免疫组化与细胞形态学研究

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免疫组化组织细胞的取材、固定、切片操作方法及要点

免疫组化组织细胞的取材、固定、切片操作方法及要点

免疫组化组织细胞的取材、固定、切⽚操作⽅法及要点从⼤体标本上切除适量的组织材料进⾏研究就是取材。

取材不仅在免疫组化⽽且在常规病理检查中也⼗分重要。

⽤于免疫组化的组织⼀般取材⼤⼩为1.OcmXl.OcmX0.2cra。

取材时应剔除脂肪和钙化,否则会影响切⽚,出现假阳性或假阴性结果。

组织标本包括动物标本、⼿术活检标本、⼫体解剖标本及细胞标本等,有关各种标本的取材⽅法分述如下。

⼀、动物的致死法及取材(⼀)致死法(1)空⽓栓塞法向动物静脉内注⼊⼀定量的空⽓,使动物很快死亡。

⼀般适⽤⼤动物,例如兔、⽝、猫等动物。

(2)⿇醉法可将浸有⼄醚或氯仿(三氯甲烷)的棉球连同动物⼀起放⼈密闭容器内进⾏⿇醉,也可⽤4%戊巴⽐妥作静脉注射,或⽤20%氨基甲酸⼄酯做腹腔注射。

适⽤于⿏等⼩动物。

(3)断头法⽤剪⼑剪去动物的头部,待⾎液流出后⽴即取材。

适⽤于⼩动物。

(4)去头法⽤重物猛击头后部或将动物头后部猛撞桌沿。

(5)股动脉放⾎法动物⿇醉后,切开股动脉放⾎致死。

(⼆)取材注意事项(1)最好在动物⼼脏还在跳动时⽴即取材,并迅速投⼊环保组织固定液内。

脏器的上⽪组织易变质,争取在死后半⼩时内取材完毕,否则免疫组化染⾊时会产⽣背景染⾊。

(2)切取组织使⽤的⼑、剪要求锋利,避免来回挫动组织。

因动物组织质脆,因此夹取组织时切勿⽤⼒过重,以免挤压损伤组织。

⼆、⼫体解剖的取材⼫体解剖的取材应根据实际需要进⾏,⼀般取材部位和数量如下。

(1)⼼和⼤⾎管右⼼室⼀块,左⼼室⼀块,主动脉⼀块,取材部位可在距主动脉瓣5cm处。

(2)肺右下叶⼀块,切成正⽅形;左下叶⼀块,可切成长⽅形。

(3)肝右叶⼀块,切成正⽅形;左叶⼀块,切成长⽅形。

(3)脾⼀块。

(4)胰⼀块。

(6)肾两肾各⼀块,包括⽪质、髓质和肾盂。

右肾⼀块切成正⽅形,左肾⼀块切成长(7)膀胱⼀块。

(8)肾上腺左、右各取⼀块。

(9)消化道⾷管⼀块,胃窦部⼀块,⼩肠⼀块,淋巴结⼀块,直肠⼀块。

(10)⾻脊椎⾻⼀块。

免疫组化

免疫组化

什么是免疫组化免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。

(一)免疫组织化学技术的基本原理免疫组织化学技术是用显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。

即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,将抗原放大,由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。

通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。

组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

免疫学的基本原理决定了免疫组织化学技术具有高度特异性,因此,免疫组织化学技术从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。

只有当组织细胞中存在交叉抗原时才会出现交叉反应。

ABC法或SP法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,所以免疫组织化学技术又具有敏感性高的特点。

免疫组化基础知识

免疫组化基础知识

免疫组化基础知识免疫组化是指利用特异性抗体与被检测物相互作用,通过染色或荧光等方法对细胞或组织中的分子结构、分布、表达水平等进行检测的一种技术手段。

免疫组化技术广泛应用于生命科学领域,可用于研究细胞和组织的形态学、生理学、病理学等方面,是现代分子生物学和医学研究的重要工具之一。

免疫组化技术的基本原理是利用抗体与被检测物之间的特异性结合来检测目标分子。

抗体是由机体免疫系统产生的一种特异性蛋白质,可以识别并结合到其特异性抗原上,从而发挥免疫防御作用。

在免疫组化中,我们利用抗体的这种特异性结合作用,来检测细胞或组织中的目标分子。

具体来说,我们将一种特异性抗体标记上染色剂或荧光素等物质,然后将其加入到待检测的细胞或组织中,让其与目标分子发生结合反应,最后通过染色或荧光等方法来检测抗体-抗原复合物的存在情况。

免疫组化技术的优点主要有以下几个方面:1. 特异性强:由于抗体对其特异性抗原具有高度的特异性结合能力,因此免疫组化技术具有非常高的特异性。

2. 灵敏度高:免疫组化技术可以检测非常微小的分子结构或表达水平,因此具有非常高的灵敏度。

3. 定量性好:通过对染色或荧光信号的定量分析,可以对目标分子的表达水平进行定量化分析。

4. 可视化:通过染色或荧光等方法,可以将目标分子在细胞或组织中的分布情况可视化出来。

免疫组化技术在生命科学领域中有着广泛的应用。

在细胞和分子生物学研究中,免疫组化技术可以用来检测蛋白质、核酸、多肽等生物分子的表达和定位情况;在病理学研究中,免疫组化技术可以用来检测肿瘤标志物、免疫球蛋白等分子的表达情况,从而辅助临床诊断;在药物研发领域中,免疫组化技术可以用来筛选药物靶点和评估药效等。

