小鼠肝脏淋巴细胞分离

肝脏淋巴细胞分离protocol

1. 腹腔注射100uL/只小鼠麻醉；

2. 用约20mL PBS从下腔静脉处灌洗（肾，肺，肝均变白，肝脏灌注也可）；

3. 取10cm细胞培养皿，加入10mL 10% FBS+DMEM，将滤网浸于其中，取出的肝组织置于滤网中；

4. 用1mL注射器的内芯研磨，制备细胞悬液；

5. 从皿中吸取细胞悬液到50mL离心管，补加PBS至30mL；

6. 50g离心3min，上清转移至新管；

7. 1500rpm X 5min离心，2.5mL DMEM重悬细胞。

8. 准备percoll：

6mL 100% percoll + 660uL 10X PBS配成90% percoll

4mL 90% percol + 1.12mL DMEM配成70% percoll

2.5mL细胞重悬液+ 2mL 90% percoll配成40% percoll；

9. 将40% percoll细胞悬液沿管壁缓缓加入70% percoll中；

10. 2000rpm离心20min，brake和accelerate都设为level 1；

11. 吸取中间层细胞，PBS补加到10mL，400g离心10分钟；

12. 弃上清，加1mL红细胞裂解液，裂解2min

13. 补加PBS到10mL，终止裂解，400g离心10分钟

14. 将细胞重悬到合适体积，计数，用于下游分析