茶多酚脂质体体外透皮实验研究

２来自百度文库实验 方 法
２ １ 脂 质体 的制 备 ．
采用逆 向蒸发法 制备。将大豆卵磷脂 、 固醇 Ｊ 胆 和 ｖ 按一定 比例加入到茄形瓶中，加入氯仿 ９ ｌ Ｅ 使 ｍ 其溶 解 ，在旋 转蒸 发仪 上蒸发 氯仿 ，瓶 内壁 上形成 一 层均匀的膜脂 ，加入乙醚 ９ ｌ ，膜脂溶解后 ，加入含 ｍ 茶 多酚 的磷酸 盐缓 冲液 ３ｍｌ ，然后 在超声 仪 上进行 间 歇超 声 直至形 成稳 定 的 Ｗ／ Ｏ型 乳 剂 。将 此混 合 液 在 旋转蒸发仪上减压蒸发去除有机溶剂 ，在瓶壁上形成 凝胶 ，继续旋转蒸发 ，使瓶壁上的凝胶脱落，然后再 继续蒸发 ，得到均匀的脂质体？ 悬液 ，通氮气直到无 昆
摘 要 ：采用 Ｆａｚ ｒ 扩散 法进行 离体兔皮渗透 实验 ，考察茶 多酚脂质体体 外透 皮渗透情 ｎ 况。结果表明茶多酚脂质体能有效地渗透过皮肤 ，经皮释放 药物能在短时间内较快达到一定药
量 ，随后 缓慢持 久地释放 药物 ；药物 的 累积释放 药量 与 药物的 浓度 、胆 固醇 的量等 因素 有 关。
３２ 类脂 比、茶 多酚浓 度对透 皮 的影 响 ．
３ ｇｍ ） 将卵磷脂与胆 固醇摩 尔 比分别为 １１ ０ｍ ／ １， 如 ∞ 如 加 ｍ Ｏ ：、１ ：．和 １０ ３ Ｏ５ ：． 的脂质体进行 １ 透皮 ， 以得到累积 ２ ｈ 可 释放 药量 Ｑ与 时 间 ｔ 间 的关 系方 程 ，即 ０ 之 ４方 程 ， 同时还可以得到透皮速率常数 ｋ 。实验所得数据及结 果见 表 ２ 。
表１ Ｔ Ｐ累积释放药量 Ｑ ｖ／ｍ ｅｃ￣ ，
ｆ 方程
Ｑ＝４ ．５ ＋ｌ．１ Ｑ＝１ ．５ ＋５ ．４ ４４ ｔ ９ ７ ４ ９ ｔ ５ ８
图 １ 透 皮 吸收 装 置 图
释放池 为 ｌ Ｉ 一次性 注射 器 改装 而成 ，长 ９ Ｏｌ ｌ ｌ ｔｌ ｉ，内径１５ｔｌ ｌ ． ｉ，接受池为 １０ｍ 的烧杯 ，内装 ５ ｌ ０ ｌ Ｏ Ｉ ０９％Ｎ Ｃ 溶液作 为接受液 ，置于 ３ ｌ ． ｌ ｌ ａ１ ７℃的恒温水 浴中。在烧杯杯嘴处固定一静脉输液针头 ，连接 ５Ｉ ｌ ｌ ｌ 注射器 ，用于取样和补液。将预先处理好的兔皮用手 术线 固定在释放池下端 （ 角质层朝向释放池 ） ，在释 放池 内加入 ｌ ｌ 茶多酚脂 质体 （ ． 制备 ） ｌ Ｉ ｌ ２１ ，并使兔 皮的真皮层恰与接受池的接受液面接触 ，透皮 面积为 ７０５ｃ ２ ． ｍ 。开启电磁搅拌 器 ，保持恒 速搅拌。设 定 ６ 时间取样 ，取样 时 间分别为第Ｏ ５ 、２ 、６ 、 ．、ｌ 、４ 、８ ｌ、ｌ、２ ，每次取样 ３Ｉ ，取样后补加相同体积 Ｏ ２ ４ｈ ｌ ｌ ｌ 的新鲜接收液。样液经Ｏ４ ／ ． ａ ５ ｍ微孔滤膜过滤后 ，用 紫外分光光度计 在 ２５ｈｌ ７ ｉ处测定 Ａ值 ，代入 回归方 ｌ