总之,免疫组化技术是一种非常重要的生命科学技术手段,在现代分子生物学和医学研究中具有广泛的应用前景。

细胞学免疫组化

细胞学免疫组化

细胞学免疫组化细胞学免疫组化是一种通过观察细胞内特定分子的存在与分布情况来研究免疫反应和疾病发生机制的方法。

它广泛应用于病理学、免疫学、癌症研究等领域。

细胞学免疫组化技术的主要原理是利用特异性抗体与细胞内的特定抗原结合,形成免疫复合物,然后通过染色方法将该复合物标记出来,以便在光学显微镜下观察和分析。

通过这种方法,可以研究免疫细胞的分布、数量、功能以及相关疾病的发生和发展过程。

在细胞学免疫组化中,常用的抗原检测方法是免疫组化染色法( Immunohistochemistry,(IHC)。

这种方法通过利用特异性抗体与抗原结合,然后使用染色剂使该复合物显色,以便在组织或细胞级别观察和分析特定抗原的存在与分布情况。

免疫组化染色法可以帮助我们了解免疫细胞在不同组织中的定位和功能。

细胞学免疫组化在研究免疫细胞的分布和数量方面非常重要。

通过使用特定抗体标记免疫细胞,可以观察它们在组织中的定位和分布情况。

例如,在免疫组织化学中,可以利用CD3抗体标记T淋巴细胞并观察它们在淋巴结或其他组织中的分布情况。

这种方法有助于我们了解免疫细胞的定位和不同组织中免疫反应的差异。

此外,细胞学免疫组化还可用于研究相关疾病的发生和发展机制。

通过检测病理标志物,例如肿瘤相关抗原,可以了解肿瘤细胞的特异性标记和分布情况。

这种方法可用于肿瘤诊断、分期和预后评估。

例如,在乳腺癌中,可以使用ER(雌激素受体)和PR(孕激素受体)标记细胞,用于评估乳腺癌患者是否对激素治疗敏感。

细胞学免疫组化的分子标记方法也得到了广泛应用。

通过使用特定抗体与荧光染料结合,可以在光学显微镜下直接观察和分析特定抗原的存在与分布。

这种方法称为免疫荧光染色法 Immunofluorescence,(IF)。

免疫荧光染色法在免疫细胞分型、蛋白质相互作用研究以及细胞信号转导等方面具有重要作用。

总之,细胞学免疫组化是一种重要的研究手段,它通过观察细胞内特定分子的存在与分布情况,帮助我们了解免疫细胞的分布、数量、功能以及相关疾病的发生与发展机制。

病理学研究中免疫组化方法优化策略

病理学研究中免疫组化方法优化策略

病理学研究中免疫组化方法优化策略在病理学研究中,免疫组化方法是一种常用的实验技术,用于检测生物组织和细胞中特定蛋白质的表达情况。

本文将介绍病理学研究中免疫组化方法的优化策略,以提高实验的准确性和可重复性。

免疫组化方法的优化从以下几个方面入手。

首先是抗体的选择。

抗体的选择应根据实验目的和所需检测的靶蛋白质来确定。

在选择抗体时,要注意其抗原特异性、亲和力和稳定性。

现今市场上有许多供应商提供各种抗体,研究人员可以通过文献调研和试验验证选择合适的抗体。

其次是适当的样本处理。

样本处理是提高免疫组化实验可靠性的关键环节。

细胞或组织样本采集后需立即进行固定,通常使用4%的甲醛固定样本。

固定时间和温度的选择也是影响结果的重要因素。

固定时间过短或过长,都会影响抗原特异性和形态学结构的保留。

后续处理涉及到脱水、清洁、渗透和包埋等步骤。

脱水是将固定的样本逐渐浸泡于浓度逐渐升高的乙醇中,以去除水分。

清洁步骤是移除固定样本表面的蜡块、油脂等污染物,以保证免疫反应的发生。

渗透使用的溶剂需要与制备蜡块相同,以免在包埋过程中出现蜡破裂现象。

包埋是将样本浸入熔蜡中,在蜡中形成固态块,以方便组织切片。

接下来是抗原的修复处理。

一些蛋白质在固定和包埋过程中会发生降解和破坏,从而影响其免疫反应性。

因此,需要进行抗原的修复处理。

常用的修复方法包括热水浴法、微波炉法和酶解法等。

这些方法能够恢复抗原的免疫活性,提高抗体的结合效果。

免疫反应是免疫组化实验的核心步骤。

在进行免疫反应时,必须控制好反应温度、时间和抗体浓度等因素。

温度过高或时间过长可能导致非特异性结合增加,产生错误的结果。

抗体浓度的选择要通过实验验证确定,过高的抗体浓度可能会造成非特异性背景。

免疫反应后,需要进行信号检测。

常用的信号检测方法包括酶标法、荧光标记和放射免疫测定法等。

不同的检测方法有其各自的优缺点,研究人员可以根据实验需要和设备条件选择合适的检测方法。

最后是结果的分析和解释。

免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用

免疫组化技术在病理诊断和研究中的应用
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在诊断性免疫组化中的质量控制是个重要问题。 美国生物染色委员会附属商品以及商品试剂信息标准化,美国食品及药品 管理局(FDA)通过美国病理学会批准出台一项政策, 列出了61种在一些严重疾病的诊断和/ 或监测中充分标 准的单克隆抗体,并要求制造商自政策发表之日起的 30个月内向FDA提交合适的产品使用申请,在此期间产 品虽被允许用于医学目的在市场销售,但制造商们必 须在产品上标明“未经法律批准,暂时供应以满足重 要的医学目的”。
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免疫酶学技术还包括碱性磷酸酶-抗碱性磷酸 酶(APA-AP)系统[2] 及葡萄糖氧化酶─抗葡萄糖氧化 酶(GAG)系统等,这些技术与PAP技术相似,只 不过是将碱性磷酸酶或葡萄糖氧化酶代替辣根过 氧化物酶而已,据称这两种技术可以减少背景染 色的干扰,因为相应的内源性酶在组织中分布有 限,尤其是APA -AP技术更适用于血液标本染色。
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抗体保存在不吸附蛋白质的材料中,如储存抗体中蛋白 浓度很低时(10-100mg/l),应另加隔离蛋白,以减少容器 对抗体蛋白的吸附,隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋 白。绝大多数已稀释的抗体应保存在4℃-8℃的条件下,以 免冻融对抗体蛋白产生有害的效应。抗体原液和已分离的 免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件,避免反复冻融。冷冻 的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻,应绝对避免用高温 快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果,为了 防止细菌污染,可在抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经 真空冷冻干燥后置-20℃以下可以保存2-3年,保存稀释后的 单抗应加入0.1%叠氮钠。大多数稀释抗体不可进行冷冻保 存,多数抗体可能会丢失抗原活性,多数抗体只要蛋白浓 度适当,可在4℃下保存数月。
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PAP法是过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)复合物, 包括辣根过氧化物酶抗体,及辣根过氧化物酶抗原 组成的可溶性复合物为五环状结构,3个分子辣根过 氧化物酶和二个抗体分子组成,极为稳定,比免疫 荧光法敏感100-1000倍,比酶桥法敏感20倍,其原理 是特异性初级抗体(一抗)的Fab段与组织抗原结合, 二抗(桥抗)在一抗与PAP复合物之间形成分子桥联, 此时一抗与PAP中的免疫球蛋必须是同一种属,以使 得衍生自其它种属的二抗,对一抗分子PAP中的FC段 及稳定成份都具有特异性。

