出现血清胆汁酸增高

酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
由于血清中TBA含量低，样品中存在干扰物质的 影响相对就大，乳酸脱氢酶(LD)是主要的干扰物质， 由LD反应中生成的NADH往往比TBA反应中生成的量 要大得多，因此测定前去除血清中LD的影响至关重 要，方法有：血清67℃加温30min；加草氨酸作为 LD的封闭剂；碱或酸处理；用丙酮酸钠抑制LD活性。 上述5种方法中丙酮酸钠法最好，可免去前处理步 骤，直接加入反应体系，不影响体系的pH，且对反 应无干扰。 血清中还存在其它脱氢酶(有相应底物存在时)和 还原性物质，如不除去，测定结果会偏高。据无选 择的40例肝功能标本的测定结果来看，平均干扰相 当于TBA 18μmol/L，范围在5.5～45μmol/L之间。 因此自动分析设计成双试剂二步法，样品先和不加 3α-HSD的体系孵育，使样品中的干扰物质先反应， 然后再加入3α-HSD，启动TBA反应。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
3．肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力 减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高 幅度一般高于慢性活动性肝炎。即使在肝硬化晚期 亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶 及碱性磷酸酶等指标转为正常，血清TBA仍维持在 较高水平。 4．乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高，当乙 醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血清 TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。有报 道认为，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊 断的可信度和灵敏度远优于各种酶学检查和半乳糖 耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β-氨 基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。有人认为， 餐后60min-TBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。
酶比色法测定总胆汁酸
【操作步骤】 1．手工法按表
加入物(ml) 测定 血清 0.1 标准液 试剂Ⅰ 0.3 试剂Ⅱ 0.1 去离子水 测定对照 0.1 0.3 0.1 标准 0.1 0.3 0.1 标准对照 0.1 0.3 0.1
a b c d e
混匀，37℃水浴10min，加终止液0.1ml，摇匀， 500nm波长，以水校零，读取各管A值。 2．自动分析法 一般无法做对照管，而是设置两 点终点法，读取前后两个吸光度A1和A2。具体按说 明书要求。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
5．中毒性肝病：在中毒性肝病时血清TBA 也将异常。 6．胆汁淤积：血清TBA测定对胆汁淤积的 诊断有较高灵敏度和特异性。肝外胆管阻 塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆 管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆 汁淤积等均可引起TBA增高。在胆管阻塞的 初期，胆汁分泌减少，使血清中的TBA显著 增高，且在阻塞的不同阶段几乎保持不变； 而血清胆红素水平则随不同阶段而变化。 胆汁淤积患者肝组织中的胆汁酸含量明显 高于正常人。肝外阻塞经引流缓解后，血 清TBA水平迅速下降，而其它指标则缓慢恢 复。
3α-羟基胆酸 + NAD+ 3-氧代胆酸 + NADH + H+
NADH + H+ + INT
NAD+ + 甲臢
(红色)
酶比色法测定总胆汁酸
【试剂】 1．试剂Ⅰ 黄递酶 1 000U，NAD+ 1 mmol， 碘化硝基四氮唑(INT)0.5 mmol, 丙酮酸50 mmol溶于0.1mol pH 7.5 的磷酸缓冲液1 L 中，加表面活性剂适量。 2．试剂Ⅱ 3α- 羟类固醇脱氢酶(3αHSD) 2 000U溶于0.1mol pH 7.5的磷酸缓 冲液中1 L中。 3．终止液 1 mol/L HCl。 4．标准液(50μmol/L) 24.38 mg甘氨胆 酸溶于1 L经透析的混合血清中。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
胆汁酸的生成和代谢与肝脏生理关系 密切，血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤 的一个重要指标。血清总胆汁酸(TBA)测定 对肝病的诊断有十分重要的价值。 1．急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增 高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更 高，急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高 值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若 持续不降或反而上升者则有发展为慢性的 可能。 2．慢性肝炎：慢性肝炎分为轻度、中度和 重度三个类型，空腹总胆汁酸(F-TBA)和餐 后2h总胆汁酸(P-TBA)测定对慢性肝炎的分 型、监测、预后及疗效有着重要意义。
酶比色法测定总胆汁酸
-----注意事项
脂肪酶、胆固醇(包括HDL-C、LDL-C) 和甘油三酯测定试剂中均加有胆酸盐， 自动分析时会引起携带污染，必须引 起注意。某些先进的仪器可以设定试 剂针、样品针和反应杯的补充清洗程 序，亦可将TBA编排在上述有污染的项 目前测定。对某些不具备上述功能的 仪器，最好将TBA单批测定。 试剂中加适量表面活性剂可防止甲 臢 沉淀。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
所有肝病中，餐后血清TBA水平及异常率 均比空腹时测定更灵敏，有人甚至认为餐 后测定TBA对各种肝病的诊断灵敏度和特异 性高达100%，而同时测定空腹血清胆汁酸 有40%的患者在正常范围。急性肝炎是否转 为慢性，连续监测餐后血清TBA可以观察慢 性过程，慢性活动性肝炎是否发生纤维化 改变，连续监测餐后血清TBA可以了解纤维 化过程，不做肝活检即可获得肝损伤的程 度。
酶比色法测定总胆汁酸
【计算】 手工法：
TBA(μmol/L) =A测定-A测定对照/A标准-A标准对照×C标准
自动分析法：
TBA(μmol/L) =A测定2-A测定1/A标准2-A标准1×C标准
Hale Waihona Puke Baidu
【参考范围】 60名健康成人的空腹TBA为 4.9±2.38μmol/L, 中餐后2h TBA为 8.22±2.91μmol/L。
血清总胆汁酸的检测
酶比色法测定总胆汁酸
循环法测定胆汁酸
酶比色法测定总胆汁酸
【原理】 在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)作用下，各 种胆汁酸C3上α位的烃基(3α-OH)脱氢形成碳 基(3α=O)。同时NAD还原成NADH。随后，NADH 上的氢由黄递酶催化转移给碘化硝基四氮唑 (INT)，产生红色的甲臢。甲臢的产量与总胆 汁酸(TBA)成正比，在500nm波长比色。反应式 如下：