筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选培训课件
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膜上蛋白质分子和 脂质分子重新排布
细胞发生融合
6、优点:
突破了有性杂交的局限, 使远缘杂交成为可能
7、应用: 用于研究细胞遗传、细胞免
疫、肿瘤和生物新品种培养等的重 要手段。
最重要的用途:制备单克隆 抗体
问题讨论
1、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个 体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?
物产生抗体,从动物血清中分离所需抗体。
2、缺点: 产量少、纯度低、特异性差
.
.
3、解决问题的设想: 免疫反应过程中,每一个B淋巴
细胞只分泌一种特异性抗体。 克隆单一的B淋巴细胞,形成细
胞群,获得大量的单一抗体。
4、面临的新问题: 一个B淋巴细胞不可能在体外培养
条件下无限增殖的。
.
.
问题讨论
1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体?
bdc
(1)图中的甲为苏格兰绵羊, e
乙为多莉羊。那么,a和b
是通过_______减分数裂形成的, 其DNA含量是体细胞的
甲
_______ 一;半c肯定是__ 细
体胞,乙的遗传性状与提供
_________细__胞的核绵羊 一致.
f 乙
(是2)有产—性生—生—甲殖—和—乙和的—过克—程隆—分—别 a
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 导原生质体融合 导细胞融合
物理(离心、振 物理、化学方法
荡、电激)
(同左)
化学(聚乙二醇)灭活的病毒
获得杂种植株 主要用于制备
单克隆抗体
二、单克隆抗体
? 1.抗体是由何种细胞产生的? 2.2.抗体是如何产生的?
(一)获得抗体的传统方法
1、方法: 向动物体内反复注射某种抗原,使动
承__双__亲__细__胞___的遗传特性,既能 _分__泌__抗__体___,又能__无__限__增__殖___。
体外培养
注射到
5、C过程指细胞培养,该过程包括
小鼠腹腔
_原__代__培养和_传__代__培养两个阶段,其
中__5_0__代以内的的细胞属于细胞株。
• 世界上第一只克隆羊 a “多莉”的培育过程如 图所示,请据图回答:
不能,只能得到杂交细胞 2、动植物细胞在结构上有何区别?这与它们
杂交或融合过程有什么影响? 动物细胞无细胞壁,动物细胞融合过程中 不须去除细胞壁和再生出细胞壁。
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的 方法有哪些?
离心、振动、电激等物理方法;PEG等化学方法
问题讨论
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还 有其他方法吗? 能,还可以利用灭活的病毒(生 物方法)进行诱导
筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选
一、动物细胞融合
3、结果:形成杂交细胞。 杂交细胞:融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传信息的
单核 细胞。
4、诱导方法: 聚乙二醇(PEG)、 灭活的病毒、电激等。
5、过程:
3、过程: 病毒表面含有的糖蛋白和一些
酶能够与细胞膜的糖蛋白发生 作用,使细胞相互凝集。
细胞相互凝集 细胞膜打开
———————
不遵循,多莉羊的多数性状象c羊,个别性 状象d羊,发育也会受到f羊影响。
dc
f 乙
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细胞融合技术、细胞培养技术
3、单克隆抗体的概念: 化学性质单一,特异性强的抗体
4、单克隆抗体的优点: 特异性强,灵敏度高,并可大量制备。
(三)单克隆抗体的应用
①诊断疾病(识别作用,如 同位素标记单克隆抗体, 可诊断肿瘤、心血管畸形
优等点):准确、高效、简易、快速
②用于治疗疾病和运载药物(主要用于癌症 治疗,也可运载药物,如 “生物导弹”)
B淋巴细胞
诱导其融合的 方法有哪些?
骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选
(选择性培养基)
杂交瘤细胞
细胞培养
筛选,继续培养
足够数量的、能产生 特定抗体的细胞群
体外培养 注射到小鼠腹腔
单克隆抗体
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
思考:
1、细胞融合后培养液中有几种细胞?
B BB
B瘤 瘤瘤 瘤 筛选杂种细胞
杂交瘤细胞 2、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段?
b
(3)在形成乙是的过程中,
需要将d的细胞核取出,将c
细胞核移入d细胞内,此技术 叫—核—移—植。所需的受体细胞
e
大多采用动物卵细胞的原因 是———卵胞——细具——胞有——大继——,续——易分——于化——操的——作潜——;能——卵。细 甲
—(4)绵羊的白色对黑色为
显色。若甲是白色绵羊,要
判断它是否纯合体,选用与 它交配的绵羊最好是—黑—毛—
提示: 1 .什么样的细胞可以产生抗体?
有何区别? 共同点:两者都有无限增殖的能力 不同点:瘤细胞不能转移
(二)单克隆抗体的制备
1、设计方案:
一个B淋巴细胞--只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞--能无限增殖
杂种细胞
2、单克隆抗体制备过程
注射抗原
(导向作用,作为载体,生物导弹 =单克隆抗体+药物,用于治疗肿瘤 )
(位置准确、疗效高、副作用小)
单克隆抗体
小结
两个过程
动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法 ——灭活病毒
三个“一” 一个新细胞——杂交瘤细胞
一个优势——单克隆抗体特异 性强、灵敏度高的优势
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌的抗 体实验方案
dc
f 乙
(5)在产生多莉羊时,需将e
细胞形成的早期胚胎移入另一
头在母细羊胞(工f程)中子叫宫—里胚—,胎—这—移种—技植—术 a
b
(6)继植物组织培养后,克隆
绵羊的培育成功,证明动物细
e
胞也有———全能性
(7)在繁殖多莉羊的过程中,
是否遵循孟德尔遗传规律?多
甲
莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的
关系是什么?———————
A
1、该实验方案的目的是_制__备__单__克__隆_ 抗体 2、该方案能达到预期效果吗?为什么?
骨髓瘤细胞 B
杂交瘤细胞
3、A是从小鼠的脾脏中取得
C
__B_细__胞__,该细胞能够产生_抗__体___
4、图中B为_细__胞__融__合_过程,常用 足够数量的细胞群 _灭__活__病__毒__作为诱导剂,该细胞继
5、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本 原理是否相同?
相同,都是细胞膜的流动性
问题讨论
6、为什么要用灭活的病毒? 病毒一般对生物体是有伤害的。 物理或 丧失感染活性 仙台病毒 化学方法 保留融合活性
8、植物、动物细胞融合的比较
比较项目 融合的原理
步骤 诱导方法
用途
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞膜的流动性 细胞膜的流动性