细胞形态学研究方法及应用

细胞形态学研究方法及应用

细胞形态学研究方法及应用细胞形态学是研究细胞形态、结构和功能的学科,是现代生物学领域中至关重要的一部分。

随着科学技术的不断进步,研究人员不断开发出各种先进的方法来更深入地了解细胞的结构和功能,并将这些方法应用于医学、生物学和生物工程等领域。

一、光学显微镜光学显微镜是最基本的细胞形态学研究工具之一。

通过透射或反射光学系统观察标本,可以清晰地观察到细胞的形态和结构。

近年来,随着荧光显微镜技术的发展,研究人员可以利用荧光标记技术观察细胞内特定分子的位置和运动,从而更深入地研究细胞功能。

二、电子显微镜电子显微镜是一种分辨率更高的显微镜,能够观察到细胞内部的超微结构,如细胞器、细胞核和细胞膜等。

透过电子束照射样品,利用电子透镜和电子探测器来获取高分辨率的图像。

电子显微镜为研究细胞的亚细胞结构提供了强大的工具,对于研究细胞器的功能和相互关系具有重要意义。

三、原位杂交技术原位杂交技术是一种用来检测细胞中特定DNA或RNA序列的方法。

通过将标记有荧光或放射性同位素的探针与待检测的细胞样品杂交,可以在细胞内直接观察到目标序列的位置和数量,从而研究基因表达和基因组结构的变化。

四、免疫组化技术免疫组化技术是利用抗体与特定蛋白质结合的原理,通过染色或荧光标记来检测细胞内特定蛋白质的存在和分布。

这种技术可以用来研究细胞的功能、细胞周期和细胞信号传导等重要生物学过程,也常用于临床诊断和治疗。

五、细胞流式仪细胞流式仪是一种高通量的细胞分析技术,可以快速准确地分析大量细胞的形态、大小、表面标记和内部结构等特征。

通过流式细胞仪,研究人员可以对细胞群体进行精细的表征和分选,从而深入研究细胞的功能和代谢状态。

细胞形态学研究方法的不断进步和应用拓展,为人类对细胞生物学的理解提供了强有力的支持。

这些方法的发展不仅推动了基础科学的进步,也为生物医学领域的诊断和治疗提供了新的思路和手段。

随着科学技术的不断发展,相信细胞形态学研究将在更广泛的领域发挥出更多的作用,为人类健康和生命科学的发展作出更大的贡献。

常用的经典组织学技术

常用的经典组织学技术

常用的经典组织学技术经典组织学技术是研究细胞和组织学形态结构的重要手段,是现代生命科学中不可或缺的一部分。

随着科技的发展和进步,组织学技术不断创新和完善,但是一些经典的组织学技术仍然广泛应用于生命科学的研究领域。

下面将对常用的经典组织学技术进行介绍。

一、石蜡切片技术石蜡切片技术是组织学研究中最常用的技术之一。

它可以将组织切成非常薄的切片,使得组织的形态结构可以在显微镜下观察和研究。

石蜡切片技术的步骤大致如下:首先将组织固定、脱水处理,然后将组织浸入蜡中进行渗透处理,最后将渗透好的组织切出薄片。

石蜡切片技术具有较高的分辨率和生物安全性,因此广泛应用于组织形态学研究、诊断和治疗。

二、冰冻切片技术冰冻切片技术是一种较新的组织学技术,其基本原理是将组织迅速冷冻,然后切成薄片。

与石蜡切片技术相比,冰冻切片技术可以得到更好的组织微观结构和细胞内的亚细胞结构信息,尤其适合于一些对生物体很敏感的组织,如神经组织。

冰冻切片技术可以直接应用于某些特殊的生命科学领域,如蛋白质晶体学和冷冻电镜技术等。

三、光学显微镜技术光学显微镜技术是组织学研究中应用最广泛的技术之一,也是组织学技术学习中最基础的技术之一。

这种技术可以通过灯光和透镜将显微镜下的物体放大,并且在不破坏样品的情况下识别和分析不同的细胞和组织结构。

光学显微镜技术在诊断学、细胞学、解剖学、生物学和化学等领域均有广泛应用。

四、免疫组化技术免疫组化技术是一种基于抗体-抗原相互作用原理的组织学技术,将特定抗原标记着色分析。

通过在组织或细胞上添加合适的抗体,对该抗原特定位置进行标记,从而在显微镜下较为清晰地观察到抗原的位置、形态和分布情况,是现代生命科学中极为重要的分析方法之一,特别适用于组织病理学、免疫学和肿瘤学等领域。

五、原位杂交技术原位杂交技术是一种能够检测基因或RNA等核酸分子的组织学技术。

利用标记着色质和探针的互动,把探针寡核苷酸序列与样品中的核酸混合,然后目视观察其在细胞或组织中的位置、分布和数量来检测其在样品中的表达情况和作用机制的过程。

卵巢透明细胞癌形态学及免疫组织化学表达与预后关系的研究

卵巢透明细胞癌形态学及免疫组织化学表达与预后关系的研究

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【关键词】 卵巢透明 细胞癌;病理学; 免疫组织化学;预 后随访 【中 国图 书分 类号 】R737. 31
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免疫组化染色在细胞学标本石蜡切片中的应用

免疫组化染色在细胞学标本石蜡切片中的应用

免疫组化染色在细胞学标本石蜡切片中的应用在临床各种诊断方法中,细胞学检查具有简便、安全、准确、经济等特点,已在病理学检查中广泛应用。

除了抽取浆膜腔积液进行细胞学检查之外,随着细针穿刺吸取标本采集技术的发展,如何提高肿瘤细胞的检出率是一个值得探讨的问题,我们尝试将细胞学标本制成细胞块,用于进一步观察分析其组织结构,并进行免疫组化标记,旨在更客观地鉴别细胞的良恶性,判析瘤细胞的组织来源!1、材料和方法1.1标本的采取,送检的标本要求新鲜,临床上采取后应立即送检。

1.2方法1.2.1送检的浆膜腔积液如肉眼可见较多纤维蛋白凝集物,按规范[1]离心涂片2张并取适量凝集物常规石蜡包理切片。

1.2.2送检的浆膜腔积液如肉眼未见凝集物,先静置30分钟,让瘤细胞自然沉淀弃去上清液,余50ml左右以每分钟2500转离心5-10分钟,取沉渣用滤纸包裹,10%福尔马林固定后常规石蜡切片。

