丙酮酸氧化酶速率法在献血员ALT筛查应用评价论文

丙酮酸氧化酶速率法在献血员ALT筛查中的应用评价【中图分类号】r446.1 【文献标识码】a 【文章编号】1672-3783（2011）02-0136-01

【摘要】目的：丙酮酸氧化酶速率法应用于献血员alt筛查。方法：利用氧化酶丙酮酸生成过氧化氢，过氧化氢与2，4，6三溴-3-羟基笨甲酸和4-氨基比林在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物的原理。结果：该方法线性范围大，灵敏度高，结果准确，重复性好，抗干扰能力强等优点，适合血站大批量标本的检测。

【关键词】丙酮酸氧化酶；献血员；alt

1 材料和方法

1.1 仪器：

1.1.1 材料和方法

1.1.2 仪器：酶标仪mk3（芬兰丹尼仪器公司）；实验室软件itswell由烟台海参威科技有限公司提供；

1.2 试剂：北京瑞华倍肯医学制剂有限公司（批号：hp90513）

1.3 校准血清由江西瑞华倍肯医学制剂有限公司（批号：

hp90201）

1.4 反应原理：

l-丙氨酸+a-酮戊二酸 alt丙酮酸+l-谷氨酸

丙酮酸+o2+p丙酮酸氧化酶h2o2+乙酰磷酸

h2o2+4aap+tbhba过氧化物酶红色醌类化合物

1.5 测定方法：取96孔酶标板于a1孔加低值校准血清20ul,a2

孔加中值校准血清20ul, a3孔加高值校准血清20ul,a4至h12为测定孔，各孔加标本20ul,再全部加酶试剂工作液200 ul,，混匀，37℃反应10min，立即放入37℃酶标仪进行比色，第一次吸光度为a1，3分钟后进行第二次比色，吸光度为a2，主波长为492nm,次波长为620nm，获取各孔吸光度之差（a2-a1），计算：alt活性（u/l）=测定孔吸光度/标准孔吸光度*校准血清u/l。

2 实验结果与讨论

2.1 线性:取alt值高低不同标本15份，用本法测定，测得值见表1，由表1可以看出，在300u/l之内具有良好的线性，对于高值标本，bk测得值会有所偏低，但不会造成假阴性而导致漏检，为献血员alt筛查的较为理想方法。

2.2 方法相关性：取12u/l-126u/l共80份，用本法测定，测得与ifcc方法相关系数为r=0.989,y=1.075x+1.031

2.3 反应稳定性：上述80份标本，在37℃反应10分钟后，进行0分钟、2分钟、4分钟、6分钟、8分钟、10分钟、13分钟、15分钟、17分钟、19分钟测定，发现0分钟、2分钟、4分钟、6分钟测得基本一致，8分钟以后值偏低，说明0-6分钟之内进行速率测定，结果可靠，在线性期范围内。

2.4 用低中高校准血清各一份，批内重复20次，求x的平均值，s，cv值，批间连续重复测定20次，求x的平均值，s，cv值（表2），由表2可见，本法测定alt批内、批间cv值均小于5%，显示该方法的精密度和重复性较好。

2.5 灵敏度:与ifcc方法比较，两中方法测定230份大于45u/l 的标本，结果见表3，由表3可见，bk试剂用酶标仪测定alt有较好的敏感性和特异性。

2.6 本法对干扰因素的消除

2.6.1 标本用量减少，本法样本试剂比例1∶10接近lfcc推荐alt测定参考方式0.083的比例，不仅可确保底物短时间内不被耗尽，防止产生假阴性而导致漏检，并可相对减少溶血、脂血的干扰。

2.6.2 本法采用速率法，计算上采用第二次od值减去第一次od 值，可消除中度以下溶血、脂血、胆红素对结果的影响。

2.6.3 使用参考波长620nm,使用双波长测定也可有效克服溶血、脂血的干扰。

3 结论

丙酮酸氧化酶速率法应用于筛查献血员alt，具有线性范围大，操作简便，快速，结果准确，重复性好和抗干扰性强等优点，该方法能保证37℃的酶反应最佳温度和活性，又保证无高值alt假阴性结果的发生，是目前筛查献血员alt比较理想的选择。

参考文献

[1] 刑文革,马荣,郑怀竟.血站丙氨酸氨基转氨酶检验中几种

诊断方法的比较,中国输血杂志,2004;17(5):330-332

[2] 丙氨酸氧化酶速率法试剂盒说明书.

[3] 范泽旭.丙氨酸氧化酶速率法在献血者血液筛查中的应用

分析.医学论坛杂志，2004：25（10）：12-13

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