三七总皂苷工艺方法

三七总皂昔工艺方法

【摘要】目的研究氧化铝柱层析精制三七总皂昔工艺。方法采用HPLCfe测定三七总皂昔的含量，考察洗脱剂的浓度、洗脱剂的用量和吸附剂用量对工艺的影响。结果确

定最佳精制工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂昔的用量。结论通过氧化铝柱层析精制后，三七总皂昔的收率大于70%含量大于80%说明此精制工艺是可行的。

【关键词】三七总皂昔氧化铝高效液相法

三七为五加科植物三七的干燥根及根茎[1],三七总皂昔是中药三七的有效部位，主要含有三七皂昔R1,人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1等达玛烷型三站皂昔类化合物[2] c 现代药理研究证明：三七总皂昔具有多方面的生物活性，主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、

抗凝、钙拮抗等方面［3］。

目前三七总皂昔的富集与纯化一般采 用大孔吸附树脂来完成［4］,纯化后二七总 皂昔的含量达到60%U 上。为了提高药物的 安全性和有效性，提高其成药原料药的纯度 本实验拟米用氧化铝柱层析对三七总皂昔 的纯化物进行精制［5］,并对工艺进行了考 察，为进一步的制剂学研究打下基础。

1仪器与试药

仪器与设备

RE52-99旋转蒸器；DK-S22型电热恒温 水浴锅；JA-1003型电子分析天平；电热鼓 风干燥箱；美国Tsp 高效液相色谱仪； TspP-2000 泵、

TspUV-1000UV-VIS 检测 TspPC100咱谱工作站； 材料与试剂 三七总皂昔提取物； 三七皂昔R1、人参皂昔 对照品；乙月青为色谱纯，水

为二次蒸偕水。

2方法与结果 色谱条件

色谱柱：ODSC1魁；流动相：A 为乙月青， 犯・ 希; 色谱柱：ODSC1三七总皂昔对照品： Rg1、人参皂昔Rb1

B为水；流速：• min -1 ;采用梯度洗脱法，

0〜8分钟，8:10〜40:40分钟；检测波长

203ng 柱温：30C;进样量20 L。

线性范围关系的考察

分别精密称取三七总皂昔对照品三七

皂昔R1、人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1各约、和置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取此溶液3、4、5、6、7mL 置

50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液各注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，三七皂昔R1、人参皂昔Rg1、人参皂昔Rb1回归方程分别为：A= 一;A=+; A=一,三七皂昔R1、人参皂昔Rg1、人参皂Rb1分别在进样量〜fl g、〜fl g和〜

g范围内时，峰面积与进样量具有良好的线性关系。

精密度试验

取含量测定项下对照品溶液，连续进样

六次，记录色谱图，量取峰面积，计算平均值及相对标准偏差，三七皂昔R1、人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1的峰面积平均值分别为

151792、和，RS盼另U为％嘛］%结果表明，本方法精密度良好。

供试品溶液的制备

取上柱流出液浓缩至干，精密称定干粉一定量，用甲醇溶解并转溶至10mL量瓶，滤过。精密量取续滤液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

工艺参数的考察

洗脱剂浓度的考察

取三七总皂昔原料3份，每份10g。分别用500醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，然后分别用35% 55嘛口75%Z＞醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLCS测定总皂昔含量和收率。

从以上结果可知，当用75%^醇洗脱时，总皂昔含量最高，但收率太低，而用55/ 醇洗脱时虽然收率比用35%＞醇洗脱时略低, 但总皂昔含量高6港右，因此，洗脱剂确定为55%L醇。

洗脱剂用量考察

取三七总皂昔原料3份，每份10g。分别用50%!醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，然后用55冗醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，

真空干燥，按HPLCS测定总昔含量和收率。从以上结果可知，随着洗脱剂用量的增加，得到总皂昔的含量逐渐下降，考虑收率，以10倍量55%勺乙醇洗脱比较合适。

吸附剂用量考察

取三七总皂昔原料3份，每份10g。分别用500醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，然后用10倍量55吃醇洗脱，分别收集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC 法测定总昔含量和收率。

从以上结果可知，随着吸附剂氧化铝用量的增加，收率逐渐降低，而含量呈上升趋势，氧化铝用量为5倍与10倍相比较，前者虽然总皂昔含量略低，但已经大于80%

而且收率较高，因此吸附剂氧化铝的用量确定为5倍。

中试验证结果

取三七总皂昔原料3份，精密称取质量分别为，和，分别用50%(Z1醇适量溶解，分

别转移至氧化铝柱，中性氧化铝用量为三七总皂昔的5倍，然后用10倍量55%^醇洗脱，分别收集洗脱液，在60 C以下减压回收乙醇，真空干燥，按HPLCS定方法，分别测定三七皂昔R1、人参皂昔Rg1和人参皂昔Rb1的含量。

从以上三批中试结果可知，按选定的精制工艺可以制备总皂昔含量大于80%勺三七总皂昔原料，且收率大于70%说明此精制工艺是可行的。

3结论

氧化铝柱层析精制三七总皂昔的最佳

工艺为：洗脱剂的浓度为55%Z＞醇，洗脱剂的用量为10倍量吸附剂的用量，吸附剂用量为5

倍三七总皂昔的用量。

本实验提出了一种新的三七总皂昔的

精制方法一氧化铝柱层析，具有分离效果好、工艺简单、投资少、处理量较大等优点。有文献报道[6],大孔吸附树脂法具有选择性好、吸附容量大、安全无毒、再生容易等优点，但由于应用时间相对较短，还存在着一些问题，因此，在纯化中药有效成分的工艺过程中，两种纯化方法可以互相结合，取长补短，共同促进中药制剂的不断发展。

参考文献

[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005:9.

[2] 甘烦远.三七的化学成分研究概况

[J].中国药学杂志，1992, 27:128.