1.2.3痰液用N-乙酰半胱氨酸液化后沉淀30分钟,2500rmp离心5-10分钟,取沉渣用滤纸包裹,10%福尔马林固定后常规石蜡切片。

1.2.4细针穿刺吸取的标本,先借助空气压力将针管内的穿刺标本喷至载玻片上,用穿刺针将标本聚成一小团,吸除多余的血液,将标本放置2-5分钟后,连同载玻片浸入95%乙醇中2-3分钟,使其表面凝固,然后立即浸入中性福尔马林中固定2小时,再用手术刀水平从载玻片上切取细胞块进行脱水,常规石蜡包理切片。

1.2.5细胞块切片行HE和免疫组化染色(依临床情况选用不同的抗体),镜下观察,结合临床,做出综合分析。

2、结果2.1细胞块的常规石蜡切片,在某种程度上具有组织切片的特点,细胞集中,克服了涂片中细胞重叠堆积,厚薄不均的现象,图像背景中血细胞和炎性细胞更少,组织像清晰便于观察,较易识别具有特征性的异型细胞。

2.2综合HE染色的细胞学涂片,细胞块切片及临床资料,不同病例选用不用抗体进行免疫组化染色,染色结果定位准确,颗粒清晰,弥补了细胞学涂片不能进行多次免疫组化染色等检测的不足,为细胞学的诊断和鉴别诊断提供了丰富的信息。

免疫组化技术

免疫组化技术

免疫组化技术免疫组化技术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的重要技术手段。

它通过利用抗体与其特异性抗原相互作用的特性,实现对细胞、组织和分子的检测和定位。

本文将从免疫组化技术的原理、应用、优缺点等方面进行介绍。

首先,免疫组化技术的原理主要基于抗原与抗体的高度特异性反应。

抗原一般是指能够被免疫系统识别并引发抗体产生的物质,它可以是细胞膜上的蛋白质、细胞核中的核酸、胞浆中的酶等。

而抗体是机体免疫系统产生的一类蛋白质,具有高度特异性与抗原结合。

在免疫组化技术中,通常选择一种与目标物高度特异性结合的抗体,通过与目标物反应形成抗原-抗体复合物,再利用染色、荧光等方法对其进行检测和定位。

免疫组化技术广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

首先,在生物医学研究领域,免疫组化技术可以用于检测和定位特定蛋白质或细胞标志物。

例如,科研人员可以利用特异性抗体对肿瘤标志物进行检测,从而实现早期肿瘤的筛查和诊断。

此外,免疫组化技术还可以用于研究免疫反应、细胞分化和分子信号传递等生物学过程。

其次,在临床诊断中,免疫组化技术可用于肿瘤诊断、感染病的检测和诊断,以及免疫性疾病的诊断等。

临床医生可以利用免疫组化技术对病理切片进行染色,帮助判断疾病类型和严重程度。

免疫组化技术具有多种优点。

首先,它具有高度特异性和敏感性。

由于抗体与特定抗原的结合是高度特异性的,因此免疫组化技术可以实现对目标物的准确检测和定位。

其次,它可以同时对多个目标进行检测。

通过同时使用多个不同特异性的抗体,可以对多个目标分子进行检测,从而提高检测效率。

此外,免疫组化技术还可以实现对细胞或组织的形态学和功能的研究,有助于揭示生物学过程的机制。

然而,免疫组化技术也存在一些限制和不足之处。

首先,技术操作复杂。

免疫组化技术需要对抗体的选择、染色剂的选择和实验条件等进行严格控制,技术操作要求较高。

其次,需要合适的阳性和阴性对照。

在使用免疫组化技术时,需要合适的阳性和阴性对照样品,以确保实验结果的准确性和可靠性。

免疫组化实验的应用及

免疫组化实验的应用及

免疫组化实验的应用及免疫组化是利用免疫方法研究细胞或组织的形态学结构的一种研究方法。

它是一种真核生物细胞研究的重要技术,在分离细胞凋亡的变化,分析非编码RNA的存在,检测细胞增殖状态,检测蛋白质的局部区域,检测细胞中某一特定蛋白质是否发生变化等研究方面大有作为。

免疫组化实验可以分为免疫组化荧光显微镜实验(IF)和免疫沉淀实验(IP)。

免疫组化荧光显微镜实验(IF)是把不同类型的标记性抗体,包括抗体素,特异性抗体来检测细胞中某一种抗原物。

抗体把细胞表面的抗原物特异性结合起来,然后将有特殊的标记物与抗体连接,使抗原物特异性的结合可以在显微镜下直接观察到。

免疫沉淀实验(IP)是一种常用来检测细胞中某一蛋白质位置及结构变化的方法,一般是先用一个特异性抗体来与抗原蛋白质结合起来,接着再用特异性的抗体与另一个抗原蛋白质结合起来,最后再将它们结合起来形成抗原-抗体复合物,再用特定的抗体或其它特殊的技术来标记复合物,最后使用荧光显微镜或其它实验技术,将抗原蛋白质的变化直接观察出来。

免疫组化实验在多种生物细胞和组织分析中有所应用,比如用于诊断癌症,检测细胞凋亡,结核病,急性病毒肺炎,心血管疾病等。

免疫组化实验也可以用于检测蛋白质的结构变化,比如检测信号转导,或分析蛋白质之间的相互作用,从而对细胞功能和细胞稳态的变化有所研究。

免疫组化实验广泛应用于临床医学,可以通过检测肿瘤细胞中某一特定蛋白质的变化,根据肿瘤细胞中微量蛋白质的变化,判断肿瘤类型,进而指导治疗方案。

同时,也可以通过检测患者细胞中某一特定病原体的变化,来确定病原体的存在,用心意诊断某种疾病,并随着病人的进行治疗的效果,改变药物的剂量或方案。

免疫组化实验在诊断艾滋病,抗精神病毒药物和疫苗的有效性,以及其它传染病诊断中也有用到。

免疫组化实验不仅可以用于疾病的诊断,而且也可以用于研究新药的有效性及毒性,甚至用于研究新基因的表达以及蛋白质的结构及在细胞中的分布。

免疫组化法和免疫荧光染色法的区别

免疫组化法和免疫荧光染色法的区别

免疫组化法和免疫荧光染色法的区别免疫组化法和免疫荧光染色法是生物医学研究中常用的实验技术方法。

它们都是通过利用抗体与目标抗原的特异性结合来检测和定位特定蛋白质在细胞或组织中的表达情况。

尽管它们的目的相似,但在具体实验步骤、原理和应用方面存在一些差异。

本文将对免疫组化法和免疫荧光染色法的区别进行详细阐述,以帮助读者更好地理解这两种常见实验技术。

一、实验步骤和原理1.免疫组化法:免疫组化法是一种通过使用抗原与特异性抗体相结合的技术,将抗体标记物(一般为酶)转化为可见信号,并用于检测和分析目标分子在细胞或组织中的表达情况。

