生物脱霉剂对黄曲霉毒素B_1的作用研究

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参考文献
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×100 %。
1.4.2 全收粪试验检测生物脱霉剂体内脱毒效果
试验分为预试期、 正试期以及体况恢复期 3 个阶
段,正试期包括禁食排空、强饲和粪尿排泄物收
集 3 个过程,其进程见表 1。
表 1 各试验期的饲喂时间与饲喂方法
预试期
禁食排空期
粪尿排
强饲
体况恢复期
泄物收集
时间
3d
48 h
按个体计时 48 h 10 ~ 14 d
(仍在溶液中)与结合型霉菌毒素(在吸附剂中)分
离,并向沉淀中加入 5 mL 生理盐水并重复离心 1
次,弃上清液,用试剂盒测定 2 次离心所得上清液
中黄曲霉毒素 B1 的量。 生物脱霉剂对黄曲霉毒素
B1 的吸附率的计算公式为:
≥ ≥ 吸附率=
1- 样品上清中 AFB1 的量 空白组上清中 AFB1 的量
饲喂方法 未经霉变的玉米粉 10 %葡萄糖 霉变玉米粉 50 g 自由饮水 肉鸡全价配合料
强饲后立即装好集粪瓶, 以重复组为单位收 集 48 h 的排泄物,1 ~ 2 h 收集 1 次,排泄物取出 后 于 60 ℃烘 干 ,室 内 回 潮 24 h,称 重 ,作 为 每 个 重复组鸡的平均风干排泄物总量,粉碎,过 40 目 筛,混合均匀后装入取样袋内封存。
待测玉米:霉变玉米于 60 ℃烘干,粉碎过 40 目筛,准确称取 50 g 分装封存于塑料袋中,置 4 ℃ 冰箱中保存备用。 1.4 试验方法 1.4.1 生物脱霉剂体外吸附 AFB1 试验方法 取 一 定 量 的 生 物 脱 霉 剂 0.00 (空 白 对 照 组 )、0.25、 0.50、0.75、1.00 mg 加入 5 mL 无菌生理盐水,生物 脱霉剂浓度分别为 0.00 ‰(空白对照组),0.50 ‰、
调整为 2 μg/g 时,添加 1.2 ‰的生物脱霉剂,可吸附 98.34 %的黄曲霉毒素 B1,全收粪试验 表 明 ,在 霉 变 饲 料 中 添 加
1 ‰的生物脱霉剂,被吸附的黄曲霉毒素 B1 随粪便的排出率为 50.44 %,添加 2‰的生物脱霉剂,黄曲霉毒素 B1 的排
出率为 72.30 %。
目前, 全世界谷物饲料中污染霉菌毒素的比 例高达 25 %以上,除了对畜牧生产造成经济损失 外,部分霉菌毒素还具有致癌性或致畸性。从农业 及健康角度出发,污染最严重,分布最广,危害最 大的真菌毒素是黄曲霉毒素, 天然污染的黄霉毒 素以黄曲霉毒素 B1(AFB1)为主,它是由曲霉菌属 的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物,主 要污染玉米、花生、坚果等。 对于轻度霉变的饲料 与原料,可根据具体情况,采用不同的方法进行脱 毒处理, 脱毒方法一般有物理脱毒法、 化学脱毒 法 、酶 解 法 、吸 附 法 (陈 雪 峰 等 ,2007)。
菌毒素有效地带出体外。 生物脱霉剂将有机吸附 和物理吸附剂结合起来,显著提高了霉菌毒素随
粪便的排出率。 表 3 粪便与霉变玉米 AFB1 总量的测定
组别 空白对照
生 物 脱 霉 剂 /‰ 0
吸光值 取样量/% 0.161 37
AFB1 总量/μg 24.10
AFB1 排出率/% 38.2
试验 1 组
AFB1 的脱霉效果,将生物脱毒和物理吸附脱毒结 合起来,为霉变饲料脱毒剂的开发提供技术支持。 1 材料与方法 1.1 试验材料 生物脱霉剂,主要成分为活性嗜 酸乳杆菌、 嗜酸乳杆菌细胞壁及水合铝硅酸盐组 成。 1.2 主要试验仪器与设备 Multiskan MK3 酶标 仪 ,AFB1 检 测 试 剂 盒 (北 京 市 营 养 源 生 物 研 究 所),强饲设备。 1.3 试验动物与 分组 选 用 60 只 体 重 相 近 、健 康的 40 日龄肉鸡作为试验动物, 随机分为 5 组, 每组 3 个重复,每个重复 4 只鸡。
