04_GJ23生防菌剂防治南方根结线虫研究

文章编号:100221302(2004)0520043203

G J 23生防菌剂防治南方根结线虫研究

付　鹏,李红梅,丁国春,郭坚华

(南京农业大学植物保护学院,江苏南京210095)

摘要:用不同浓度的G J23生防菌剂菌悬液和发酵上清液原液,对南方根结线虫的二龄幼虫和卵进行处理,评价G J23生防菌对南方根结线虫的生物防治效果。结果显示,G J23生防菌剂的菌悬液和上清液原液的不同稀释倍数均可抑制根结线虫二龄幼虫的活性,但可促进其卵的孵化。温室盆钵试验结果表明,2倍稀释的G J23菌液对南方根结线虫的产卵能力和根结的形成有显著的抑制作用,对番茄生长有促进作用。 关键词:南方根结线虫;生防菌剂;防治 中图分类号:S48215+1 文献标识码:A

收稿日期:2004203226

基金项目:国家“863”计划资助项目(编号:2002AA244041)。作者简介:付　鹏(1965-),女,江苏徐州人,硕士,农艺师,主要从事植物线虫病害的防治研究。Tel :(025)84395240;E 2mail :

fupeng @ 。

根结线虫(Meloi dogyne spp.Chitwood )是植物

根系定居性内寄生物,是当前我国主要的农作物病原线虫之一。在全国绝大部分省区均有分布,可侵染数百种作物,其中蔬菜果树受害最为严重。近年来由于大棚蔬菜栽培的普遍推广,南方根结线虫(Meloi dogyne i ncognita )病害的发生有显著的上升和加剧,发病田的寄主常年减产15%～20%,严重时达到70%以上[1]。而防治根结线虫的化学药剂常带来环境污染和人身安全等问题,这在很大程度上限制了其使用。生物防治作为最有前途的防治手段,已逐渐受到世人的关注。

利用植物根围促生细菌(P GPR )防治植物病害成为近年来研究的热点,而在国内利用根围促生细菌防治根结线虫的研究才刚刚开始。南京农业大学植物保护学院细菌实验室自1991年以来已经筛选出了100余株P GPR 菌,并制成一系列的菌剂成功地用于蔬菜青枯病等土传病害的防治[2]。本研究通过使用3菌混合的生防菌剂G J 23对南方根结线虫二龄幼虫和卵进行处理以及温室盆钵试验,来评价其对根结线虫病的防治效果。

1　材料与方法

1.1　根结线虫二龄幼虫悬浮液的制备

从番茄根部挑取南方根结线虫新鲜卵块,置于贝曼漏斗中孵化,24h 后开始收集幼虫,每天收集1

次,共收集7d 。线虫液稀释为含二龄幼虫100条/ml ,4℃保存、备用。1.2　卵悬浮液的制备

将有根结的番茄根剪碎后放入三角瓶中,加0.5%NaClO 液100ml ,用力摇1～2min 后,快速

倒入200～500目筛组中并用自来水冲洗10min ,收集500目筛网中的卵[3],稀释成浓度为3000粒/ml 的卵悬浮液。1.3　G J 23菌制剂发酵后的菌液经离心得上清液原液和菌体,将菌体按1∶40配成含有109CFU/ml 的菌悬液。1.4　室内离体测定

平均室温在20℃左右时,分别将G J 23的菌悬液和上清液原液稀释成2倍液、5倍液和10倍液,各吸取2ml ,加入直径为7.5cm 的灭菌培养皿中,然后分设2种试验:①在培养皿中再加入2ml 二龄幼虫的悬浮液,以清水和5倍、10倍稀释的培养液作对照,重复3次,分别在12h 、24h 和36h 观察线虫的活力;②在培养皿中再加入2ml 根结线虫卵悬浮液,以清水和2倍、5倍、10倍稀释的培养液作对照,重复3次,分别在4d 、6d 、8d 和10d 观察卵的孵化情况。

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1.5　温室盆钵试验

将供试番茄品种播种于灭菌土中,出苗42d后选取长势一致的植株移栽于装有灭菌土(沙土和黏土等体积混匀)、直径为21.5cm的塑料盆钵中。移栽2d后,分别浇稀释2倍、10倍、100倍的菌悬液100ml,2d后以每株3000粒卵的接种量将按1.1.2法制得的卵悬浮液分别滴注到盆栽番茄的根部,各处理重复4次。接种后的盆钵随机排列于温室内的平台上,20～28℃培养56d后缓慢取出各接种植株,在水中洗净根系,分别称根重和冠重。将根系置于解剖镜下,记录根结数、卵块数(用0.05%薯红溶液染色3～4min)[4]和每卵块平均卵量(以随机取10块卵块的平均卵量计,将10块卵块溶于1 ml的0.5%NaClO溶液中,震荡1min后吸取50μl 记数,重复3次)。按Duncan氏新复极差法测验各处理间的差异显著性(P<0.01)。