其步骤包括抗原取样、固定、脱水、透明化、抗原恢复、阻断、抗体结合、洗涤、二抗结合、再次洗涤和显色等。

2.免疫荧光染色法:免疫荧光染色法是利用荧光标记的抗体来检测和定位目标抗原的一种技术。

其步骤包括抗原取样、固定、脱水、透明化、抗原恢复、阻断、抗体结合、洗涤、二抗结合和荧光染色等。

从实验步骤和原理上看,免疫组化法和免疫荧光染色法在很多方面是相似的。

它们都需要进行对抗原的取样和固定等预处理步骤,以及对目标抗原的特异性抗体进行结合。

然而,主要的区别在于信号检测和可见性。

免疫组化法使用酶标记物并在显色反应中产生可见的染色物质,而免疫荧光染色法则通过荧光标记的抗体在荧光显微镜下进行直接可视化。

二、应用领域1.免疫组化法:免疫组化法广泛应用于细胞生物学和组织学研究中,常用的应用领域包括但不限于肿瘤标记、蛋白质表达和定位、细胞内分子信号通路等。

2.免疫荧光染色法:免疫荧光染色法在细胞和组织研究中具有重要作用。

它常用于细胞活力检测、细胞分子定位、免疫分型、细胞凋亡检测等。

免疫组化法更适合定性分析和形态学研究,而免疫荧光染色法则更适合定量分析和定位研究。

在实际应用中,研究者可以根据自己的研究目的选择合适的方法,或者根据具体需求结合两种方法进行分析。

三、我的个人观点和理解免疫组化法和免疫荧光染色法作为两种常见的免疫化学实验技术,都在生物医学研究领域发挥着重要的作用。

小胶质细胞病理学特征

小胶质细胞病理学特征

小胶质细胞病理学特征小胶质细胞病是一种常见的中枢神经系统疾病,其病理学特征主要表现为小胶质细胞的异常增生和激活。

本文将从细胞形态学、分子生物学和免疫组化等方面介绍小胶质细胞病的病理学特征。

一、细胞形态学特征小胶质细胞病的病理学特征主要体现在细胞形态学上,其特点是小胶质细胞的数量明显增多。

正常情况下,小胶质细胞在中枢神经系统中起着维持神经元功能和清除代谢产物的重要作用。

然而,在小胶质细胞病的病理过程中,小胶质细胞异常增生并形成结节状聚集,导致神经组织的病理改变。

二、分子生物学特征小胶质细胞病的发病机制尚不完全清楚,但分子生物学研究已经发现了一些与此疾病相关的重要分子标志物。

例如,研究发现小胶质细胞病患者体内的炎性因子水平明显升高,如肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β等。

此外,一些研究还发现与小胶质细胞激活相关的信号通路在小胶质细胞病中发挥重要作用,如Toll样受体、核因子-κB等。

三、免疫组化特征免疫组化是研究小胶质细胞病的重要手段之一。

通过对病理组织标本进行特定抗体的染色,可以鉴定小胶质细胞的表型和功能状态。

研究发现,在小胶质细胞病中,细胞表面标志物如CD11b、CD68等的表达水平明显增加,这表明小胶质细胞激活和炎症反应的存在。

此外,免疫组化还可以用于检测小胶质细胞病患者体内的神经退行性变标志物,如β-淀粉样蛋白,以评估疾病的严重程度。

小胶质细胞病的病理学特征主要表现为小胶质细胞的异常增生和激活。

细胞形态学、分子生物学和免疫组化等方面的研究揭示了小胶质细胞病的发病机制和病理变化。

进一步的研究将有助于深入了解小胶质细胞病的发生发展机制,并为其治疗提供新的靶点和策略。

肉鸡小肠干细胞免疫组化定位和形态学研究

肉鸡小肠干细胞免疫组化定位和形态学研究

农学学报2013,3(07):36-39Journal of Agriculture0引言富含亮氨酸重复单位的G 蛋白偶联受体5(Leucine-rich-repea-t Containing G-protein-coupled Receptor5,Lgr5)最初从结直肠癌细胞中被分离鉴定[1]。

基金项目:福建省教育厅A 类项目(JA12117)。

第一作者简介:邓红玉,女,1988年出生,福建漳平人,硕士研究生,研究方向:基础兽医学。

通信地址:350002福建省福州市仓山区福建农林大学动物科学学院,E-mail :134********@ 。

通讯作者:王全溪,男,1978年出生,福建漳州人,讲师,硕士,研究方向:动物组织学与基础免疫学。

通信地址:350002福建省福州市仓山区福建农林大学动物科学学院,E-mail :wqx608@ 。

收稿日期:2013-04-01,修回日期:2013-05-31。

肉鸡小肠干细胞免疫组化定位和形态学研究邓红玉,温亚萍,梅景良,祁保民,王全溪(福建农林大学动物科学学院,福州350002)摘要:观察肉鸡小肠各段肠干细胞的分布和形态结构特点,为探讨小肠干细胞与肠损伤修复之间的关系提供基础理论。

采集处于生长阶段肉鸡(28日龄)的十二指肠、空肠、回肠,以Lgr5作为肠干细胞表记标记,运用免疫组织化学法研究肉鸡小肠各段中的肠干细胞分布和形态结构特点。

结果表明,Lgr5作为肠干细胞表记标记特异性强,结果可靠。

肠干细胞在肉鸡十二指肠、空肠、回肠均有分布,主要位于隐窝基底部潘氏细胞的+1~+4位置,细胞呈柱状或锥形,核椭圆形或染色不清。

平均每个视野中肠干细胞数量十二指肠2个、回肠3个、空肠3个。

本试验首次证实Lgr5可作为肉鸡肠干细胞的表面标记,并观察了肉鸡肠干细胞的形态结构,初步确定了肉鸡小肠中肠干细胞的数量,为进一步探讨肠干细胞在肉鸡生长发育中的作用奠定基础。