备 液 。量取 贮 备 液 Ｏ ５ １Ｏ ．、４ ０ ．、８ Ｏ ．、 ． 、２ Ｏ ．、６ ０ ． 、 ｌ ．、ｌ． ｌ ＯＯ ２ ＯＩｌ ０ ９％Ｎ Ｃ 溶 液 定 容 至 １０ｍｌ ｌ，用 ． ａ１ ０ 即
程 ，求出相应的药物浓度，按 以下公式计算累积释放 药 量 Ｑ：
ｎ 一１
ｒ ＝０ ９９８ ２ ．９ ，在 １５ ．８～３ ．２ Ｉｌ 围 内线 性 ７ ９ ｌ 范 ｌ 关 系 良好 （ 为 方差 ） ｒ 。 ２ ４ 体 外 透 皮吸收 实 验 ．
用 自制 Ｆａｚ ｒ 扩散池装置 （ ｎ 如图 ｌ 所示）进行体 外透 皮吸 收实验 。
Ⅱ Ｉ 的茶多酚脂质体 ，分别进行 １ ｈ ｌ ｌ ｌ ２ 离体兔皮透皮 实验 ，考察脂质体对 Ｔ 透皮速率及累积释放药量的影 Ｐ 响。实验数据见表 ｌ 不同制剂累积释放药量 一 ， 时间关 系曲线见 图 ２ 。
氯 仿 （ Ｒ． ，上 海 化 学 试 剂 有 限 公 司 ； 乙 醚 Ａ． ） （ Ｒ．，上海久 像 化 学 试 剂 有 限公 司 ；实验 用 家 兔 Ａ， ） （ 性 ， （ ． ±０ ２ ｇ ，东 南 大 学 动 物 中 心 提 供 ； 雄 １８ ．）ｋ ） ０ ９％生理 盐水 ，南京 小 营制药 厂 。 ． Ｒ ５－８旋 转 蒸 发 仪 ，上 海 亚 荣 仪 器 厂 ：Ｋ － Ｅ ２９ Ｑ ２０ 医 用 超 声 波 仪 ，昆 山市 超 声 仪 器 有 限公 司 ； ５Ｅ型 Ｆａｚ ｒｎ 扩散 池 ， 自制 ；７２ ５Ｓ紫 外 一可 见 分 光 光 度 计 ， 上 海棱光 技术 有 限公司 ；电子恒 温不锈 钢水 浴锅 ，上 海 宝磊 仪器 有 限公 司 。
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第２ ｏ卷 第 ２期 ２０ Ｏ６年 ３月
株 洲
工
学
院
学
报
Ｖ ２ ｏ． ｄ． ０ Ｎ ２ Ｍａ ．２ ｏ ｒ ０６
Ｊｕｎ ｌ ｆＺ ｌ 删ｌ ｎｔｕｅｏ Ｔ ｃ ｎｌｇ ｏ ｒａ ｏ ｈ】 ｓｔｔ ｅ ｈ ｏｏｙ ｄ Ｉ ｉ ｆ
关键词 ：茶 多酚 ；脂质体 ；累积释放 药量 ；经皮渗透 中图分类号 ： ３２ Ｒ ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： ０ ８ ２１（０６０ — ０５ ０ １ — ６１２０ ） ０２ — ４ ０ ２ 锡世纪生物药业有 限公 司；Ｖ ，江苏春之谷生 物制 Ｅ 品 有 限 公 司 ； 大 豆 卵 磷 脂 （ ｏｂａ ｈ ｓｈｔｙ— Ｓｙｅｎ Ｐ ｏｐａｄｌ ｉ ｃｏｉ ，ｓＣ） ｈｌｅ Ｐ ，北 京双 璇微 生物 培养 基 制 品厂 ；胆 固 ｎ 醇 （ ｈｌ ｔｏ，Ｃ ） Ｃ ｏｓｒ ｅ ｅ ｌ Ｈ ，中 国医药 集 团上海化 学试 剂 公 司 ；Ｋ－Ｐ ４（ Ｒ．， Ｉ Ｏ Ａ． ） 南京 化学试 剂 厂 ；Ｎ ２ Ｐ ４ Ｉ ２ ａＨ Ｏ ・ ｌＨＯ （ Ｒ．，中 国 医 药 集 团上 海 化 学 试 剂 公 司 ； ２ ２ Ａ． ）
