筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选培训课件

膜上蛋白质分子和 脂质分子重新排布
细胞发生融合
6、优点：
突破了有性杂交的局限， 使远缘杂交成为可能
7、应用： 用于研究细胞遗传、细胞免
疫、肿瘤和生物新品种培养等的重 要手段。
最重要的用途：制备单克隆 抗体
问题讨论
１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个 体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？
物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。
2、缺点： 产量少、纯度低、特异性差
.
.
3、解决问题的设想: 免疫反应过程中，每一个B淋巴
细胞只分泌一种特异性抗体。 克隆单一的B淋巴细胞，形成细
胞群，获得大量的单一抗体。
4、面临的新问题： 一个B淋巴细胞不可能在体外培养
条件下无限增殖的。
.
.
问题讨论
1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
bdc
(1)图中的甲为苏格兰绵羊， e
乙为多莉羊。那么，a和b
是通过_______减分数裂形成的， 其DNA含量是体细胞的
甲
_______ 一；半c肯定是__ 细
体胞，乙的遗传性状与提供
_________细__胞的核绵羊 一致.
f 乙
(是2)有产—性生—生—甲殖—和—乙和的—过克—程隆—分—别 a
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理（离心、振 物理、化学方法
荡、电激）
（同左）
化学（聚乙二醇）灭活的病毒
获得杂种植株 主要用于制备
单克隆抗体
二、单克隆抗体
？ 1.抗体是由何种细胞产生的？ 2.2.抗体是如何产生的？
（一）获得抗体的传统方法
1、方法： 向动物体内反复注射某种抗原，使动
承__双__亲__细__胞___的遗传特性，既能 _分__泌__抗__体___,又能__无__限__增__殖___。
体外培养
注射到
5、C过程指细胞培养，该过程包括
小鼠腹腔
_原__代__培养和_传__代__培养两个阶段，其
中__5_0__代以内的的细胞属于细胞株。
• 世界上第一只克隆羊 a “多莉”的培育过程如 图所示，请据图回答：
不能，只能得到杂交细胞 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们
杂交或融合过程有什么影响？ 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中 不须去除细胞壁和再生出细胞壁。
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的 方法有哪些？
离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法
问题讨论
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还 有其他方法吗？ 能，还可以利用灭活的病毒（生 物方法）进行诱导
筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选
一、动物细胞融合
3、结果：形成杂交细胞。 杂交细胞：融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传信息的
单核 细胞。
4、诱导方法： 聚乙二醇（PEG）、 灭活的病毒、电激等。
5、过程：
3、过程： 病毒表面含有的糖蛋白和一些
酶能够与细胞膜的糖蛋白发生 作用，使细胞相互凝集。
细胞相互凝集 细胞膜打开
———————
不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性 状象d羊，发育也会受到f羊影响。
dc
f 乙
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细胞融合技术、细胞培养技术
3、单克隆抗体的概念： 化学性质单一，特异性强的抗体
4、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可大量制备。
（三）单克隆抗体的应用
①诊断疾病（识别作用，如 同位素标记单克隆抗体， 可诊断肿瘤、心血管畸形
优等点）：准确、高效、简易、快速
②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症 治疗，也可运载药物，如 “生物导弹”）
B淋巴细胞
诱导其融合的 方法有哪些？
骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选
（选择性培养基）
杂交瘤细胞
细胞培养
筛选，继续培养
足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群
体外培养 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
思考：
１、细胞融合后培养液中有几种细胞？
B BB
B瘤 瘤瘤 瘤 筛选杂种细胞
杂交瘤细胞 ２、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？
b
（3）在形成乙是的过程中，
需要将d的细胞核取出，将c
细胞核移入d细胞内，此技术 叫—核—移—植。所需的受体细胞
e
大多采用动物卵细胞的原因 是———卵胞——细具——胞有——大继——，续——易分——于化——操的——作潜——；能——卵。细 甲
—（4）绵羊的白色对黑色为
显色。若甲是白色绵羊，要
判断它是否纯合体，选用与 它交配的绵羊最好是—黑—毛—
提示： 1 .什么样的细胞可以产生抗体？
有何区别？ 共同点：两者都有无限增殖的能力 不同点：瘤细胞不能转移
（二）单克隆抗体的制备
1、设计方案：
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
2、单克隆抗体制备过程
注射抗原
（导向作用，作为载体，生物导弹 =单克隆抗体+药物，用于治疗肿瘤 ）
（位置准确、疗效高、副作用小）
单克隆抗体
小结
两个过程
动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法 ——灭活病毒
三个“一” 一个新细胞——杂交瘤细胞
一个优势——单克隆抗体特异 性强、灵敏度高的优势
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗 体实验方案
dc
f 乙
（5）在产生多莉羊时，需将e
细胞形成的早期胚胎移入另一
头在母细羊胞（工f程）中子叫宫—里胚—，胎—这—移种—技植—术 a
b
（6）继植物组织培养后，克隆
绵羊的培育成功，证明动物细
e
胞也有———全能性
（7）在繁殖多莉羊的过程中，
是否遵循孟德尔遗传规律？多
甲
莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的
关系是什么？———————
A
1、该实验方案的目的是_制__备__单__克__隆_ 抗体 2、该方案能达到预期效果吗？为什么？
骨髓瘤细胞 B
杂交瘤细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得
C
__B_细__胞__,该细胞能够产生_抗__体___
4、图中B为_细__胞__融__合_过程，常用 足够数量的细胞群 _灭__活__病__毒__作为诱导剂，该细胞继
５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本 原理是否相同？
相同，都是细胞膜的流动性
问题讨论
6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 物理或 丧失感染活性 仙台病毒 化学方法 保留融合活性
8、植物、动物细胞融合的比较
比较项目 融合的原理
步骤 诱导方法
用途
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞膜的流动性 细胞膜的流动性