关键词:肉鸡;小肠;免疫组化;肠干细胞中图分类号:S852文献标志码:A 论文编号:2013-0154Study on the Distribution and Morphology of Broiler ’s Intestinal Stem Cellsby Immunohistochemical TechnologyDeng Hongyu,Wen Yaping,Mei Jingliang,Qi Baomin,Wang Quanxi(College of Animal Science,Fujian Agriculture and Forestry University ,Fuzhou 350002,Fujian China)Abstract :The study on the distribution and morphology of broiler ’s intestinal stem cells by immunohistochemical technology had been carried on,which would explore the relationship between intestinal stem cells and intestinal injury.In this experiment,the duodenum,jejunum and ileum of the 28day old broilers was collected.Lgr5was selected to the intestinal stem cell marker and the distribution and morphology characteristics of broiler intestinal stem cell was observed by immunohistochemical method.The results showed that the specificity of Lgr5as intestinal stem cells marker was strong.The intestinal stem cell was found in duodenum,ileum and jejunum of growing broiler,which were located in the +1to the +4position above paneth cells,and the cells were showed columnar or taperedconical,the nucleus were oval or blurring.The average number of intestinal stem cells in every microscope view was two in duodenum,three in ileum and three in jejunum.Therefore we confirmed that Lgr5can be used as broiler intestinal stem cell markers,and the morphological structure of broiler intestinal stem cells was observed,the number of small intestine in the growing broiler was preliminarily determines,which will lay the foundation for further explore the role of intestinal stem cell in the growing broiler.Key words :Broiler;Small Intestine;Immunohistochemistry;Intestinal Stem Cell近年来,研究者在肝癌及卵巢癌细胞中也发现Lgr5的表达[2],并试验证实其为Wnt信号途径的靶基因。

形态学、流式细胞术以及免疫组化在检测多发性骨髓瘤患者中的应用效果

形态学、流式细胞术以及免疫组化在检测多发性骨髓瘤患者中的应用效果

形态学、流式细胞术以及免疫组化在检测多发性骨髓瘤患者中的应用效果WANG Hui;GAO Jie【摘要】目的研究形态学、流式细胞术以及免疫组化在检测多发性骨髓瘤患者中的应用效果.方法选择60例多发性骨髓瘤患者,均按照常规方法进行骨髓穿刺,并进行形态学、流式细胞术以及免疫组化检测.观察形态学检查、流式细胞学检测以及免疫组化检测的结果 .结果 60例多发性骨髓瘤患者均出现不同程度的免疫球蛋白增加和正色素性贫血,骨髓细胞形态学结果主要表现为异常浆细胞增生,且出现质的改变.流式细胞学检测CD45表达异常(55例阴性、5例部分阳性);CD19的阴性表达率为100.00%;CD38以及CD138的阳性表达率均为100.00%.免疫组化检测Kappa阳性43例,CD138阳性表达率为100.00%,lambda阳性16例.流式细胞学以及免疫组化检测的阳性诊断符合率相比无明显差异(P>0.05);形态学检查骨髓瘤细胞所占比例明显高于流式细胞学以及免疫组化检测(P<0.05).结论形态学、流式细胞术以及免疫组化在检测多发性骨髓瘤患者中均具有较高的应用价值,可按照患者的具体情况,将三者联合使用以提高临床阳性诊断率和疗效监测.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2018(033)012【总页数】4页(P1963-1966)【关键词】形态学;流式细胞术;免疫组化;多发性骨髓瘤【作者】WANG Hui;GAO Jie【作者单位】;【正文语种】中文【中图分类】R733.3多发性骨髓瘤是一种临床上常见的B淋巴细胞起源的浆细胞克隆性血液系统恶性肿瘤,以骨髓中恶性浆细胞发生异常聚集及增生为主要特征,好发于中老年人,目前主要的治疗方法为造血干细胞移植以及化疗[1-2]。

由于在多发性骨髓瘤早期的临床表现无特异性,极易发生漏诊以及误诊。

临床诊断多发性骨髓瘤主要根据骨髓的形态学改变情况,有无出现溶骨性骨质破坏,血清有无表达单克隆免疫球蛋白。

骨髓细胞形态学检验在血液病诊断中的重要性和临床应用

骨髓细胞形态学检验在血液病诊断中的重要性和临床应用

骨髓细胞形态学检验在血液病诊断中的重要性和临床应用611731血液病是指一组由于骨髓造血功能障碍或异常所致的疾病,包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征等。

随着分子生物学和基因组学技术的发展,血液病的诊断和治疗取得了显著进展,但传统的病理组织学检查仍然具有一定的局限性。

因此,骨髓细胞形态学检验作为一种非侵入性的检查方法,在血液病的诊断和治疗中发挥着越来越重要的作用。

本文将着重介绍骨髓细胞形态学检验在血液病诊断中的重要性和临床应用。

一、骨髓细胞形态学检验的基本原理骨髓细胞形态学检验是通过对骨髓细胞进行直接观察和分析,以确定其形态、数量、结构和功能等特征的方法。

常用的骨髓细胞形态学检验包括涂片染色法、免疫荧光染色法、流式细胞术等。

这些方法可以对骨髓细胞的各种表面标志物进行检测和鉴定,从而为疾病的诊断和治疗提供依据。

骨髓细胞形态学检验需要用到的实验材料包括:①骨髓样本:骨髓样本通常来源于患者的髂骨穿刺或胸骨穿刺。

采集骨髓样本时需要注意无菌操作,避免污染。

②骨髓涂片:将采集到的骨髓样本制备成涂片,以便进行显微镜观察。

常用的骨髓涂片制备方法有染色法和免疫染色法。

③显微镜:用于观察骨髓细胞形态学的仪器,可选择常规光学显微镜或高分辨率显微镜。

二、骨髓细胞形态学检验在血液病诊断中的重要性首先,骨髓细胞形态学检验是一种直接观察患者骨髓细胞形态的方法,通过对骨髓细胞的形态、数量、大小等方面的观察,可以初步判断患者是否存在血液病的可能。

与传统的血液病诊断方法相比,骨髓细胞形态学检验具有操作简便、无创、结果直观等优点,为医生提供了一个快速、准确的诊断依据。

其次,骨髓细胞形态学检验对于血液病的分型和分类具有重要意义。

通过对不同类型和亚型的血液病患者的骨髓细胞进行形态学分析,可以帮助医生更准确地确定疾病的类型和分型,从而为制定针对性的治疗方案提供依据。

例如,白血病根据细胞形态、分化程度、免疫表型等特点可分为多种亚型,如急性髓系白血病(AML)、慢性髓系白血病(CML)等,不同类型的白血病治疗方法和预后也有所不同。

