SMMC-7721人体肝癌细胞株的建立及其生物学特性的初步观察

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖影响

与空白对照组比较。Ｆ＝３．０９３。。ｑ＝４．０２～５．３７，Ｐ＜０．０５、０．０１
（下转第４２３页）
万方数据
５期
吴宁．高美华．糖尿病病人突变ＣＤ５９蛋白在真核细胞中的表达
方式抑制攻膜复合体（ＭＡＣ）的生成，保护自身正常组织细胞免受补体损伤。近年来研究显示，糖尿病人的血管内皮细胞及肾脏ＭＡＣ沉积增多，导致从ＭＡＣ靶定的内膜释放生长因子，如基底成纤维生长因子和血小板源性生长因子等［４］，而生长因子的释放可以刺激血管壁细胞增殖并可导致增殖性血管并发症的发生。人ＣＤ５９作为补体调节分子，可以抑制ＭＡＣ的形成，从而抑制由于ＭＡＣ插入内皮细胞促使生长因子释放而导致的血管增殖性并发症的发生。但糖尿病病人的持续高糖血症可使ＣＤ５９发生非酶糖化并损伤其功能，因此糖尿病血管增殖性病变的发生与ＣＤ５９糖基化失活可能有关。人ＣＤ５９的ＮＭＲ结构显示，易于糖基化的氨基或靠近咪唑基团，或为赖氨酸双体结构，因此，离咪唑基团约０．５ｒｉｍ的氨基基团最容易糖基化［５’６］。ＣＤ５９糖基化位点位于Ｋ４１和Ｈ４４，Ｋ４１与Ｈ４４ＤＩ咪唑氮的距离约（０．５９土０．１４）ｎｍ，且靠近活性位点Ｗ４０，而Ｈ４４具有协助Ｋ４１糖基化作用，已证实Ｋ４１的糖基化可能防碍ＣＤ５９的活性［３］。如果缩小赖氨酸与组氨酸的距离，或同时增加了赖氨酸的数量，理论上将使赖氨酸更易糖基化。因此，我们认为糖尿病病人体内可能存在两种易糖基化的ＣＤ５９突变基因，一种为ＨＭ７，即４２位苯丙氨酸、４３位谷氨酸均突变为赖氨酸，缩小了赖氨酸与组氨酸的距离，同时增加了赖氨酸的数量；另一种为ＨＭ８，即４３位谷氨酸突变为赖氨酸，缩小了赖氨酸与组氨酸的距离。这两种突变基因在理论上均更易糖基化。有研究显示，可溶性ＣＤ５９在原核细胞中可以获得表达［６］，但活性较低。本课题转染选用的ＣＨＯ细胞是目前公认的较理想的一种哺乳动物表达系统。ＣＨＯ细胞易培养和产业化，表达的蛋白质具有良好的天然构象，遗传稳定性好，表达效率高。ｐＡＬＴＥＲ可在大肠杆菌中大量复制，也可在哺乳动物细胞中高效表达。其多克隆位点两端分别有Ｔ３、Ｔ７启动子，可直接用于测序。ＨＭ—ｐＡＬＴＥＲ重组表达质粒含有人突变基因ＣＤ５９的全长ｃＤＮＡ序列，保证了表达产物具有较好的天然构象，利于活（上接第４２０页）

pEGFP-N2-ECM1重组质粒的构建及其在人肝癌细胞系SMMC-7721中的表达

Ｂｍ、Ｎｒｅ购于美国ＭＢ公司；ａＨＩＤＡＭａｋｒＩ质粒小量
ＳＭＭＣ７２一７１肝癌细胞系。方法
术构建ｐＧＰＮ一Ｃ真核表达载体，ＥＦ — ２ＥＭ１经酶切、测序鉴定正
确后，脂质体转染Ｓ用ＭＭＣ７２一７１细胞，４８药物筛选稳定Ｇ１转染的细胞系。荧光显微镜检测融合蛋白表达，ＴＰＲ技Ｒ —Ｃ术检测ＥＭ１因表达。结果构建的重组质粒经双酶切Ｃ基及测序分析鉴定，结果证实ｐＧＰＮ．ＣＥＦ — ２ＥＭ１构建成功；筛选
了ｐＧＰＮ－ＣＥＦ —２ＥＭ１的真核表达载体，在肝癌Ｓ并ＭＭＣ７２－７１
细胞中稳定表达，为研究ＥＭ１在肝癌进展中的作用奠定了Ｃ
实验基础。
公司；胰酶购于江苏碧云天公司；高糖Ｈｃｏｅ公司；４８购于美国ＲｓｅｙｌｎＧ１ｏｈ公司、培养板购于Ｃｒｉｇ公司；Ｒｖｒ反转６孔ｏｎｎｅｅｔＡ录试剂盒购于Ｆｒｎａ公司。ＬｅｍｅｔｓＢ—Ｋｎａａ琼脂培养
安徽医科大学学报
Ａｔｎｖｒｔｔｄｉｌｎｕ２１ｅ；７２ｃＵｉｓａｉＭｅｉｎｉＡｈｉ０２Ｆｂ４（）ａｅｉｓｃａｓ
・１３・３
ｐＧＰＮ－ＣＥＦ —２ＥＭ１重组质粒的构建及其在人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７２一１中的表达７
生物学功能提供依据。
１材料与方法
Ｂｍ及保护性碱基，ａＨＩ并保持ＥＭ１阅读框正确；Ｃ所有引物由上海生工生物技术有限公司合成。扩增

