应用药物基因组学研究硫嘌呤类药物的个体化治疗 PPT课件
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(6－MP) 硫唑嘌呤 （AZA
其他
硫嘌呤类药物临床运用
淋巴细胞白血病
风湿病 自身免疫性肝炎
器官移植 炎性肠病 克隆氏病
硫嘌呤类药物的代谢过程
AZA
xo
Thiouric acid
6-MP
TIMP
TPMT
6-MMP SAM
TGNs
硫嘌呤甲基转移酶存在遗传多态性和种族差别
▪ TPMT在白种人呈三态分布（88.7%,11%,0.3%) ▪ TPMT在美国黑人呈二态分布．
338 61
P460R 5’-GCCTTACACCCAGGTCTCTG -3’
10 P719F 5’-AAGTGTTGGGATTACAGGTG -3 ’ 273 60 P719R 5’-TCCTCAAAAACATGTCAGTGTG -3’
嘌呤类药物个体化治疗
▪ 1.进行个体化治疗的必要性 ▪ 2.进行个体化治疗方案的探讨
2
相对简单地运 用已知的基因 理论改善病人 的治疗
3
以药物效应及 安全性为目标， 研究各种基因 变异与药效及 安全性的关系
TPMT
测定红细胞法 筛查突变
PCR-RFLP
高效液相色谱法
PCR-SSCP
其他方法
DHPLC
测序,ASPCR 等
TPMT 活性分布多态性研究
方法
1． 样本处理 2 ．孵化 3 ．提取 4．测定
测定
HPLC进样分析 流动相:水:甲醇:三乙胺(76.8:23:0.2)
医学检测所
遗传变异 分子诊断
临床医生 优化治疗 方案
方案建议
增加剂量 减少剂量 换药
分子诊断书
药物作用受药物代谢、转运、靶点多态性控制
基因组 基因变异 (单核苷酸多态性)
药物代谢酶
药物转运体
药物靶点
药代动力学
药效动力学
药物疗效和毒性的个体差异
硫嘌呤类药物个体化治疗的研究基础
硫嘌呤类药物
6-硫鸟嘌呤 （６－TG) ６－巯基嘌呤
硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)的活性与硫嘌呤类药 物的疗效、毒副作用密切相关.
TPMT酶活性低下而造成 的药物毒副作用可导致 死亡；
TPMT酶活性较高则硫嘌 呤类药物用量不足又会 使疾病复发
研究的主要内容
▪ 患者TPMT遗传多态性特征 ▪ 硫嘌呤类药物的个体化治疗
硫嘌呤甲基转移酶多态 性分析方法
药物疗效的影响因素
遗传背景 并发症
年龄
治疗效果 不良反应
性别 肝肾功能
药物相互作用
营养状况
疾病的多样性
药物作用的多基因本质
疾病的病源基因
治疗作用 不良反应
宿主易感基因
药物代谢和转运基因
药物受体和靶位基因
安全有效
不良反应
安全有效
+ 越强越好
个体化给药
-
不良反应
越小越好
药物基因组学与基因学
1
药物基因组学 不是以发现人 体基因组基因 为主要目的
应用药物基因组学 研究硫嘌呤类药物的个体化治疗
主要内容
▪ 1药物遗传基因组学简介 ▪ 2硫嘌呤类药物个体化治疗
个体化治疗
新的医学模式:个体化治疗 （Personalized Therapy），根据 分子诊断提出治疗方案
诊断
分子诊断预测反应
治疗
理想反应
打破试误医学的循环
个体化治疗临床服务
临床诊断
流速:1.0ml/min 紫外检测波长:290nm
TPMT 基因多态性研究
实验方法
▪ 1.外周血DNA提取 ▪ 2. TPMT基因型的检测
基因型检测
DNA(40ulTE溶解,-20℃保存至处理)
ASPCR
PCR--RFLP
TPMT*2 TPMT*3A TPMT*3B TPMT*3C TPMT*1
进行个体化治疗的必要性
▪ 收集治疗中发生不良反应病例(观察组)。 ▪ 收集治疗中无发生不良反应病例(对照组)。
比较对照组和研究组 TPMT表型和基因型特征
硫嘌呤类药物的个体化治疗
▪ 个体化治疗指标的确立 ▪ 个体化治疗方案的探索
个体化治疗指标的确立
▪ 检测TPMT表型、基因型，监测硫嘌呤 类药物治疗中，TGNs的变化及白细胞 数和不良反应情况。
引物序列及PCR反应参数
外显子 引物名称 引物序列
产物长度 解链温度
5 P2W 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTG-3’
254
58
P2M 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTC-3’ 254
58
P2C 5’-TAAATAGGAACCATCGGACAC-3’
7 P460F 5’-GGGACGCTGCTCATCTTCT -3’
50 100 150 200 250
发生6-MP不良反应为研究组
19例发生严重不良反应。 1）骨髓造血系统损害 9例 2）脱发 16例 3）上呼吸道感染 9例 4）大叶性肺炎5例 5）下呼吸道感染4例
毒性和疗效观察
▪ 血象、白细胞记数、骨髓涂片观察
统计与分析
▪ 用SPSS10.0软件包对数据进行统计分析，两 样本比较做Dunnet t检验，多样本比较采用 方差分析。
个体化治疗尝试
▪ 参考TPMT基因型结果，在TPMT活 性和TGNs监测下，进行硫嘌呤类 药物个体化治疗的尝试。
红细胞裂解液样本色谱图
６-MMP标准曲线
300000 250000 200000 150000 100000