子宫内膜间质肉瘤的形态学及免疫组化研究

子宫内膜间质肉瘤的形态学及免疫组化研究
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现 代 中 西 医 结合 杂志 Mo e Ju n f ne rt rdt n l hn s a dWet nMe in 0 7 A g 6 2 ) dm r a o It ae T a io a C i e n s r dc e 0 u ,1 ( 2 o l g d i e e i 2
to co c p ,a d Vi , r n mir s o e n m CK , s , M A,EM A,S一 1 0,L De S 0 CA,CD 4 3 ,ER a d PR we ema k d b P me h d n r r e y S t o .Re u t sl s Lih co c p h we h tt e ES i u sc a a t r e y a f ta ie a d d fu ep oi r t n o n f r r u d o g tmir o es o d t a h S t s ewa h r ce i d b n i i r t n i s r l e a i fu i m o n r s s z n l v f f o o o a c l .wi b n a ts l b o d v s esi to n a c lri v s n o a c l .Th u e f a y k n i wa < v 1 el s t a u d n ma1 lo e s l n sr ma a d v s ua a i ff m el h n o o s e n mb ro r o i e s s k s
S u fi t dy o mm un hit c e it y a o p l g fe do e rc lsr m a a c m a o so h m sr nd m r ho o y o n m tia t o ls r o

免疫组化技术的原理及方法

免疫组化技术的原理及方法

免疫组化技术的原理及方法免疫组化技术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的高灵敏度和高特异性的实验技术。