人肝癌SMMC-7721细胞培养体会①

人肝癌SMMC-7721细胞培养体会①作者：王玥李应东来源：《中外医疗》2011年第02期【摘要】根据长期培养人肝癌SMMC-7721细胞的经验,总结出了一套培养细胞的方法,使得复苏细胞成活率大为提高,为进一步的实验研究奠定了基础。

【关键词】人肝癌SMMC-7721细胞细胞培养方法【中图分类号】 R73 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674-0742(2011)01(b)-0026-01目前细胞培养技术已成为很重要的生物技术之一,它是医学、新药开发等实验研究的基础技术,其作用不容忽视。

人肝癌SMMC-7721细胞属于肝癌细胞系,现已广泛用于药物毒理、抗肿瘤等方面的研究,目前关与人肝癌SMMC-7721细胞的培养文献还比较少,我们对于人肝癌SMMC-7721细胞的培养条件和方法上进行了探索,现总结出一些经验。

1资料与方法1.1一般材料1.1.1实验细胞人肝癌SMMC-7721细胞株由甘肃兰州大学附属二院泌尿研究所惠赠。

1.1.2主要试剂D ulbcco’s Modified Eagle’Medium(DMEM)培养基:北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司磷酸盐缓冲液(PBS):氯化钠8.00g、十二水磷酸氢二钠2.885g、氯化钾0.20g、磷酸氢二钾0.20、三蒸水配制,0.22μm滤膜过滤除菌,PH7.2～7.4,4℃保存。

新生牛血清(NBCS):杭州四季青生物材料工程研究所-20℃保存,使用前4℃溶解,56℃灭活30min。

胰蛋白酶消化液:胰蛋白酶(Trypsin 1:250,GIBCO公司)用PBS液配制成浓度为0.25%溶液,0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。

青霉素、链霉素溶液:0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。

1.1.3实验仪器二氧化碳培养箱:BB16UV德国Heraeus公司;超净工作台:VS-1300L型,苏净集团苏州安泰空气技术有限责任公司;倒置相差光学显微镜:IX71型,日本Olympus公司产品;恒温水浴锅:DZW-4型,金坛市恒丰仪器厂;纯净水系统:Milli-Q Biocel美国Millipore公司;电热恒温干燥箱:风热式,101型,北京科伟永鑫实验仪器设备厂;台式灭菌器:TMQ.J-2540型,山东新华医疗器械股份有限公司。

科罗索酸对SMMC-7721细胞生长抑制作用的初步研究

山东医药２１年第５卷第５期０１１２
・
临床研究・
科罗索酸对ＳＭＭＣ７２一７１细胞生长抑制作用的初步研究
李海艳，徐燕丰，辛海量，昌全凌
（第二军医大学，海２０３）上０４３
摘要：目的法
研究中药猫人参中提取的三萜化合物科罗索酸（Ｒ对人肝癌ＳＣ７２细胞生长的影响。方ＣＡ）ＭＣ－７１
４４
山东医药２１年第５卷第５０１１２期
培养液后，孔加入１ｌ０１ｌＭｉＣｐｕｅ每０含．的ｔａｔｒｏ
对照６ｈ１２ｈ
预热的孵育缓冲液，于３并７℃ 下孵育１ｎＰＳ５ｍｉ，Ｂ冲洗，埋培养板并于荧光显微镜下显色拍照。包１６蛋白分析和Ｗｅｔｎｂｔ．ｓｒｌ检测ｅｏ用细胞色素Ｃ释放试剂盒检测线粒体释放人胞质中的细胞色素ｃ，收集胞质和线粒体蛋白。ＰＳ冲洗细胞，浮于Ｂ悬ＲＰＩＡ裂解液和含有蛋白酶抑制剂的提取缓冲液中。
验组，另取不含ＣＡ的单纯细胞培养液为对照组，Ｒ用ＰＳ收集贴壁和悬浮细胞，Ｂ以浓度为１１６ｍ重悬于 × ０／ｌ
２０结合缓冲液，０加入５ａｎｘｎＶＥＦｎｅｉ－ＧＰ避光孵育１ｉ，加入Ｐ，５ｍｎ然后Ｉ即刻用流式细胞仪分析。１５线粒体膜电位测定．ＭｉＣｐｒ粒体凋亡ｔａｔｅ线ｏｕ检测试剂盒检测膜电位改变。细胞以１×１ｍ浓０／ｌ度种于６孔板中，分别加入３ｍｌＬＣＡ和溶质５ＩｏＲｘ／

牛樟芝抗肝癌的效应与机制研究

牛樟芝抗肝癌的效应与机制研究[背景与目的]全球每年新确诊的恶性肿瘤中约有9.2%为肝癌,在肝癌的新发病例中,亚洲约占70%,其中,我国的肝癌发病率居首位,且我国HCC患者的年死亡人数占全球HCC患者死亡人数的55%左右。

那些进展为HCC的患者几乎都在12个月内死亡,证明HCC进展极快且预后极差,因此,急需寻找有效的治疗药物。

ANCA-E-D是牛樟芝菌丝体的二氯甲烷提取物。

台湾当地居民一直用牛樟芝来治疗食物和药物中毒、腹泻、腹痛、皮肤瘙痒、改善免疫和肝功能等,而现代药理也证实,牛樟芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化和神经保护等作用。

研究发现,牛樟芝与中药灵芝同属于多孔菌科的真菌,生长习性和性味相近,生物活性成分不同,尤其是牛樟芝的生物活性物质种类比单一种类的灵芝更多,且萜类和多醣等含量更高,故而近年来,牛樟芝的抗肿瘤和免疫调节等功效成为研究的热点。

