有机蛋黄中卵磷脂的提取

齐齐哈尔大学实验报告

题目：蛋黄卵磷脂的提取＿＿学院：＿＿专业班级：＿＿＿

学生姓名：___＿＿＿＿同组者姓名：＿＿

成绩：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿

2013 年 6 月 1 日

实验目的

1了解从动物中提取有效物的一般原理和方法。

2更好的理解和利用相似相容原理。

3熟悉从蛋黄中提取卵磷脂的操作。

4掌握薄层液相色谱的原理及操作方法。

实验原理

蛋黄卵磷脂的提取采用有机溶剂萃取法，在使用溶剂提取卵磷脂时，蛋黄是一种相当稳定的乳状液，其中乳化剂是磷脂和蛋白质结合的脂蛋白复合物。要把磷脂完全提取出来，所用溶剂必须能破坏这种复合物，并且对脂质有良好的溶解能力。极性溶剂甲醇、乙醇对脂质溶质的溶解能力较差。非极性溶剂己烷乙醚、氯仿难以破坏脂蛋白复合物。所以采用混合溶液萃取法。

薄层色谱法又称薄版色谱法。薄层色谱法按其固定项性质和分离机理可分为：吸附薄层法、分配薄层法、离子交换薄层法及尺寸排阻薄层法等，这里主要讨论吸附薄层法。薄层色谱是一种物理化学分离技术，其吸附剂一般是极性的，组分的分离程度是随着吸附剂、被分离物、展开剂的性质不同而有差异。当把涂布着极性吸附剂的干薄层板放入展开剂中，由于毛细血管效应使展开剂开始进入有不同直径的毛细管相互连接的薄板中，使流动速度与展开剂的表面张力、粘度以及吸附剂性质相关，此时点在薄板上的样品随着展开剂的移动而移动。由于被分离组分的极性差异使它们与吸附剂和展开剂的亲和力产生差别，致使展开时各组分在薄板上移动速度不一样，从而导致展开后各组分移动距离不一样。被分离物中与吸附剂亲和力强的组分留在接近样品滴加点（原点）较近的地方，而与吸附剂亲和力弱的组分在离原点较远的地方，从而使各组分分离开。薄层色谱法基本原理实质上也是吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程。通过不断地往复放大微小差别，从而达到分离的目的。

仪器与实验药品

分析天平；抽滤装置；烧杯；容量瓶；量筒；试管；表面皿；玻璃棒；滤纸；三口瓶；旋转蒸发仪；分液漏斗；水浴锅；原底烧瓶。

药品密度g/cm3 熔点℃沸点℃溶解性g/ml 状态浓度mol/ml 分子量g/mol毒性氯仿 1.48 -63.7 61.2 0.8 液119.39 有无水乙醇0.79 -117.3 78 互溶液95% 46.07 无氯化钠溶2.165 800.7 1965 互溶液10% 58.443 无无水硫酸镁2.66 1124 固120.37 无丙酮797.2 -94.6 56.48 互溶液58.08 微

乙醚 0.7138 -116.2 34.6 液 6.89% 74.12 有 三乙胺 0.7255 -114.8 89.5 微溶 液 101.19 有 实验步骤

1 蛋黄卵磷脂的提取

取新鲜的熟鸡蛋一个，完整的取出蛋黄，取一半，放入装有搅拌器、回流冷凝管的100ml 三口瓶中。加入20ml 混合溶剂（氯仿：乙醇=1:3），控制三口烧瓶中温度为35～40℃，搅拌30min 。抽滤，滤饼在同样条件下再提取一次。滤液转入分液漏斗中，以5ml 氯仿清洗抽滤瓶后一并加入分液漏斗中，加入40ml 10%的氯化钠溶液。分出氯仿层，用无水硫酸钠干燥。干燥后的氯仿层减压蒸馏至干，加入10ml 丙酮，搅拌，冰水冷却后分离沉淀物。用尽可能少的乙醚溶解沉淀物，装入100ml 烧杯中，用1ml 乙醚清洗烧瓶后也转入烧杯。再搅拌下缓缓加入10ml 丙酮，冰水冷却后清去丙酮层，在真空干燥箱中，使固体产品挥发掉残留溶剂后称重，得到白色或浅黄色蜡状卵磷脂产品。 2 薄层色谱法定性检测

点样：取管口平整的毛细管吸取配制好的2%的卵磷脂氯仿溶液，点在薄层板上，点的直径一般为2～3mm,样品点在；离薄层一端为1cm 左右的起始线上，离板边约有1cm 的距离。

展开：点样完毕，待溶剂挥干后，用氯仿、乙醇、三乙胺与水的体积比为1:1:1:0.3的混合溶剂中进行展开，将薄层板斜放在盛有展开剂的层析槽中，薄板与展开剂的液面成15℃左右的夹角，点有样品的一端侵入溶剂中，深达0.5cm 左右、切勿使溶剂侵入原点，盖好层析槽盖，当溶剂前沿达板的另一端1cm 左右时，即可取出层析板，标出溶剂前沿位置。

显色：取出的薄层板，立即喷洒重铬酸钾显色剂（0.6%的重铬酸钾的55%的硫酸），120℃烘干10分钟使其显色，观察到红色斑点，计算R f 值。

数据处理

1 蛋黄卵磷脂的产率=

%100⨯蛋黄总质量量浅黄色蜡状磷脂产品质=1.611/8.815×100%=18.28%

2 测R f 值：

a=0.60cm b=0.95cm c=2.80cm

∴R f =a/c=0.60/2.80=0.214

R f=b/c=0.95/2.80=0.340

显色剂：重铬酸钾

助色剂：乙醇：三乙胺：水：氯仿=3:3:0.9:3

误差分析

从产率来看，22%的产率，实验结果偏低，可能是因为抽滤时造成的产品损失和分液时氯仿层没有完全分出。

实验要点与注意事项

1卵磷脂提取时要注意提取温度，卵磷脂中常含有不饱和脂肪酸，易氧化，是颜色变深，故需严格控制提取温度在45℃一下。

2 使丙酮、乙醚，室内应严格避免明火，并有良好的通风条件。

3薄层色谱法定性检测时要注意展开剂的极性，要小心仔细配制。

思考题

1单一溶剂在蛋黄卵磷脂提取中的缺陷是什么？

答：如果只用极性溶剂如甲醇、乙醇对脂质溶解能力差；单一的非极性溶剂己烷乙醚、氯仿难以破坏脂蛋白复合物。而蛋黄是一种相当稳定的乳状液，其中乳化剂是磷脂和蛋白质结合的脂蛋白复合物，要把磷脂完全提出来，所用溶剂必须能破坏这种复合物，所以单一溶剂不能满足要求。

2化学方法鉴别磷脂举例。

答：薄层色谱法对胡麻卵磷脂进行定性鉴别，表明胡麻卵磷脂主要成分是磷脂酰胆碱（PC）。

3影响R f值的因素。