and the ratio of the afflatoxin B1 discarded with the feces compared to the total intaken amount was also detected.The re-
sult showed that,when adjusted the content of afflatoxin B1 in feed to 2 μg/g and added 1.2 ‰ biological agent in vitro, 98.34 % afflatoxin B1 was removed efficiently.When added 1‰ biological agent,50.44 % afflatoxin B1 was discarded with
按照 GB 样品 脂 肪 含 量≤ 3 %的 AFB1 提 取 方 法 (GB/T5009.22-1996,1998)进 行 提 取 。 AFB1 的含量使用 AFB1 检测试剂盒 (北京市营养源生 物研究所)测定,操作方法依照说明书。 2 结果与讨论 2.1 生物脱霉剂 体外吸附黄 曲霉毒素B1 的 效果 由表 2 可以看出,在霉变饲料中加入生物脱霉剂 后,各试验组中的黄曲霉毒素 B1 均被不同程度地吸 附, 生物脱霉剂添加量为 0.50 ‰、1.00 ‰、1.50 ‰、 2.00 ‰ 的 4 个 试 验 组 对 AFB1 的 吸 附 率 分 别 为 59.69 %、82.22 %、98.05 %和≥ 99.75 %, 其中添 加 2.00 ‰的生物脱霉剂组对黄曲霉毒素 B1 的吸 附率在 99.75 %以上, 饲料中的黄曲霉毒素基本 上已经被完全吸附,而添加 1.50 ‰的生物脱霉剂 组对黄曲霉毒素 B1 的吸附率高达 98.05 %,脱霉 效果非常显著。
≥ 99.75
培养 24 h,用 HPLC 测定 AFB1 的量,结果显 示有 两株 Lactobacillus amylovorus 和一株 Lactobacillus rhamnosus 可以去除 50 %以上的 AFB1。 另外,李 志 刚 等 (2003) 研 究 表 明 , 乳 酸 菌 结 合 黄 曲 霉 毒 素 B1 的强度在 4 % ~ 50 %,其中干酪乳杆菌干酪亚 种 CGMCC 11539 吸附黄曲 霉毒素 B1 能力 最强。 而生物脱霉剂中的乳酸菌细胞壁对 AFB1 也具有 很强的吸附能力。 Haskard 等(2001)系 统研究了 12 株乳酸菌, 其中 L.rhamnosus GG 对 AFB1 的结 合能力最强为 78.9 %,经过加热处理后的死细胞 对 AFB1 的 结 合 能 力 增 强 , 可 以 吸 附 84.1 % 的 AFB1。 他们推测死细胞也能大量结合 AFB1,并且 经过加热、 酸化处理的失活细胞由于细胞壁表面 的肽聚糖层交链减弱, 使得孔径增大, 其去除 AFB1 的能力强于活细胞。 由于生物脱霉剂含有活 性乳酸菌,不仅可以吸附饲料中的霉菌毒素,而且 乳酸菌在生长过程中产生抑制复合物, 可抑制毒 素的合成,同时降解已产生的毒素。生物脱霉剂中 的水合铝硅酸盐具有片层结构, 能够紧密结合 AFB1。 综合生物脱霉剂中 3 种有效成分的作用, 使得其脱霉效果显著。 尤其是加入 2 ‰的生物脱 霉剂,其脱毒效果非常理想。 2.2 添加生物脱 霉剂家畜粪 便黄曲霉毒 素B1 的 排出效果 由表 3 可见, 空白对照组粪便黄曲霉 毒素 B1 的总量为 24.10 μg,占霉变玉米中黄曲霉 毒素 B1 总量的 38.2 %, 有大量的霉菌毒素 B1 没 有随粪便排出而残留在动物体内。 试验 1 组即在 霉变玉米中加入 1 ‰的生物脱霉剂之后,粪便中 黄曲霉毒素 B1 的总量为 31.83 μg,占霉变玉米中 黄曲霉毒素 B1 总量的 50.44 %, 试验 2 组即在霉 变玉米中加入 2 ‰的生物脱霉剂脱霉效果最好, 粪便中黄曲霉毒素 B1 的总量为 45.62 μg,黄曲霉 AFB1 的排出率达 72.3 %,脱霉效果显著。 生物脱 霉剂中的乳 酸菌细胞壁 与黄曲霉毒 素 B1 能够紧 密结合,Haskard 等(2001)的研究表明,经 过热处 理的乳酸菌菌株 L.rhamnosus GG 结合 AFB1 的能