面的研究 ．
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株
洲
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报
２０ Ｏ６焦
醚味，备用。 由于茶多 酚芳环上有 多个 酚羟基 ，使其较 易氧 化 ，所以加入 ｖ 作为抗氧剂。 Ｅ ［ 引 ， ２ ２ 离体 兔皮 的 制备 ． 取体重 （ ． ０ ２ （ 健康家兔 ，处死 后立 即 １８± ．）ｌ ｇ 仔细剃除腹部的兔毛，剥离腹部皮肤 ，并去除其皮下 脂肪 ，即得离体兔皮，选择无 肉眼可见伤痕的皮肤供 实验用 。离体兔皮用蒸馏水冲洗干净 ，再用生理盐水 冲洗 至无浑浊 为止 ，泡 于０ ９％生理盐水 中，置 于 ． ４ ℃冰箱冷藏备用。 ２３ 标 准 曲线绘 制 ． 称取 茶 多 酚 ３ ． ｇ １６ｍ ，用 ０ ９ ％Ｎ Ｃ 溶 液 溶 解 ， ． ａ１ 稀 释定 容 至 １０ｍｌ ０ ，即得 质 量 浓度 为 ３６ ／ｌ的贮 １ Ｉｌ ｌ
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第２ 期
旷英姿 ，马全红 ， 郝小 祯 ， 周华 峰 ， 顾
宁
茶多 酚脂质体体外透皮实验 研究
２ ７
－Ⅲ。∞ 蔽 哥制 熠｛ ｚ ．ｉ ＿ 孽 晕
液累积释放药量，即脂质对 Ｔ 透皮有影响 ，Ｔ 溶液 Ｐ Ｐ 的累积 释放 药 量 大 于 Ｔ Ｐ脂 质 体 ，经 Ｓ Ｓ １ ． 件 Ｐ Ｓ ０软 ２ 进行 ＰｉｄＳｍ ｌ ｓ检验 ，Ｐ＜Ｏ０ ａｅ ａ ｐｅ Ｔｔ ｔ ｒ ｓ ｅ ．５二者 之 间有 显著性 差异 。
Ａ为透皮面积 ，本实验取值为７０５ｃ ２ ． 。 ６ ｍ 以累积 释 放 药 量 Ｑ 对 时 间 ｆ 进行 线 性 回 归 ，所 得斜率 ｋ 为透皮速率常数 ， 单位为 （ｍ ．） ｃ ２ｈ。
３ 结 果 与讨 论
３１ Ｔ ． Ｐ溶 液和 １Ｐ １脂质 体 的透皮 比较 将质量 浓 度 为 ２ Ｉｌ ０Ⅱ ｌ 的茶 多 酚溶 液 以及 含 ２ ｌ ０
脂 质 体 （ｉｏｏ ） 是 １６ １ ｓｍｅ ｐ ９５年 英 国 学 者 Ｂｎ — ａｇ
ｌ Ｌ 等将磷脂 分散在水 中进行 电镜观察 时发现 的。 姗 １ Ｊ 磷脂分散在水中形成多层囊泡，每一层均为脂质双分 子层 ，具有 类似 生 物膜结 构 。脂质 体具 有 亲水性 和疏 水性 ，可 以促进 水溶 性或 难溶 药物 的经 皮 吸收 。载药 脂质体 可改 变原 形药 物 的理化 性质 ，使 药物 直接 作用 于病变部位 ，具有储存作用 ，使药物持续释放 ，减少 药物一次性释放引起的局部毒副作用 。将脂质体局部 用药 ，可 以逐 渐 释放活性 成 分 ，通 过毛细 血管 吸收进 入体 循环 ，产 生全 身或 局部 治疗 作用 。