念 作业条件是指农业机械作业时，对其作业效果产生影响的工 作条件，任何一种农业机械进行作业时，都是在一定的作业条件 下进行的，每一种作业条件都由多种因素组成，当任何一种因素 发生变化时，作业条件也随之而变[2]。良好的农业机械就是要有 较好的适用性，即使其在各种不同的作业条件下都能正常工作。 2.影响因素 由于影响农业机械适用性的因素很多，故很难对其进行量化 研究。大概包括以下几个方面：一是地区自然条件，不同地区的 土壤和气候条件不同，比如地形、土壤类型、气候、土质等；一 是作物，不同的作物品种有不同的生长特性，这主要指成熟期、
免疫分析方法是基于抗原、抗体反应的特异性和敏感性， 同时采用酶或其他有色或发光物质标记抗原或抗体从而进行免 疫定性或定量检测。免疫反应涉及抗原抗体分子间高度互补的 立体化学、静电、氢键、范德华力和疏水区域的综合作用，其 选择性和灵敏度要高于其他的理化方法，组织中其他物质对测定 结果的干扰很小。因此只需要进行简单的前处理，而且适合大量 样本的现场检测，在药物残留检测中得到广泛的应用，如放射免 疫法（RIA） 、酶联免疫吸附法（ELISA） 、固相免疫传感器、胶 体金免疫层析技术等。目前研究应用较多的是酶联免疫吸附法 （ELISA）[1] [2]和胶体金快速检测试纸条。 一、ELISA（酶联免疫吸附方法）概述 1. ELISA基本原理 ELISA法是以酶为标记指示物，以抗原抗体免疫反应为基础 的固相吸附测定方法。ELISA测定试剂包括三个部分，即固相支 持物及包被的抗原及抗体、酶标记的抗体或抗原和酶反应底物。 整个测定过程中，抗原抗体结合反应在固相支持物上进行，结合 在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗 原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。 在测定时，待测样品（测定其中的抗体或抗原）与固相载体 表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗 原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗体或 抗原，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上酶的量与样 品中受检物质的量成比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与样品中受检物质的量直接相关，故可 根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高， 间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2.ELISA法分类 ELISA法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。根据试剂的 来源和待测样品的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同 类型的检测方法。目前用于检验的主要类型有：双抗体夹心法测 抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞 争法测抗原、捕获包被法测抗体和ABS-ELISA法。 二、ELISA检测方法的建立 建立免疫检测方法的两种关键试剂是抗原和抗体，抗原和抗 体的质量对检测方法的成功建立起着决定性的作用。方法的建立 一般是通过各种免疫标记技术标记抗原或抗体，在一定的固相载 体上进行肉眼可见或可以通过仪器识别的抗原抗体反应。在此过 程中对各种耗材的选择和体系条件的优化，最终建立起具有一定 标准的检测某一目标物的免疫学检测方法。 1.人工抗原及其合成 抗原一般分为全抗原和半抗原，半抗原物质的分子质量较 小，单独作用时无免疫原性，仅有免疫反应性，不能刺激机体产 生抗体。这些半抗原必须连接到大分子载体上形成完整的抗原后 才能刺激机体产生相应的抗体。因此一般需要将半抗原与载体蛋 白偶联，才能具有免疫原性，刺激动物体产生抗体[3]。最常用的 载体蛋白质是牛血清蛋白[4]，偶联合成的方法一般是由半抗原上 的活性基团决定[5]，常用的方法有：混合酸酐法、碳二亚胺法、 戊二醛法、重氨化法、琥珀酸酐法、碳基二咪唑法和物理直接合