50000 0
0
y = 1205.6x + 4829.7 R2 = 0.9975
其他
硫嘌呤类药物临床运用
淋巴细胞白血病
风湿病 自身免疫性肝炎
器官移植 炎性肠病 克隆氏病
硫嘌呤类药物的代谢过程
AZA
xo
Thiouric acid
6-MP
TIMP
TPMT
6-MMP SAM
TGNs
硫嘌呤甲基转移酶存在遗传多态性和种族差别
▪ TPMT在白种人呈三态分布（88.7%,11%,0.3%) ▪ TPMT在美国黑人呈二态分布．
338 61
P460R 5’-GCCTTACACCCAGGTCTCTG -3’
10 P719F 5’-AAGTGTTGGGATTACAGGTG -3 ’ 273 60 P719R 5’-TCCTCAAAAACATGTCAGTGTG -3’
嘌呤类药物个体化治疗
▪ 1.进行个体化治疗的必要性 ▪ 2.进行个体化治疗方案的探讨
2
相对简单地运 用已知的基因 理论改善病人 的治疗
3
以药物效应及 安全性为目标， 研究各种基因 变异与药效及 安全性的关系
TPMT
测定红细胞法 筛查突变
PCR-RFLP
高效液相色谱法
PCR-SSCP
其他方法
DHPLC
测序,ASPCR 等
TPMT 活性分布多态性研究
方法
1． 样本处理 2 ．孵化 3 ．提取 4．测定
测定
HPLC进样分析 流动相:水:甲醇:三乙胺(76.8:23:0.2)
医学检测所
遗传变异 分子诊断
临床医生 优化治疗 方案
方案建议
增加剂量 减少剂量 换药
分子诊断书
药物作用受药物代谢、转运、靶点多态性控制
基因组 基因变异 (单核苷酸多态性)
药物代谢酶
药物转运体
药物靶点
药代动力学
药效动力学
药物疗效和毒性的个体差异
硫嘌呤类药物个体化治疗的研究基础
硫嘌呤类药物
6-硫鸟嘌呤 （６－TG) ６－巯基嘌呤
硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)的活性与硫嘌呤类药 物的疗效、毒副作用密切相关.
TPMT酶活性低下而造成 的药物毒副作用可导致 死亡；
TPMT酶活性较高则硫嘌 呤类药物用量不足又会 使疾病复发
研究的主要内容
▪ 患者TPMT遗传多态性特征 ▪ 硫嘌呤类药物的个体化治疗
硫嘌呤甲基转移酶多态 性分析方法
药物疗效的影响因素
遗传背景 并发症
年龄
治疗效果 不良反应
性别 肝肾功能
药物相互作用
营养状况
疾病的多样性
药物作用的多基因本质
疾病的病源基因
治疗作用 不良反应
宿主易感基因
药物代谢和转运基因
药物受体和靶位基因
安全有效
不良反应
安全有效
+ 越强越好
个体化给药
-
不良反应
越小越好
药物基因组学与基因学
1
药物基因组学 不是以发现人 体基因组基因 为主要目的
应用药物基因组学 研究硫嘌呤类药物的个体化治疗
主要内容
▪ 1药物遗传基因组学简介 ▪ 2硫嘌呤类药物个体化治疗
个体化治疗
新的医学模式:个体化治疗 （Personalized Therapy），根据 分子诊断提出治疗方案
诊断
分子诊断预测反应
治疗
理想反应
打破试误医学的循环
个体化治疗临床服务
临床诊断
流速:1.0ml/min 紫外检测波长:290nm
TPMT 基因多态性研究
实验方法
▪ 1.外周血DNA提取 ▪ 2. TPMT基因型的检测
基因型检测
DNA(40ulTE溶解,-20℃保存至处理)
ASPCR
PCR--RFLP
TPMT*2 TPMT*3A TPMT*3B TPMT*3C TPMT*1
进行个体化治疗的必要性
▪ 收集治疗中发生不良反应病例(观察组)。 ▪ 收集治疗中无发生不良反应病例(对照组)。
比较对照组和研究组 TPMT表型和基因型特征
硫嘌呤类药物的个体化治疗
▪ 个体化治疗指标的确立 ▪ 个体化治疗方案的探索
个体化治疗指标的确立
▪ 检测TPMT表型、基因型，监测硫嘌呤 类药物治疗中，TGNs的变化及白细胞 数和不良反应情况。
引物序列及PCR反应参数
外显子 引物名称 引物序列
产物长度 解链温度
5 P2W 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTG-3’
254
58
P2M 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTC-3’ 254
58
P2C 5’-TAAATAGGAACCATCGGACAC-3’
7 P460F 5’-GGGACGCTGCTCATCTTCT -3’
50 100 150 200 250
发生6-MP不良反应为研究组
19例发生严重不良反应。 1）骨髓造血系统损害 9例 2）脱发 16例 3）上呼吸道感染 9例 4）大叶性肺炎5例 5）下呼吸道感染4例
毒性和疗效观察
▪ 血象、白细胞记数、骨髓涂片观察
统计与分析
▪ 用SPSS10.0软件包对数据进行统计分析，两 样本比较做Dunnet t检验，多样本比较采用 方差分析。
个体化治疗尝试
▪ 参考TPMT基因型结果，在TPMT活 性和TGNs监测下，进行硫嘌呤类 药物个体化治疗的尝试。
红细胞裂解液样本色谱图
６-MMP标准曲线
300000 250000 200000 150000 100000
50000 0
0
y = 1205.6x + 4829.7 R2 = 0.9975