Peltonen 等(2001)将乳酸菌和 AFB1 在 37 ℃
表 2 生物脱霉剂体外吸附黄曲霉毒素 B1 的效果
生 物 脱 霉 剂 /‰ 0.50 1.00 1.50 2.00
AFB1 剩余/(ng/g) 806.2 355.6 19.05 ≤ 5.00
吸 附 率 /% 59.69 82.22 98.05
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中国饲料
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生物脱霉剂对黄曲霉毒素 B1 的作用研究
山东宝来利来生物研究院 张建梅 李国军 谷 巍
[摘要] 为了研究生物脱霉剂的脱霉效果,本试验测定了生物脱霉剂对黄曲霉毒素 B1 的吸附强度,同时采用全收
粪试验检测了霉变饲料添加生物脱霉剂后,家畜粪便中黄曲霉毒素 B1 的排出率。 结果表明,将黄曲霉毒素 B1 的浓度
1
0.158 30
31.83
50.44
试验 2 组
2
0.153 25
45.62
72.3
霉变玉米
-
0.178 10
63.10
3 结论 生物脱霉剂含有活性乳酸菌、乳酸菌细胞壁
及水合铝硅酸盐等有效成分,对霉变饲料的脱霉 效果非常显著,综合体内、体外生物脱霉剂对霉 变饲料中黄曲霉毒素 B1 的吸附性能,按照 1 ‰的
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力很强, 经过 5 次洗涤之后仍有 79 %的 AFB1 与 之结合, 仅有 21 %的 AFB1 被冲洗下来。 而水合 铝硅酸盐与 AFB1 的结合力也很牢固, 水合硅铝 酸盐中间的负电区域可以和 AFB1 结合, 并且由 于水合铝硅酸盐不被机体吸收,从而将结合的霉
[关键词] 生物脱霉剂;黄曲霉毒素 B1;吸附力
[中图分类号] S816.34
[文献标识码] A
[文章编号] 1004-3314(2009)05-0021-03
[Abstract] The afflatoxin B1 binding or degrading ability of the biological mycotoxin removement agent was studied,
the feces,while added 2 ‰ biological agent,72.30 % afflatoxin was discarded efficiently with the feces.
[Key words] biological mycotoxin removement agent;afflatoxin;absorption
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1.00 ‰、1.50 ‰、2.00 ‰,摇匀,加入 1Fra Baidu bibliotek0 μL 黄曲霉
毒素 B1 苯-乙腈溶液 (AFB1 浓度为 100 μg/mL)。 混 合 液 在 37 ℃ 下 ,180 r/min 培 养 1 h。 4 ℃ 以
10000 r/min 离心 10 min,将没有结合的霉菌毒素
生物脱霉剂安全无副作用, 通过某些微生物 的生物转化作用, 能破坏霉菌毒素的化学结构或 降低霉菌毒素的毒性, 受到广泛关注。 大量的研 究表明,乳酸菌可以控制其他微生物的生长,抑制 腐败菌和病原微生物的生长。
目前,大多研究只是局限在实验室的条件下, 对于乳酸菌类制剂在动物体内产生的防霉、 脱毒 效果的研究还鲜见报道。 本试验将体外试验和体 内试验结合起来, 检测生物脱霉剂对黄曲霉毒素
比例添加可以吸附饲料中不容易被肉眼察觉的微 量霉菌毒素,达到预防霉菌毒素中毒的目的;而对 于轻度霉变的饲料,添加 1.5 ‰的生物脱霉剂,可 以达到防霉脱毒的效果, 预防家畜食用霉变饲料 后中毒;中度以上能够用肉眼发觉的霉变严重的 饲料,应当先将霉变饲料分散,降低霉菌毒素的浓 度,再添加 2 ‰的生物脱霉剂进行脱毒。
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