农家科技
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技 术研究
JISHUYANJIU
农业机械适用性评价方法探讨
山东ห้องสมุดไป่ตู้博兴县农机局 张增春
摘 要：随着我国农业现代化进程的不断加快，农业机械适用性问题越来越受到社会的普遍关注，人们对于农机适用性的评价方法也日益重视。本文介 绍了农业机械适用性的发展历程，分析了农机适用性评价方法的研究现状及存在的问题，并对未来农机适用性评价方法的研究趋势进行展望，希望能够对当 前农业机械适用性评价方法的研究提供参考。 关键词：农业机械；适用性；评价方法
技 术研究
JISHUYANJIU
ELISA 检测方法的建立及其在食品分析中的应用
江西赣州农业和粮食局 粮油质量监督检验站 姜兴华 朱小芳
摘 要：本文简述了ELISA基本原理，即以酶为标记指示物，以抗原抗体免疫反应为基础的固相吸附测定方法。阐述了ELISA 检测方法的建立及其在食 品分析中的应用。 关键词： ELISA ；原理；抗原；抗体；应用
成方法。 2.单克隆抗体的制备 杂交瘤细胞系所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同 质的抗体，即所谓单克隆抗体，简称单抗[6]。应用杂交瘤技术可 获得几乎所有抗原的单克隆抗体，只要这种抗原能引起小鼠的免 疫应答。 单克隆抗体由于纯度高、特异性强，可以提高各种血清学方 法检测抗原的敏感性及特异性。单克隆抗体的应用大大促进了药 物残留诊断或检测的准确性。它在药物免疫分析中的优势在于： 实验技术成熟、抗体纯度高、抗体特异性强、分析易标准化和规 范化。 单克隆抗体的制备主要包括动物免疫，小鼠血清检测，细胞 融合，杂交瘤细胞的培养和筛选，阳性杂交瘤细胞的冻存和扩大 培养，腹水单抗的制备、纯化和鉴定等[7]，其中动物免疫程序的 设计、杂交瘤细胞的制备和筛选至关重要[8]。 三、ELISA在食品分析中的应用 1.检测食品中的毒素 采用辣根过氧化氢酶标记高亲和力的黄曲霉毒素B1 抗体， 可以建立直接竞争抑制ELISA快速筛选法[9]，该法检测AFTB1 的 线性范围是 0.25-5.0mg/mL，灵敏度 12.5pg。利用进口的酶联法试 剂盒，可对十几株金黄色葡萄球菌株进行肠毒素的检测，最小检 测量可达 0.4ng/mL。结果与SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的结果一 致，整个测定过程仅为 4h，大大缩短了检测时间[10]。ELISA法还 可用于检测花生蛋白、棒子蛋白、藻毒素、贝毒和组胺。 2.检测食品中的残留农药 迄今为止，应用ELISA检测食品中的残留农药主要是除草 剂、杀菌剂和杀虫剂[11]。用抗杀虫眯单克隆抗体为试剂，可以建 立间接竞争法、直接竞争法和标记抗原竞争法等 3 种测出大米中 杀虫眯的ELISA法，使用直接竞争法的检出限为 0.05ng/g。 3.检测食品的微生物 沙门氏菌是引起细菌性食物中毒的主要致病菌之一，乳制品 的微生物检验必须包括沙门氏菌。沙门氏菌的直接ELISA法，敏 感度和特异性很好且分析时间大大缩短。Toresma通过磁性免疫融 合法将提取的单克隆抗体与磁性颗粒结合，可检测李斯特菌的存 在。Tsai等建立了检测奶酪和酸牛奶中常见的青霉、毛霉和曲霉 的ELISA法[12]。 4.检测食品中的其它成分 单克隆抗体的间接ELISA可检测猪肉中的热稳定性的肌肉蛋 白。牡蛎蛋白是牡蛎精粉的主要活性成分，可采用斑点酶联免疫 吸附法对牡蛎制剂进行专属鉴别及定量测定。另外，ELISA也可 用来检测食品加工中的磷酸丙糖异构酶、转谷氨酞胺酶含量的变 化以及丹贝生物活性成分之一大豆苷元的含量。 5.转基因食品的检测 从转基因技术诞生起，转基因的检测技术就随之建立，因为 在基因重组的技术中，离不开重组基因的检测和筛选。目前主要 有两类检测转基因的方法：基于特异性DNA片断的PCR检测技术 和基于特异性蛋白的ELISA检测方法。据报道，美国StrategiCIjignostics公司已开发出一种试剂盒，能简便地定性检测转基因大