我们认为牛樟芝具有扶正补虚和抗癌解毒的双重功效,是一种潜在的特异性的抗癌中药。

已有的研究证实,牛樟芝可以抑制肺癌、结肠癌、卵巢癌等多种肿瘤的生长。

本研究中,我们利用SMMC-7721肝癌细胞株,通过体内和体外实验,利用基因芯片高通量的特点,初步探讨牛樟芝对肝癌细胞的体内外抑制作用和分子机制。

[方法]1.体内实验(1) SMMC-7721细胞(4×105 cell／只)接种至4～6周龄雄性BABL/c裸鼠右后肢皮下,建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型；(2)造模成功裸鼠随机分为3组(10只／组)：生理盐水对照组,25 mg/kg ANCA-E-D实验组、50 mg/kg ANCA-E-D实验组,腹腔注射,每天1次,连续治疗21天；(3)观察裸鼠的一般状况,测量各组裸鼠的体重、移植瘤体积等；血液学检测血清ALT和AST含量；病理切片HE染色检测移植瘤和肝肾组织,IHC检测移植瘤组织的MVD和PCNA的表达,TUNEL检测移植瘤组织的细胞凋亡。

2.体外实验(1)0、20、40、60、80mg/LANCA-E-D处理SMMC-7721细胞24、48、72h, MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率；(2)0、20、40、60mg/LANCA-E-D处理SMMC-7721细胞24h,Hoechst33258及瑞氏染色观察细胞形态；(3) 0、20、40、60、80 mg/L ANCA-E-D 处理SMMC-7721细胞24h,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡；(4)0、20、40、60 mg/L ANCA-E-D处理SMMC-7721细胞24h,基因芯片检测差异基因的表达；[结果]体内实验：ANCA-E-D可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制裸鼠移植瘤中微血管的形成以及PCNA的表达,诱导移植瘤细胞的凋亡；ANCA-E-D对移植瘤裸鼠的ALT和AST无影响。

文蛤抗癌多肽抑制肝癌细胞SMMC-7721差异蛋白质组分析

１材料与方法
１２２第一向等电聚焦胶电泳（Ｅ）．．ＩＦ自制胶条采用ｐ范围在３～１Ｈ０和５～８的两性
收稿日期：０８０ —５２０－８１
基金项目：门市科技计划项目（５２２０３２）厦门市卫生局厦３０Ｚ０６０１，资助项目（Ｋ６２和厦门大学科技创新工程基金ＷＳ００）（ＤＫＣ２０３０）ＸＪＸ０４０１资助
贺量，范成成康劲翮张剑，，，冷波石艳，，李文岗，陈清西ｈ
（．门大学生命科学学院，１厦教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室，福建厦门３１０；６０５
２福建医科大学附属厦门第一医院，．福建厦门３１０）６０４
料
肝癌细胞株ＳＭＭＣ７２－７１购自上海细胞所细胞
抑制效应，肝癌细胞Ｓ如ＭＭＣ－２，７１胃癌细胞Ｂ一７ＧＣ８３黑色素瘤细胞等．实验室已报道过文蛤抗癌多２，本
肽对胃癌细胞ＢＣ－２Ｇ８３的抑制效应ｕ．抗癌多肽对肝Ｊ
引起了肝癌细胞的凋亡，一步的抗癌多肽抑制肝癌细胞作用的研究提供了理论基础．为进
关键词：；白质组；肝癌蛋质谱
中图分类号：１Ｑ５６
文献标识码：Ａ
文章编号：３－７（０８￥－８－０８４９２０）２０３４４０００
文蛤肉质鲜美，营养丰富，且有极高的药用价值．据报道文蛤具有清热利湿、化痰、散结的功效，癌、对肝肺癌、胃癌、甲状腺肿等也有明显的抑制作用．文蛤抗

桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721抑制作用的初步研究

生物学性状的改变）每孔终体积为２０ｌ，０，。培养７ｕ２小时后，每孔再加入５ｍｇ・ｍＬ的ＭＴＴ储存液２ｕ／Ｌ继续于５１Ｏｌ￣，：Ａｏ
Ｃ２饱和湿度３￣孵箱中孵育４０，７Ｃ小时后终止实验。小心吸弃
每孔上清液，并加入二甲基亚砜（ＤＭＳ１％ｌＬＯ）ｏ／。于１￣Ｏ分钟
（ｌｏｏｄ）类胡萝卜素（ａｏｅｏｄｆｖｎｉｓ、ａｃｒｔｎｉ）和柠檬苦素类（ｉ１ —
对照组加人与各剂量组相对应ＤＯ浓度的完全培养基，高ＭＳ最
ＤＯ浓度为０１（般认为ＤＭＳ￣０１时不引起细胞的ＭＳ．一Ｏ．
群称橘络，均以理气和胃、化痰降逆人方剂；的幼果称枳实，橘不成熟的青果横切两半称枳壳，有破气消积、具化痰消痞之功效。［。随着柑橘综合利用的深入开展和新技术的应用，柑橘
果实中具有抗现代疾病，尤其是抗肿瘤的功效成分逐步被提取
ｅｎｎ）证实具有较强抗口腔癌，ｕｏｅ，喉癌，癌，肺胃癌，肤癌肝皮癌，乳腺癌的作用，还能抑制结肠癌，白血病等。体外实验证明柑橘黄酮类化合物对人非小细胞肺癌
Ａ５９］产黑色素的鼠黑色素细胞瘤Ｉ６黑色素瘤４，４［，３３，１Ａ５人类Ｔ细胞淋巴瘤ＣＦＨＳ－，胃癌淋巴结转移细胞ＴＧＣＩＣ－Ｂ２人ＢＩＴ— ＫＢ有很强的增殖抑制作用，对正常人类细胞系仅有较弱的而抗增殖活性¨ 。多甲氧基黄酮主要包括川陈皮素和桔皮素两４］种。已经证实桔皮素在体外对人乳腺癌，结肠癌，癌细胞等肺有较强的抑制增殖作用＿］５。本研究的目的在于在细胞水平

