血红蛋白吸收曲线

实验二血红蛋白及衍生物吸收光谱测定

[原理]血红蛋白（Hb）与O2结合生成氧合血红蛋白（HbO2），与CO结合生成一氧化碳血红蛋白（HbCO），与K3[Fe（CN）6]反应生成高铁血红蛋白（MHb）。

由于这些物质的组成成分不同，其分子结构也不同，所吸收的光波也有差异，每种物质显示出特有的吸收光谱。利用分光光度计测定不同波长的光线通过溶液的吸光度，以波长为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制吸收光谱曲线。

项目吸收峰数吸收光谱（nm）

HbO2 2 541 577

HbCO 2 540 569

MHb（pH6.4） 2 631 500

[器材]

1.722型分光光度计

[试剂]

1.去纤维蛋白血

2.辛醇

3.10%K3[Fe（CN）6]

[操作]

1.样品的制备

HbO2：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml

HbCO：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml，再加辛醇1滴，摇匀，用滴管通煤气于液面下2~3分钟，使液体呈樱桃红色（注意用后立即关闭煤气）。MHb：取去纤维蛋白血3滴，加蒸馏水5ml，加新鲜配制的10% K3[Fe（CN）

]1滴，充分混匀，使液体呈暗褐色。

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2.测定：分别取上述溶液3ml盛于比色杯内，另一个比色杯盛蒸馏水作空白，在波长470~650nm范围内，每隔20nm测吸光度一次，在接近吸收高峰时，则每隔2nm测一次波长，每次必须重新校正零点，再测吸光度。以入射光波长为横坐标，各相应的吸光度为纵坐标，分别绘出各物质的吸收光谱曲线。