实验六 血凝和血凝抑制试验

50
结果判定
A B C D
血凝价 A:26
B:25
C:22 D:27
血凝价: 1:256
以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作 为该病毒液的红细胞凝聚效价，即一个血凝单位。
三、血凝抑制试验 （HemagglutinationInhibi百度文库ion, HI）
➢ 原理：抗体与血凝素结合，封闭血凝素， 使之不能与红细胞结合
血凝和血凝抑制试验
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原 理和操作方法，能够正确判定试验 结果并对结果进行分析。
二、血凝试验
（ HEMAGGLUTINATION, HA）
➢ 血凝现象：有些病毒可凝集某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和 人的红细胞(RBC)
➢ 原理：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集，用以测定病 毒的含量
HI试验的原理图
➢ 用途: ①用于检测血清中抗体含量； ②鉴定病毒的型、亚型；
➢ 血凝抑制价：能完全抑制血球凝集的最高血 清稀释度即为该血清的血凝抑制价
试验材料
• 4个血凝单位鸡新城疫病毒 • 鸡红细胞：同上 • 被检血清(采自被检鸡的血清) • 灭菌0.85%生理盐水 • 96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头
操作步骤
1. 在血凝板的1-12孔加入25UL生理盐水，最后2孔加50UL。 2. 第1孔加入待检血清25UL，混匀后吸25UL至第2孔，倍比
稀释直至第10孔，混匀后弃25UL。 3. 在1-10孔，每孔加稀释好的25UL 4个血凝单位的病毒
悬液，室温静置30分钟 4. 将红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入50ΜL 5. 手工震荡1MIN，在37℃静置30MIN(室温40分钟)后观察
结果
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
判定结果：能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清 的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价，以2 的指数表示。（上图抗体结果从上至下依次为： 8/7/8/9/8/7/7/6 ）
HA试验 HI试验
操作步骤
1. 在血凝板第一排的1-12孔加入50UL生理盐水。 2. 在第1孔中加入50UL病毒，混匀后吸50UL到第2孔，
如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50UL；最后 两孔（11、12）为红细胞对照。 3. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加 入50UL。 4. 手工震荡，37℃静置30MIN (室温40分钟 )后观 察结果
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（C） 12（C）
生理盐水（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
50
病毒悬液（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃/ 50μl /
1%红细胞（μl） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
HA试验的原理示意图
➢用途：①确定病毒的含量； ②计算病毒的血凝价，为血凝抑制
试验做准备 ➢血凝价：能使血球产生50%凝集的病毒最
高稀释度 ➢血凝单位
试验材料
• 鸡新城疫病毒 • 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，用生理盐水洗涤3-5
次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配成1%红细胞悬液 备用 • 灭菌0.85%生理盐水 • 96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头