电针与电针合并氟西汀治疗抑郁症的基因谱表达异同的研究

电针与电针合并氟西汀治疗抑郁症的基

因谱表达异同的研究

（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ）

【摘要】目的研究电针和针药结合治疗抑郁症作用的机理，通过两者基因谱表达的异同以了解针药结合的优缺点，为临床应用电

针和针药结合治疗抑郁症提供实验依据。方法取正常组、模型组、电针组、针药组（电针合并氟西汀灌胃）大鼠的海马组织进行Roche NimbleGen全基因组表达谱芯片测试并进行数据分析。结果电针组“纠偏”的基因有226条;针药组“纠偏”的基因有221条，“增偏” 的基因（与正常组的差异更甚于模型组）有9条。两组“纠偏”的基因均以下调的基因为主，涉及凝血、炎症和凋亡相关基因等，其中电针组为125条，针药组为157条;而上调的基因包括蛋白质生物合成有关的基因、嗅觉感受器和微管系统基因等，其中电针组为101条，针

药组为64条。结论电针与针药治疗抑郁症的机理与改善多条基因的表达有关，两者的差异表达基因谱较为相似；针药结合的优势体现在强有效地下调凝血因子V和5］羟色胺2C受体的表达。同时针药结合的结果还出现“增偏”基因，可能是由于氟西汀的副作用引起的

【关键词】电针；针药结合；抑郁症；基因芯片

近十年来，有大量报道运用电针或电针合并氟西汀治疗抑郁症的临床及实验研究。通过临床观察对比，电针或针药结合比口服氟西汀起效快，电针在快速起效中起了主要作用；而针药结合又能减轻氟西

汀的不良反应，较氟西汀、单纯电针疗效更确切，可缩短病程，是一种安全、有前途的联合治疗方法［1］。但在动物实验研究［2~4］中并未反映针药结合比单纯电针具有更好的疗效，或者针药结合比单纯电针

具有更多不良反应。为了深入了解针药结合的优势及其不足之处，我

们对运用电针和电针合并氟西汀治疗的抑郁症大鼠进行全基因组表达谱芯片测试并进行数据分析，寻找两者基因谱表达的异同，以了解针药结合的优缺点；亦从基因表达的层次讨论两者治疗抑郁症的机理。

1材料与仪器

1.1动物SD清洁级大鼠，体质量220〜260 g，雄性，由浙江省实验动物中心提供，合格证号：SCXK（浙）2008 ］0033。

1.2仪器和试剂Morris迷宫（淮北正华生物仪器设备有限公司产品，型号:MORRIS）; HANS ［200B型韩氏穴位神经刺激仪（南京济生医疗科技有限公司生产）；Nanodrop ND J000微量紫外/可见分光光度计（美国Na noDrop 科技有限责任公司）;MAUI Hybridizati on System 生物芯片杂交仪（美国BioMicro Systems）;Genepix4000B Scanner 芯片扫描仪（美国Axon公司）。Trizol （美国invitrogen公司），RNeasy kit （RNA提取试剂盒）（德国Qiagen公司）;Cy3（吲哚类菁染料）等。

2方法

2.1分组大鼠经适应性饲养1周后用OpeField法作行为学测试。实验中所用“敞箱” 以morris迷宫代之。用该系统记录大鼠在3 min 内的水平活动轨迹并计算相应的路程，以反映大鼠的活跃程度或抑郁状态，比通常所用敞箱数方格的方法准确。为了尽可能降低实验数据

的离散度，经反复实验，选取水平路程在（2 700〜3 500 cm）的正常大鼠进行实验。另以大鼠两只前肢离地直立次数为垂直活动得分，以

反映其对外界的好奇心和探究心理。由于直立次数在个体间的差异较小，一般按水平路程的测试结果进行评价。将水平路程相近的40只

大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、针药组，共4组，每组10只;正常组每笼饲养5只，其余各组每笼1只（置小笼中孤养）。

2.2造模模型组、电针组、针药组大鼠，共接受21 d各种不同的应激，包括冰水游泳（4C，5min）、热应激（45 C水浴，5 min）、禁水（24 h）、夹尾（1 min）、电击足底（电压50 mV，每隔15 s刺激1次每次持续10 s，共15次）、摇晃（1次/s，5 min）、禁食（24 h）和昼夜颠倒等刺激，每天随机给予1〜2个刺激，相同的刺激不连续出现，每种刺激总共不少于4次。正常组大鼠不接受应激，并饲养在另一间房间以免受影响。

2.3治疗（造模结束行为学测试后立即介入治疗）正常组：继续常规饲养，每笼饲养5只;模型组：继续孤养，不予任何治疗措施；电针

组：继续孤养，电针治疗。治疗时操作者采取坐姿，弯膝，两腿间铺以隔水的塑胶，取一废枕头套置其上，大鼠自笼中取出后令其趁势钻

进枕头套中，遮蔽其双眼并用手固定其头部。选择百会、印堂穴：根据《实验针灸学》[5]大鼠穴位图谱选百会穴，并依据比较解剖学，在大鼠前正中线与额顶骨缝交界线前方处定印堂穴。选用苏州医疗用品

厂生产的“华佗”牌.35 X13 mm针刺针进行治疗。针刺方法：百会穴、印堂穴均向前（鼻侧）平刺4 mm，分别接韩氏穴位神经刺激仪的正负极，频率2Hz，输出电流1 mA，刺激时程15 min/次，1次/d。在施针过程中保持安静，避免惊吓大鼠，减少额外刺激。针药组：按照 1.8 mg

kg_1给予氟西汀灌胃后30 min施以电针。由于大鼠的生活规律为昼伏夜出，为了不干扰其白天休息，特意在20: 00〜24 : 00进

行治疗。分别于造模前（dO）、造模结束（d21）及治疗一周后（d28）测定各组大鼠的体质量、行为学（水平运动和垂直运动）和糖水消耗量。

2.4取材治疗1周后处死各组大鼠，开颅取脑，在冰盒上分离海马，置液氮中保存。正常组、模型组、电针组、针药组大鼠各取1

个标本送交上海康成生物工程有限公司进行Roche [NimbleGen全基

因组表达谱芯片测试以及real time[PCR验证，芯片名称为Rattus norvegicus 12 x135Karray。

2.5全基因组表达谱芯片主要实验流程

2.5.1总RNA的抽提及质量检测取正常组、模型组、电针组、

针药组大鼠海马组织各100 mg，用Trizol和RNeasy kit抽提RNA，使用Nanodrop测定RNA在260 nm、280 nm和230 nm的吸收值，以计算浓度并评估纯度。用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