它通过特异性抗体与目标分子间的特异性结合来检测目标分子的存在和表达水平。

在该技术中,抗体作为探针,能够识别和结合目标分子的特定表位,从而可定量或定性地检测分子的存在或表达水平。

免疫组化技术的原理基于生物体自然产生的免疫应答机制。

当有外来物质(抗原)进入机体时,机体的免疫系统会产生抗体来与其特异性结合。

抗体与抗原结合后会激活一系列免疫反应,包括免疫效应细胞的激活和分泌抗体的B细胞的增殖和分化。

在免疫组化技术中,我们可以利用这一特性,使用高亲和力的特异性抗体来实现对目标分子的检测。

直接法是利用已标记的特异性抗体直接与目标分子结合。

这种方法在实验操作上比较简单,但需要对每种目标分子都有特异性标记的抗体。

直接法适用于目标分子丰度较高(>100 ng/mL)的情况。

间接法是通过两步反应实现对目标分子的检测。

第一步,使用未标记的特异性抗体与目标分子结合;第二步,使用标记抗体与先前结合的抗体结合。

标记抗体可以是酶、荧光染料、放射性同位素等。

这种方法的优势是只需要使用少量的少数几个标记抗体即可覆盖多种目标分子的检测,同时具有更高的灵敏度。

免疫组化技术的方法还包括免疫组化染色、免疫印迹和流式细胞术等。

其中,免疫组化染色是一种常见的方法,它通过对标本中特定目标分子的特异性染色来实现对其定位和定量的研究。

该方法适用于形态学研究和病理诊断。

免疫印迹是一种能够定性和定量地检测蛋白质表达的方法,通过将不同大小的蛋白质分子分离,并使用特异性抗体来检测目标蛋白质。

流式细胞术则是一种通过细胞表面的特异性抗体标记来分析和分离细胞的技术,它可以实现对细胞表型、蛋白质表达水平和细胞数量的检测。

总之,免疫组化技术是一种依赖于特异性抗体与目标分子结合的实验技术。

通过选择合适的检测方法和抗体,免疫组化技术可以应用于各种生物医学领域,如基础研究、临床诊断和药物研发。

矿产

矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

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组织学、细胞学:研究形态结构
组织化学:化学组成含量,酶的存在及活性
第一节 免疫组织化学的定义
一、组织化学(Histochemistry) 组织化学源于组织学、细胞学和生物 化学,又不同于这些学科。
生物化学:破坏细胞,定位性差
组织化学:原位显示,定位性强
第一节 免疫组织化学的定义
二、免疫组织化学(Immunohistochemistry,ICC) 组织化学 免疫组织化学 免 疫 学
二、抗 体(antibody,Ab)
2.抗体的标记: 必要性:组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不 可见的,若在镜下检测,必须具有可视性标记 物。 标记物:荧光素、酶、铁蛋白、胶体金和放射 性同位素等
2.抗体的标记:
① 荧光素标记: 在抗体上标记荧光素,经特定波长的光照射激 发后能够发出荧光,借此定位观察和追踪。 最常用:异硫氰酸荧光素 (Fluorescein Isothiocyanate, FITC),紫外线激发下产生翠绿 色荧光。
2.抗原的两种特性:
①免疫原性 ----能刺激机体产生相应的抗体 ②免疫反应性----可与相应的抗体发生特异性结合
第二节 免疫组织化学中的免疫化学
二、抗 体(antibody ,Ab )
1.抗体的定义: 是机体在抗原物质刺激下形成的一类能 与抗原特异性地结合的球蛋白,称免疫 球蛋白。
第二节 免疫组织化学中的免疫化学
通过生物化学的方法在原位产生不 溶解的有颜色的反应产物,来显示微细 结构的位置,然后用显微镜观察。
第一节 免疫组织化学的定义
一、组织化学(Histochemistry) 组织化学源于组织学、细胞学和生物 化学,又不同于这些学科。
第一节 免疫组织化学的定义
一、组织化学(Histochemistry) 组织化学源于组织学、细胞学和生物 化学,又不同于这些学科。
* 伊红是酸性染料,粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染 成红色。被伊红着色的结构本身为碱性,具有嗜酸性 (Acidophilic)。 * 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。
肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝(一种蓝色染料)染成紫红色
b. 如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同,该结 构具有异染性(Metachromasia)。 c. 如果某结构能将银离子还原成银原子,并吸附银原子 而使自身显示棕黑色,该结构具有嗜银性(Argyrophilic)。
生物素:又称维生素H,一种小分子维生素
抗生物素:又称卵白素或亲和素,对生物素具很
强的结合力。 两者即可与抗体偶联,又可被酶标记
生物素---抗生物素系统一端偶联大分子生物
反应体系,另一端连结标记物,后者加入酶的底
物,产生颜色反应。
第二节 免疫组织化学中的免疫化学
二、抗 体(antibody,Ab)
A cell-labeling technique called DiOlistics,invented by postdoctoral fellows Wen-Biao Gan, PhD, and Jaime Grutzendler, PhD, and faculty members Rachel O.L. Wong, PhD, and Jeff W. Lichtman, MD, PhD -- distinguishes individual cells in the brain using seven different colors.
–保持标本原有的结构、形态;
–在原位保持待测抗原的免疫活性;
–根据抗原含量及特性选择最佳实验方法。
第三节 组织细胞的处理
一、取材 二、固定 三、脱水 四、透明 五、透入与包埋 六、切片 七、贴片与烤片
第三节 组织细胞的处理
一、取材 免疫组化中常用的组织和细胞标本
• 细胞标本
组织印片 细胞培养片 细胞悬液涂片 石蜡切片
1.甲醛
固定浓度: 固定时间: 固定后处理: 配制方法: 10%水溶液 12-24h 流水冲洗12-24h 甲醛原液10-20ml+蒸馏水90-80ml
特性:渗透力强,组织收缩少。易氧化
(四)常用固定剂的优缺点:
2.乙醇(酒精)
固定浓度: 固定时间: 固定后处理: 配制方法: 80--95%乙醇 取决于组织大小及乙醇浓度4-12h 直接入脱水剂 无水乙醇80-90ml+蒸馏水10-20ml
第一节 免疫组织化学的定义
四、免疫组织化学的优点及应用
组织细胞内具有抗原性的物质,如肽类、
激素、神经递质、受体、表面抗原等均可用免
疫组织化学方法显示,在基础与临床科研中广
泛应用。
第二节
免疫组织化学中的免疫化学
第二节 免疫组织化学中的免疫化学
一、抗 原(antigen,Ag)
1.抗原的定义
能够刺激机体产生免疫反应的物质
(三)理想的固定剂需具备的条件:
1.迅速渗入材料。 2.使细胞不致因固定引起人为的改变。 3.对组织各部分渗透力相等,使组织内外完全固定。
4.尽可能避免组织膨胀或收缩。
5.增加细胞内含物的折光程度和染色能力。
6.使组织变硬,适于切片,但又不至于太硬而松散。
7.固定以后又有保存作用。
(四)常用固定剂的优缺点:
固定时间: 12-24h 固定后处理:70%酒精洗去苦味酸的黄色
(四)常用固定剂的优缺点:
5.Carony液
配制方法: 冰乙酸10ml+氯仿30ml+无水乙醇 60ml
固定时间: 20-40min,较大材料不超过2-4h 固定后处理:直接入脱水剂脱水
(四)常用固定剂的优缺点:
6.戊二醛-多聚甲醛缓冲液
第三节 组织细胞的处理
一、取材 (二)组织标本的取材 1.动物处死的要求: 迅速处死,避免因痛苦产生组织细胞的变形 2.动物处死的方法 麻醉(乙醚、氯仿、4%戊巴比妥、20%氨 基甲酸乙脂) 击头、颈椎脱臼、毁脑和脊髓 股动脉放血、空气栓塞法
第三节 组织细胞的处理
一、取材 (二)组织标本的取材 3. 取材的注意事项 1)处死后立即取材。
配制方法: 4%多聚甲醛磷酸缓冲液中加入0.51%戊二醛
固定后处理:磷酸缓冲液水洗 免疫电镜 应用:
布进行组织和细胞原位检测的技术。
第一节 免疫组织化学的定义 三、免疫组织化学的发展简史
—1941年 Coons 实用免疫荧光技术。
—60年代 Nakane建立酶标抗体技术。 —1981年 Hsu 建立了 ABC 法。 —90年代分子杂交、原位杂交、原位PCR法迅速发展 —2000年各种免疫组化技术更加成熟,成为生命科学 工作者必须掌握的基本技术之一。
特性:兼有硬化和脱水作用。很少单独使用。
(四)常用固定剂的优缺点:
3.A-F液(乙醇-甲醛溶液)
配制方法: 无水乙醇或95%乙醇(A)90ml+ 甲醛原液(F)10ml 固定时间: 组织块4-12h,铺片5-10min 固定后处理:直接入脱水剂脱水
(四)常用固Байду номын сангаас剂的优缺点:
4.Bouin液
配制方法: 饱和苦味酸75ml+40%甲醛25ml+冰 乙酸5ml
3. 标记抗体的纯化: 去除抗体溶液中不需要的杂有成分,提高 标记抗体的特异性,减少背景染色。
4.标记抗体的质量评估和保存:
目前我们试验所用的抗体大多由试剂公司
(SIGMA、SANTA等)直接购买
第三节
组织细胞的处理
第三节 组织细胞的处理
•标本制备恰当,是免疫组化成功的首要条件
•免疫组化对组织和细胞标本的要求:
免疫组化与 细胞形态学研究
免疫组织细胞化学
(理论10学时、实验30学时)
出勤率 理论30分 笔 记 开卷考试 总成绩 实验表现 实验70分 实验结果 实验报告
10 10 10 100分 20 30 20
参考书:
第一节 免疫组织化学的定义 第二节 免疫组织化学中的免疫化学
主 要 内 容
第三节 组织细胞的处理 第四节 免疫组织化学染色的原理和方法
一、取材 (一)细胞标本的取材
③细胞悬液涂片
海马神经元内11β-HSD1与GR
的免疫细胞化学染色
GC可以促进海马神经元11β -HSD1的表达, 此作用是 否与GR介导的基因机制有关 糖 皮 质 激 素 代 谢 酶 11β - 羟 基 类 固 醇 脱 氢 酶 Ⅰ 型 (11β -HSD1)和糖皮质激素受体(GR)在大鼠海马神经 元内的共同分布及其意义。用免疫细胞化学方法研究 显示, 海马神经元内不仅存在11β -HSD1免疫反应物 质, 还存在GR免疫反应物质, 而且11β -HSD1与GR共 存于同一个海马神经元内
Stylonychia mytilus
AZM、UM、FC
Stylonychia mytilus
Paramecium caudatum
Paramecium caudatum
Stylonychia mytilus
第一节 免疫组织化学的定义
四、免疫组织化学的优点及应用
1.特异性强
优点 2.灵敏度高 3.定位准确
第五节 免疫组织化学技术的实际应用
组织学: 体内结构为立体的,三维的,而课本、讲义和显微镜下 的结构均为平面的,二维的。
石蜡切片
a. 最常用的染料是苏木素(Hematoxylin, H)和伊红(Eosin, E)。 * 苏木素是碱性染料,蓝紫色,可以使细胞核等着色。被苏木 素着色的结构本身为酸性,具有嗜碱性(Basophilic)。
2)刀片锋利,维持原形。
3)取材力求小而薄。
4)详细记录材料名称及取材时间。
第三节 组织细胞的处理
二、固 定 (一)固定的目的
1.终止酶的活性,防止自溶。
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