脂 质体 透皮 给 药 为近 几年来 研究 较 多 、发展较 快 的给药 方式 ，它 避 免了肝脏的首过效应和药物在 胃肠道的降解 ，提高生 物 利用 度 ，给药 方便无 痛 苦 ，患者 乐意 接受 。 茶 多酚 （ｅｐｌｐｅｏｓ ］）是茶 叶 中所含 的一 Ｔａｏｙｈｎｌ，１Ｐ 类 多羟 基酚类 化 合物 的总 称 ，它是 一种 新型 天然抗 氧 化剂 ，具 有高效 的抗 衰老 、抗 辐射 、消除人 体过 剩 的 自由基 ［ｌ ２、去脂 减 肥 、降低 血糖 、血脂 和胆 固醇 、预 防心血管疾病及抑制肿瘤 细胞 等多种保健和药理功 能 ，还有润肤 、防皱、美容 、吸收紫外线 、抑菌 、 抗 菌、 消炎等功效。但 １ 性 质不稳定 ，容易被氧化 ， ］ Ｐ 难以维持长期效用。经脂质体包封后 ，可增加 Ｔ Ｐ的 稳定性 ，并使其具有较长的功效 。目前国内尚未见有 关茶多酚脂质体 的经皮渗透作用 的研究报道 ，为此 ， 本研究对茶多酚脂质体进行 了体外透皮初步实验。
１ 材 料 与 仪 器
实验 所用 材料 为 ：茶 多 酚 （ 含量 ≥ ９ ． ） ８０％ ，无
收稿 日期 ： ０５—１ ２ ２０ ０— ６ 基金项 目： 江苏省 自然科学基金创新人才资助项 目 （ ｌ ０２ｏ ） Ｂ（ Ｏ４４ ２
作者简介 ：旷英姿 （９３ ， ， １６ 一） 女 湖南湘潭人 ， 湖南化工职业技术学 院副教授 ，东南大学硕 士，主要从 事纳米药物载体 方
茶多酚脂质体体外透皮实验研究
旷英 姿 。马全 红 。郝 小祯 。周 华峰 。顾 宁
（． Ｉ湖南化工职业技术学 院 化学 工程系 ， 湖南 株洲 ４２０； ． 大学 化学化工 系， １ ４ ２东南 ０ 江苏 南京 ２０９； １ ６ ０ ３东南大学 生物 医学 工程 系， ． 江苏 南京 ２０９） １０６
值 为 ３ｍｌ ；
得标准液 。以０ ９％Ｎ Ｃ 溶液作为参 比溶液 ，在 ２５ ． ａ１ ７ ｎｌ ｌ 处用紫外分光光度计测定吸光度 Ａ值 。以 Ａ值对 ｉ 茶 多酚 质量 浓度 ｃ （ Ｉ１ ｌ）进行 回归 ，回归方 程为 ｌ
Ａ ＝０． ２ Ｃ＋０． ０ ０４７ ０ ８ １．
Ｑ＝
ｃ× ＋ （ × 一 聋 ｃ ） ｆ
式 中：
Ｃ 为第 ｎ个 取样点测得 的药物质量浓度 ，单位
为ｖ ｅ ； Ｖ￣
Ｃ为第 ｆ 个取样点测得的药物质量浓度 ，单位为
ｔ ／ ｌ ￣ ｍ ； ｇ
为接受液总体积 ，本实验取值为 ５ ｌ ０ｍ ； 为第 ｆ 个取样点取出的接受液体积 ， 本实验取
吕
、
蠲
餐 襞
璐 ｌ ４
图 ２ Ｐ累积释放药量与透皮时 间的关系 Ｔ
结果表明，１ 溶液的透皮速率大于 １ 脂质体； １ Ｐ １ Ｐ １ 脂质体累积释放药量随时间上升较 １ 溶液缓慢 ， １ Ｐ １ Ｐ 除第０５ｈ ． 和第 ｌ 外 ，其余各个时间点均低于 １ ｈ Ｐ溶