低频超声联合微泡剂对肝癌细胞SMMC-7721的生物学效应

测
ＲＳ及ＳＤ试剂盒购于南京建成生物工程研究ＯＯ
所。按说明书进行检测操作，据标准品Ｏ根Ｄ值绘制
超声探头直径２ｅ微泡剂由５ｍ；％碳酸氢钠、生素ｃ维
（２）Ｄ组（５）１０Ｓ和１０Ｓ。
１３２ＭＴ法检测细胞存活率．．１ｒ
用０２％胰酶消化．５
１材料与方法
１１细胞及培养．人肝癌细胞ＳＭＣ７２Ｍ一７１由细胞银行提供，Ｒ — 用Ｐ
１２主要仪器及微泡剂．利用东南大学（江苏铁医美达康医疗设备厂）原
每次同时接种３块板。接种完放入培养箱孵育待其贴
壁后给予不同的处理，理后继续放入培养箱孵育。处分别于处理后１２、８ｈ取出１９板作Ｍｒ’ 、４４块６孔ｔ检Ｉ测。在５０ｎ波长下测定Ａ。。细胞存活率＝７ｍ
ＭＩ６０购自ＧＢＯ）４（１ＩＣ培养基培养，该培养基含１％０胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）０，１０Ｕ・ｌ青霉素和１０ｍ・链霉素，在３Ｃ、％ｍ０ｇｍｌ７ｏ５Ｃ养箱中培养。Ｏ培
［中图分类号］Ｒ３．；Ｒ３７５７・３
［文献标识码］Ａ
［文章编号］１７ —２４２０）４０６ ‘ ６１６６（０８０ —２０４４

砒霜中药合理应用

[18]吴汉新,争三氧化二砷持续静脉滴治疗复发性及难治急性早幼粒细胞白血病的疗效分析.江苏医药,1998,24（10):735
[19]张哓晖,等.三氧化二砷和全反式维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病疗效的对比分析.中华内科杂志,1999,38（2):113
[20]吴文森,等.三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病复发的临床观察.宁波医学, 1997,9（1):34
共治疗复发急性APL 28例,以三氧化二砷注射液10mg/d静脉滴注。结果完全缓解27例。20例治疗过程中出现白细胞增高（A组),7例白细胞无明显变化（B组)。二组在治疗前白细胞计数无明显差异（P=0.0577)。整个治疗过程中,骨髓未出现增生受抑制的情况。患者达到完全缓解的时间无明显差异（为32.4±6.5天和27.6±300天,P=0.0758)。无复发生存率也无明显差异（P=0.0577)。在毒副作用中,以白细胞增益倍数高者出现的机会多。说明三氧化二砷是治疗对全反式维A酸治疗无效的早幼粒细胞白血病的有效药物［17］。
中毒诊断及救治
炮制方法
由较纯的砒石经升华可得砒霜的白色结晶。
参考文献
[1]邓友平,等.三氧化二砷抗肿瘤作用的研究.中国中药杂志,1999,24（3):174
[2]伍钢,等.三氧化二砷对神经母细胞癌细胞增殖的影响.癌症,1999,18（3):266
[3]石熠慧,ห้องสมุดไป่ตู้.AS2O3对消化道肿瘤细胞调亡作用的研究.上海第二医科大学学报, 1999,19（3):242
毒性成分
由于本品为三氧化二砷纯品,毒性极强,其毒性远大于砒石及雄黄。内服要非常谨慎。体虚者及孕妇忌服。成人口服三氧化二砷的中毒剂量为5～50mg（对体质敏感者口服lmg即可中毒),致死量为70～180mg。大鼠的口服致死量为12.0mg/kg［13］。

大蒜素诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的形态观察

方法，了大蒜素对体外培养的肝癌细胞的诱导凋亡作用的进行
研究。１材料与方法
１１细胞培育．
细胞株：ＭＭＣ一７２肝癌细胞购自武汉冷藏Ｓ７１
染色。待细胞爬片长满至８％以后加入大蒜素使终浓度为０
（１：ＧＡ公司。用ＰＳＭｒ）ＳＭｒＩＩＢ配成５ｇｍ，、／￣除菌分装后， ℃避ｍ４光保存。６９孔培养板：ＩＭＳＡ公司；ＵＥＧＴＮＬ检测试剂盒：美生华
物公司。
试剂盒说明书操作。随机选择１０个高倍视野（０倍）计算凋４０，
１６ＵＥ（．ＴＮＬ凋亡细胞末端原位标记）待盖玻片上的细胞长至８％，０向培养皿中加入大蒜素使终浓度为３ｇｍ作用４ｈ０／ｌ后取出，００Ｍ的ＰＳｐ以．１Ｂ（Ｈ值７４）．洗长有细胞的载玻片后按
程中，于加药——加入ＭＴ的时间段内，Ｙ随机观察并照相记录用药组和对照组细胞的形态变化。（）２台盼蓝染色。对处于对数
生长期的细胞以大蒜素（浓度为３ｇｒ１作用４ｈ后，终０／）ｎ取０５ｍ细胞悬液于一小试管中，加入０４台盼蓝染液０５ｍｌ．ｌ再．％．，吹打均匀，染色１ｍｎ取染色后的细胞悬液滴人计数板，置显ｉ，倒微镜下计数２０个细胞中坏死细胞及凋亡细胞百分数。（）０３ＨＥ

塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用

塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用李军尧;欧武陵【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2004(26)8【摘要】目的研究环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )抑制剂塞来昔布对人肝癌SMMC 772 1细胞的生长抑制作用。

方法用MTT比色法观察其对肝癌细胞生长的影响 ;荧光显微镜和透射电子显微镜检测细胞凋亡 ,TUNEL染色法记数细胞凋亡指数 ,流式细胞仪定量分析。

结果塞来昔布以剂量依赖的方式抑制SMMC 772 1细胞的生长 ,2、10、2 0及 40mmol L塞来昔布对肝癌细胞的生长抑制率分别为 2 0 78%、3 3 3 7%、48 5 7%和 64 96%(P <0 0 1)。

荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。

流式细胞仪定量分析示 2、10、2 0及 40mmol L浓度下细胞凋亡率分别为( 7 44± 0 3 4) %、( 19 5 9± 1 73 ) %、( 2 9 0 4± 4 18) %和( 4 2 14± 240 ) %,与对照组( 2 13±0 17) %比较均有显著性差异。

结论塞来昔布能抑制人肝癌SMMC 772 1细胞增殖 ,亦能诱导其凋亡 ;【总页数】4页(P682-685)【关键词】塞来昔布;肝癌细胞;凋亡;环氧合酶-2【作者】李军尧;欧武陵【作者单位】中国人民解放军广州军区武汉总医院急诊科【正文语种】中文【中图分类】R735.7;R977.3【相关文献】1.复方斑蝥注射液对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用 [J], 张建武;杨旭波;唐建平;张贵林;皈燕2.沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用 [J], 孙萍;张良明;孙等军;董亮亮3.槲寄生碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用的研究 [J], 孔凡青;周立社;闫巧梅;高丽君;闫秀英4.紫杉醇对人SMMC-7721肝癌细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用 [J], 王立权;许兰文;周光兴;周文江;杨萍;乔伟伟5.槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用 [J], 贺凯;刘明华;任美萍;李蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

γ射线对人肝癌细胞SMMC7721和HepG2灭活效果的研究

γ射线对人肝癌细胞SMMC7721和HepG2灭活效果的研究目的:肝细胞肝癌在肿瘤导致死亡的疾病中排名世界第三,特别是在发展中国家,发病率还呈上升的趋势。

手术治疗是根治肝癌的最有效的手段,但是仅有10%-30%的患者在诊断出肝癌时有手术指征。

肝癌患者进行肝切除术或者肝移植手术时常常会伴随着大量失血,往往需要输血,异体输血存在着很多弊端,比如不良输血反应,免疫抑制以及疾病传播等,而特别是对于肿瘤患者来讲,可能还会引起肿瘤的复发,因此推荐肝癌患者进行自体输血。

但是肝癌患者自体输血一直以来又存在着争议,有学者担心血中可能存在的肝癌细胞有可能会引起肿瘤的血行转移。

故本实验通过研究γ射线对人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响,来探究γ射线对肝癌患者的自体血液中残留的肿瘤细胞的灭活效果,寻找合适的辐照剂量,为肝癌患者的自体输血的安全应用提供依据。

方法:1)人肝癌细胞株SMMC7721和HepG2的体外培养。

2)用不同剂量的γ射线处理HCC(Hepatoma carcinoma cell)后,用CCK8(cell counting kit-8)实验检测细胞的增殖能力,吸光度值的大小可以反应活细胞的相对数量;划痕实验检测细胞的迁移能力,细胞移动的距离可以代表迁移能力;Transwell实验以及MPP-9蛋白表达量检测来反应细胞的侵袭能力,穿过的细胞越多,MMP-9蛋白的表达越多,细胞的侵袭能力越强;annexin V/PI染色(流式细胞术)和P53凋亡蛋白的表达量测定来检测细胞的凋亡情况。

3)用SPSS17.0软件统计分析实验结果,P<0.05表示差异有统计学意义。

结果:1)γ射线处理细胞后,细胞失去了正常形态,出现了细胞变形,漂浮,细胞膜不完整,胞质内有空泡,细胞碎裂等一系列变化;2)γ射线处理后24h,48h,72h,细胞的增殖能力都明显受到抑制,细胞活力跟培养时间和γ射线剂量成反比,随着培养时间和剂量增加,细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.01);3)γ射线对细胞的迁移能力有抑制作用,24h划痕实验结果显示,随着剂量增加,细胞迁移的距离减小,差异有统计学意义(P<0.01);4)γ射线对细胞的侵袭能力有抑制作用,随着剂量增加,穿过小室的细胞数量逐渐减小,差异具有统计学意义(P<0.01);Western Blot法结果显示,辐照后,MPP-9蛋白的表达量降低(P<0.01);5)γ射线会抑制细胞的克隆形成,20Gy开始,细胞没有克隆形成。