2　结果与分析

2.1　G J23对南方根结线虫二龄幼虫的抑制作用

从表1可以看出,处理后12h,菌悬液稀释5倍和10倍对幼虫的抑制作用略高于清水对照组,但无显著差异。处理后24h、36h和48h,两处理组对南方根结线虫二龄幼虫(J2)的抑制作用逐渐增强,与对照差异显著,在处理后48h,菌悬液稀释5倍液可以使90.9%的J2处于僵直状态。与对照相比,上清液的5倍和10倍稀释液在处理后12h,非常显著地抑制J2的活性,使95%以上的幼虫处于僵直状态。而培养液5倍和10倍稀释液对照只有16.3%和5.1%的幼虫处于僵直状态。但处理后48 h,5倍和10倍稀释液对J2活性的抑制作用逐渐减弱,分别使9.6%和21%的J2处于僵直状态。上清液2倍稀释液对J2的抑制作用表现比较平稳。

表1　G J23对南方根结线虫二龄幼虫活力的抑制作用

菌液种类处　理

抑制率(%)

12h24h36h48h 菌悬液G J232512.3a38.6a68.6a90.9a

G J23210 6.7a12.6b37.6a42.5b

CK(清水对照) 4.5a 4.1b 6.9b 4.1c 上清液S2G J232263.1b64.0b84.9a65.2a S2G J232595.9c37.6c13.6b21.0b

S2G J2321099.3c69.7b30.9b9.6b

CK2516.3a8.81a 6.3c20.7b

CK210 5.1a7.73a8.1c12.2b

注:G J2325为G J23菌悬液的5倍稀释液,余类推。CK25、CK210分别为培养液5倍和10倍稀释对照。2.2　G J23对南方根结线虫卵孵化的抑制作用

从表2可以看出,菌悬液的2倍和5倍稀释液在处理后4d和6d的卵孵化率低于清水对照组,表明低稀释倍数的菌悬液在处理短期内可以明显抑制卵的孵化。而稀释10倍的菌悬液在处理后6d、8d 和10d的孵化率分别比清水对照高20.6%、39.6%、9.3%,表明高稀释倍数的菌悬液对线虫卵的孵化有一定的刺激作用。上清原液2倍、5倍和10倍稀释液处理南方根结线虫卵6d、8d和10d 后,卵的孵化率显著高于2倍和5倍稀释培养液对照,表明上清原液的2倍、5倍和10倍稀释液都对南方根结线虫卵的孵化有促进作用。

表2　G J23处理后南方根结线虫卵的孵化率

菌液

种类

处 理

卵孵化率(%)

4d6d8d10d 菌悬液G J23227.9b18.3c49.7c69.0a

G J232514.1b37.8b59.2b66.0a

G J2321024.9a52.6a67.0a70.0a

CK(清水对照)23.3a43.6b48.0c64.0a 上清液S2G J232210.9c26.4b50.4b58.2b

S2G J232518.2b50.8a58.1a70.3a

S2G J2321037.9a59.5a60.0a71.7a

CK22 4.7c12.5b34.0c44.1b

CK257.4c20.3b41.2b56.4b

CK21017.4b52.4a69.9a71.2a

注:G J2322为G J23菌悬液的2倍稀释液,其余类推。CK22、CK2 5、CK210为培养液2倍、5倍、10倍稀释液对照。

2.3　温室盆钵试验

从表3可以看出,G J23菌悬液2倍稀释液处理番茄植株56d后,植株的冠和根分别比对照增加10.3g/株和2.2g/株,各增长了39.8%和22.9%,对番茄的生长有明显的促进作用,同时根系上的根结数目比对照组明显减少。G J23菌悬液2倍稀释液除对南方根结线虫二龄幼虫的侵入有明显的抑制作用外,还对雌虫的产卵能力有抑制作用,平均每卵块卵量显著少于对照组。菌悬液10倍稀释液处理表3　G J23菌液对番茄南方根结线虫病害

防治的温室盆钵试验结果

处理

根重

(g/株)

冠重

(g/株)

卵块数

(块/株)

根结数

(个/株)

卵数

(粒/块)

G J232211.8a36.2a113b143b233c

G J232108.4a31.2ab257a293a384ab

G J2321009.0a30.4ab304a332a467a

CK(对照)9.6a25.9b263a294a367b

注:G J2322:2倍菌液处理组;G J23210:10倍菌液处理组;G J232 100:100倍菌液处理组。

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