人体肝癌细胞系SMMC-7721非显带技术下的核型分析

人体肝癌细胞系SMMC-7721非显带技术下的核型分析范宁;高磊;汪艳;米亚静;景晓红【摘要】Objective To analyze karyotype of human hepatoma cell lines SMMC-7721 using non-banding technique. Methods SMMC-7721 cells were cultured in vitro, followed by cell synchronization with colchicine, hy-potonic treatment and Giemsa staining, and then non-banding karyotype was analyzed. Results The majority number of karyotypes of SMMC-7721 cell lines was 60 to 70. Peaks occurred mainly in the E group, and the majority of E, F, G groups were more than half of the total number of chromosomes or even more than 60%(25/128). For the structure of chromosomes, dicentric chromosome, chromosome sharing three centromeres and ring chromosome could be found in a few cells. Conclusion The analysis of the abnormal chromosome will help us to deeply understand transforma-tion and deterioration of liver cells, which provides the genetic basis for preliminary clinical diagnosis and treatment.%目的应用非显带技术,分析人体肝癌细胞系SMMC-7721的染色体核型.方法体外培养SMMC-7721细胞,通过秋水仙素使细胞同步化,低渗、滴片、吉姆萨染色,进行非显带染色体核型分析.结果数目方面,SMMC-7721细胞系核型的众数为60~70条,峰值主要出现在E组,通过分析染色体数目在50~70个之间的较清晰的25个核型发现,E、F、G组染色体总数大多过半甚至超过60%;结构方面,分辨出双着丝粒染色体、含有3个着丝粒的染色体和环状染色体.结论上述染色体的数目异常与结构畸变,对认识肝细胞的转化、恶变以及临床的初步诊治提供了细胞遗传学基础.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2015(026)020【总页数】3页(P2967-2969)【关键词】SMMC-7721;非显带;核型分析;超二倍体【作者】范宁;高磊;汪艳;米亚静;景晓红【作者单位】西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院临床医学院,陕西西安 710021;西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室,陕西西安 710021;西安医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室,陕西西安 710021【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝癌是一种危害性较大的恶性肿瘤，过去对肝癌的研究，多采用由致癌剂诱发的肝癌动物模型，但这种动物的肝癌模型毕竟和人体肝癌的生物学特性存在着相当大的差异[1]。

益气法对SMMC-7721和Hepa1-6肝癌细胞体外抑瘤作用和细胞周期影响的实验研究_陈嘉璐

益气法对SMMC －7721和Hepa1－6肝癌细胞体外抑瘤作用和细胞周期影响的实验研究陈嘉璐（苏州市中医医院，江苏苏州215003）摘要：目的：观察中医益气法对SMMC －7721和Hepa1－6肝癌细胞的体外抗癌作用；从细胞周期揭示扶正抗癌的作用机制；为采用中西结合治疗肝癌提供理论与实验依据，为肝癌的防治开辟新的研究领域。

方法：运用细胞培养技术，采用现代药理学方法，MTT 法从细胞水平评价益气法对肝癌细胞增殖的抑制作用。

并采用流式细胞术（FCM ）检测细胞周期变化，从细胞周期角度观察中医扶正治法对肝癌细胞周期的影响。

结果：体外研究提示益气法对肝癌细胞具有不同程度的抑制作用，且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性，与空白组比较在50mg /mL 浓度以上有统计学意义（P ＜0.05），益气各浓度组对两种不同的肝癌细胞有不同程度的G2/M 期阻滞作用。

结论：益气法在体外对肝癌细胞有抑制作用，益气法有G2/M 阻滞作用。

关键词：扶正治法；益气法；肝癌；细胞周期中图分类号：R285．5文献标识码：A 文章编号：1000－1719（2011）05－1005－04Experimental Research on the Effect of Yiqi Treatment of TraditionalChinese Medicine on Hepatoma Carcinoma Cell Cycle in VitroCHEN Jia-lu（Suzhou Hospital of TCM ，Suzhou 215003，Jiangsu ，China ）Abstract ：Objective ：This project is to study the anti －cancer effect in vitro of Yiqi Treatment on SMMC －7721and Hepa1－6liver cancer cells ，thus revealing the anti －cancer mechanism of the treatment in adjusting and controlling cancer cell cycle ，and supplying theoretical and experimental evidence for Fuzheng Treatment through Yiqi Treatment and the combination of Chinese and Western medicine．Methods ：Cell culture technology ，modern pharmacological method and MTT method are applied to evaluate Yiqi Treatment on the proliferation of liver cancer cell．In addition ，flow cytometry （FCM ）is used to examine cell cycle change ，by which ，to observe the effect of Yiqi Treatment on liver cancer cell cycle．Results ：The research in vitro showed that （1）Yiqi Treatment inhibited the proliferation of liver cancer cell to some extent ，and this inhibition showed a concentration dependence within a certain range and statistical significance （P ＜0.05）compared with the control group （concentration ≥50mg /mL ）．（2）Yiqi Treatment could block the cell cycle at G2/M phase．Conclusion ：The above results suggested that Fuzheng treatment showed inhibitory effect on the hepatoma in vitro．Yiqi Treatment could block the cell cycle at G2/M phase．Key words ：Fuzheng treatment ；Yiqi Treatment ；hepatoma carcinoma ；cell cycle 收稿日期：2010－09－12作者简介：陈嘉璐（1974－），女，江苏苏州人，主治医师，硕士，研究方向：中医内科肿瘤学。

大鼠肝癌的细胞学和分子生物学病理学研究

大鼠肝癌的细胞学和分子生物学病理学研究肝癌是一种极其危险的恶性肿瘤，其发生率日益增加，已成为全球范围内的一个重大公共卫生问题。

其中，大鼠肝癌是一种非常常见的实验动物模型，一直以来被广泛应用于肝癌的研究中。

本文将从大鼠肝癌的细胞学和分子生物学病理学研究入手，一探肝癌治疗技术的发展趋势。

一、大鼠肝癌的细胞学研究大鼠肝癌的细胞学研究主要是通过细胞培养和移植瘤的方式进行。

通过对肝癌细胞进行相关研究，可以深入了解肝癌形成和癌细胞的生理学特点。

此外，肝癌细胞的研究也可以为开发新的治疗方法提供有力的基础。

目前，大鼠肝癌的细胞培养研究主要以HCC-T，HCC-LM3，HCC-X和SMMC-7721等四种细胞系为主。

其中，HCC-T和HCC-LM3是两种来自人肝癌的肝癌细胞系，具有较为明显的恶性肿瘤特征，是当前肝癌研究中最为常用的模型。

此外，HCC-X和SMMC-7721也被广泛用于大鼠肝癌的研究中，其生长速度较快，同样具有较高的细胞转移和侵袭能力。

对肝癌细胞进行体外培养，可以获得大量肝癌细胞用于进一步实验研究。

此外，通过体外培养还可以筛选出针对肝癌细胞生长的化合物和药物，为肝癌的治疗提供新思路和新方法。

二、大鼠肝癌的分子生物学病理学研究大鼠肝癌的分子生物学病理学研究主要是探究肝癌发生和发展的分子机制。

肝癌的发病与多种因素相关，包括环境因素、营养因素、基因突变、表观遗传变异等。

因此，从分子水平上探究肝癌发生的机制对于肝癌的防治具有非常重要的意义。

大鼠肝癌的分子生物学病理学研究主要涉及到两个方面，一是肝癌细胞内的分子机制，二是肿瘤微环境的分子机制。

肝癌细胞内的分子机制主要涉及到信号通路，如ALK、VEGFR、JAK/STAT等信号通路，以及肿瘤抑制基因、增殖因子等分子机制。

而肿瘤微环境的分子机制主要涉及到肝细胞、肿瘤细胞、免疫细胞等各类细胞在交互作用过程中所产生的一系列信号转导。

肝癌分子机制的研究可以为疾病的治疗提供新的思路和途径。

肝癌实验报告

一、实验背景肝癌，作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国居高不下。

近年来，随着生物技术和分子生物学研究的不断深入，肝癌的发病机制和治疗策略得到了新的认识。

本实验旨在通过体外细胞培养和分子生物学技术，研究肝癌的发生、发展及治疗策略，为临床肝癌的诊断和治疗提供理论依据。

二、实验材料与方法1. 实验材料- 人肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721）- 人正常肝细胞系（LO2）- 胶原酶、胰蛋白酶- DMEM培养基、胎牛血清- 实验试剂：RNA提取试剂盒、PCR试剂盒、Western blot试剂等- 仪器：细胞培养箱、荧光显微镜、PCR仪、凝胶成像系统等2. 实验方法（1）细胞培养将人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721以及人正常肝细胞系LO2分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

每隔2天更换一次培养基。

（2）细胞增殖实验采用CCK-8法检测细胞增殖情况。

将细胞以1×10^4个/孔的密度接种于96孔板，每组设6个复孔。

培养24小时后，每孔加入10μl CCK-8试剂，继续培养4小时。

用酶标仪测定各孔的吸光度（OD）值。

（3）RNA提取及PCR检测采用RNA提取试剂盒提取细胞总RNA，利用PCR技术检测目的基因的表达。

以β-actin为内参基因。

（4）Western blot检测提取细胞蛋白，进行SDS-PAGE电泳，转膜，封闭，一抗孵育，二抗孵育，ECL显影。

三、实验结果1. 细胞增殖实验与正常肝细胞系LO2相比，肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖速度明显加快（P<0.05）。

2. PCR检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌基因（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌基因（如p53、PTEN等）的表达显著下调。

3. Western blot检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌蛋白（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌蛋白（如p53、PTEN等）的表达显著下调。

美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

１
●
照试剂盒说明书操作进行，加入５
ＡｃｉＶＦＴｎｘｎ－ＩＣ
和５ＩＬＰ轻轻混匀，２５℃铝箔避光孵育１ｉ，０ｍｎ上流式细胞仪检测，复３次，得数据经Ｂｏｏｓａ重所ｉｃｎｏ
专用软件处理，分析细胞凋亡率。１２５细胞干预及细胞线粒体膜电位测定细胞．．
验。
院科学实验中心提供。美洲大蠊（阳好医生中药绵
饮片有限公司，铂（南个旧生物药业有限公顺云
司）ＤＭ培养基干粉购自ＧＢＯ公司，；ＭＥＩＣ小牛血清
购自杭州四季清生物制品公司，蛋白酶购自Ｈ — 胰ｙｃｃｍ｜ｅ公司，甲基偶氮唑蓝（Ｆ、甲基亚砜ｏ四ＭＴ）二
美洲大蠊属昆虫纲，蠊目，蜚蜚蠊科，称蟑螂。俗
亭科学仪器厂）Ｘ一０，Ｄ１１型倒置相差显微镜（日本ＯＹＵＬＭＰＳ公司）流式细胞仪（国Ｂ，美Ｄ公司）酶，标仪（国ＢｏＲｄ公司）美ｉ—ａ。
山东医药２１年第５卷第３— ０２１荡２ｉ使紫色结晶充分溶解后，０ｒｎａ酶标仪检测５０７ｎｍ处Ａ值，重复实验３次，计算ＩＲ。ＩＲ＝（１一实验
组Ａ值／照组Ａ值）Ｘ１０。对０％１２４细胞干预及细胞凋亡率检测细胞分组及．．
１２方法．
用于药物始载于《农本草经》Ｊ神 ¨ 。现代药理研究表明美洲大蠊具有促进伤口愈合、织修复作用；组增强免疫、肿瘤作用；抗抗菌、抗炎、镇痛、抗病毒作用；强心升压、善微循环作用Ｊ改。近年来，们对美人洲大蠊药用价值的研究越来越多，有关美洲大蠊但对肝癌细胞的作用及机制研究少有报道。２１年２０１月～０２年２月，观察了美洲大蠊对人肝癌细２１我们胞增殖及凋亡作用的影响，步探讨其作用机制。初

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究

莪术挥发油抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究王娟;王顺启;倪虹;陈力;宋文芹【期刊名称】《天津中医药》【年(卷),期】2003(20)1【摘要】[目的]探讨莪术挥发油对肝癌细胞生长抑制的作用机制。

[方法]用荧光显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化 ,采用噻唑氮蓝 (MTT)法检测莪术油对细胞生长的抑制作用 ,并用流式细胞仪检测细胞周期的阻滞及凋亡率。

[结果]MTT结果表明莪术油浓度与细胞生长抑制率成正比。

荧光显微镜观察结果显示 ,1.0mg/mL的莪术挥发油作用24h后可有效诱导肝癌细胞凋亡 ,细胞形态产生明显的凋亡特征 ,细胞核凹陷或固缩成均一的致密物。

流式细胞仪检测结果表明 ,莪术油作用后细胞凋亡率可达28.15 % ,细胞周期被阻滞在S期。

[结论]莪术挥发油可抑制肝癌细胞SMMC_7721的生长 ,诱导凋亡及阻滞细胞周期是其抑制生长的重要机制。

【总页数】4页(P48-51)【关键词】莪术挥发油;肝癌细胞;噻唑氮蓝;细胞生长;流式细胞仪;抑制;细胞形态学;SMMC—7721【作者】王娟;王顺启;倪虹;陈力;宋文芹【作者单位】南开大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用 [J], 孙萍;张良明;孙等军;董亮亮2.乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用 [J], 肖娟;刘选明;颜冬兰;刘让茹;章为;谭桂山3.光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制 [J], 夏国豪;章永红;潘良熹4.槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用 [J], 贺凯;刘明华;任美萍;李蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

别按不同感染复数（Ｏ）同一作用时问点感染人肝癌细胞株ＳＭＣ７１以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ａ５ＭＩ在Ｍ７２。ｄ／
Ｆ５ＥＦ３一ＧＰ的感染效率；别以逆转录聚合酶链反应（ＴＰＲ和蛋白质印迹法检测ＸＦＲＡ和蛋白表达；甲基分Ｒ．Ｃ）Ａ１ｍＮ以
・
７４・
ＣｈｎＪＧａｔｅｔｒｌ２０，１１，Ｎｏ２ｉｓｒｎｅｏ，０９Ｖｏ．４ｏ．
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论
ห้องสมุดไป่ตู้
著・
腺病毒介导ＸＦ基因诱导人肝癌细胞株Ａ１ＳＭＭＣ７１亡的实验研究７２凋
术
朱黎明涂水平姚玮艳
乔敏敏江石湖
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ＡｄｎｖｒｓｍｅｉｔｄＸＡＦ１ＧｅｅＥｐｅｓｏｎｄｃｓＡｐｐｏｉｎＨｕｅｏｉｕ－ｄａｅｎｘｒｓｉｎＩｕｅｏｔｓｓｉｍａｐｔｃｌｌｒＣａｃｎｍａＣｅｌＬｎｎＨｅａｏｅｌａｒｉｏｌｉｅｕ
ＲｉｎＨｓｉｌＳａｇａＪｏｏｇＵｉｒｉｃｏｌＭｅｉｎ，ｈｇａ（０２）ａｉｏｐｔ，ｈｎｈｉｉｔｎｎｅｓｙＳｈｏｏｄｃｅＳａｈ２０５ｊａａｖｔｆｉｎｉ０

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究

三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究苏颖;陈增;邹长棪;林可焴;林华妹【期刊名称】《肿瘤防治杂志》【年(卷),期】2003(10)10【摘要】目的 :应用体外培养的肝癌细胞株 (SMMC 772 1)观察砷剂 (As2 O3)的凋亡诱导作用。

方法 :采用MTT法检测As2 O3对肝癌细胞增殖的影响 ,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2 O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响。

结果 :As2 O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量 -时效关系 ;As2 O3可使肝癌细胞周期改变 ,与浓度有关 ,与作用时间未见明显关系 ;As2 O3诱导肝癌细胞发生凋亡 ,并与浓度、时间有关。

结论 :As2 O3能抑制肝癌细胞增殖 ,改变肝癌细胞周期。

【总页数】3页(P1069-1071)【关键词】肝肿瘤;病理学;砷剂;药理学;脱噬作用;药物作用;肿瘤细胞;培养的;药物作用【作者】苏颖;陈增;邹长棪;林可焴;林华妹【作者单位】福建省肿瘤医院放射生物研究室【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外作用及可能的机制 [J], 朱正;沈宇;李德春2.三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡作用的研究 [J], 梁桃;刘铁夫;史立君3.三氧化二砷对人肝癌细胞选择性抑制作用的实验研究 [J], 刘琳;秦叔逵;陈惠英;陈洪;刘文虎;王锦鸿4.三氧化二砷与肿瘤坏死因子联合对人肝癌细胞系HepG2抑制作用的研究 [J], 宋铁芳;刘冰熔5.三氧化二砷对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402作用相关机制的研究 [J], 李远航;朱科伦;曾文铤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。