五味子总木脂素的提取与分离

２ 实验 方 法
Fra Baidu bibliotek
２ ． １ 正交 实验 优化 提取 条件 ： 采用 乙醇 进行 提取 。 考虑 到木 脂素 具 有 弱极 性 和脂 溶性 ， 通 过 参考 文 献 ， 用浓 度 为 ８ ０ ％的乙醇 进 行 回 流 提取 。选择 乙醇用 量 （ 倍数 ） 、 提 取 次数 、 提 取 时 间作 为处 理 因 素， 每个 ｒ 太 Ｊ 素 选择 三个 水平 ， 进行 ｋ（ ３ ） 正 交试 验 。 共 进行 ９ 组 实 验， 每 组用 烘 干 ７ 小 时 并粉 碎 的北 五味 子 药材 ５ ｇ ， 具 体考 察 因 素 水 平 见表 １ 。得 出最佳 提取 条件 后 ， 进 行 三次验 证性 试验 。 流 至柱 平 面后 加 入 ６ ０ ％乙醇 ５ ｍ ｌ 。将 这 ５ ｍ ｌ 乙 醇 以相 同 流 速 流 表 ｌ正交试验因素水平表 出， 进 行含 量测 定 。 ２ ． ２ ． ３ ． ４ 总 木脂 素洗 脱物 纯度考 察 ： 将两 种大 孔树 脂 的洗 脱 液分 别 混匀 ， 各取 ｌ Ｏ ｍ ｌ 进 行冷 冻 ｆ燥 ， 测 量总 固体 物质 量 ， 计 算纯 度 。 根 据 正交试 验结 果直 观分 析得 最佳提 取 条件 为 ８ 倍 量 溶剂 、 提取 ３ 次、 每次 ２小时 。 以此条 件进行 ３ 次 验证 性试验 ， 其 木脂 素 含量 分 别 为 ３ ２ ３ ． ４ ８ ａ ｒ ｇ 、 ３ ２ ４ ． ６ ５ ａ ｒ ｇ 、 ３ ２ ７ ． ５ ８ ａ ｒ ｇ ， 均 大 于其 他 条件 所 得 结果。 ２ ． ２总木 脂素 含量 的测 量 ３ 五 昧子 总木 脂素 标准 曲线 ２ ． ２ ． １ 显 色原 理 ： 精 密 称取 ３ ． １ ２ ｍ ｇ 古 蓬 香 素标 准 品 ， 置于 ２ ５ ｍ ｌ 容 以古 蓬香 素含量 （ ａ ｒ ｇ ） 为横 坐标 ， 吸光 度为 纵坐 标作 图 。得 线 量瓶 中， 加 入 少量 甲醇 溶 解 ， 超声 ５ ａ ｒ ｉ ｎ ， 以 甲醇 稀 释 至 刻 度 ， 摇 性 方 程 ｖ ＝ １ ５ ． ３ ７ １ ｘ ＋ ０ ． ０ ５ ２ ８ Ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ２ ３ ．古 蓬 香 素 在 ０ ． ０ １ ２ ４ ８ ～ 匀， 作 为对 照 品溶 液 。（ 每１ ｍ ］ 含 古蓬 香素标 准 品 Ｏ ． １ ２ ｍ ｇ ） ０ ． ０ ６ ２ ４ ｍ ｇ 范 同 内呈 线性 关 系 。 ２ ． ２ ． ２ 供 试 品溶 液 的制 备 ： 将“ ２ ． １ ” 中各 条件 下 所 得 提取 液 分 别 进 ４ 讨 论 行 适 当浓 缩 ， 移人 １ ０ ０ ｍ ｌ 容量 瓶 ， 用 无水 乙醇稀 释 至 刻度 ， 摇匀 。 近年来 ，已有较多报 道利用 乙醇 回流提 取法从 五味 子 中提 取 精 密 吸取 ｌ ｍ ｌ 移入 １ ０ ｍ ｌ 容量瓶中， 稀 释 至刻 度 ， 摇匀 ， 作 为 供 试 总木脂 素 ， 但是各 文 献选择 的 提取 次数 、 溶剂倍 量 、 提取 时 间均 不 品溶 液 。 样， 所得 的提取 效果也 各不相 同 。本实验 基于这样 的考 虑 ， 查 阅 ２ ． ２ ． ３ 线 性 关 系 的 确定 ：分 别 精 密 吸 取 上述 对 照 液 ０ ． ０ 、 ０ ． １ 、 ０ ． ２ 、 各 文献 所用 的提 取 次数 、 溶 剂倍 量 、 提取 时间 ， 选择 出三 个代 表 性 ０ ＿ ３ 、 ０ ． ４ 、 ０ ． ５ ｍ ｌ ， 水 浴 挥 干溶 剂 ， 依次加入 １ ０ ％变 色 酸溶 液 Ｏ ． ５ ｍ ｌ 、 水 平进行 正交试 验 ， 从而 得到在 本实验室 条件下 的最佳提取 条件 。 浓硫酸 ３ ． ０ ｍ ｌ 、 水 １ ． ５ ｍ ｌ ， 摇匀 。 水 浴 加热 ３ ０ 分钟 。以 １ 号 为空 白 ， 参考 文献 照分 光光 度法 在 ５ ７ ０ ｎ ｍ 波长 处测 定 吸收 度 ， 以浓 度 为横 坐 标 ， 吸 【 １ 】 倪立 东， 陈延 西． 北五味子有效组分的研究进展Ⅲ． 河南 中医， 光 度 为纵 坐标 ， 绘 制标 准 曲线 。 ２ ０ ０ ５ ， ２ ５ （ ６ ） ： ８ ５ — ８ ７ ．
５ ０
内蒙古 中医药
五 味子总木 脂 素 的提取 与分 离
余 忠
摘 要： 本 文通过 正 交设 计 实验 得 出结论 ： 在 本 实验 室的条件 下五味 子 总木脂 素的 最佳提 取 及 分 离条件 ， 分 离后 五味 子 总木 脂 素纯 度 有所提 高。对 于五味 子 资源 的综合 开发 利 用有一 定参 考价 值 。 关键词 ： 五味 子 ； 木脂 素 ； 大孔树 脂
一
２ ． ２ ． ３ ． １ 大孔 树 脂水洗 终 点的确 定 ： 对 已上样 的大 孔树 脂 柱用 蒸馏 水 进行 洗脱 ， 流 速为 ２ Ｂ ｖ ／ ｈ 。 并 用硫 酸一 苯酚 法对 流 出液 测 量 中性 糖 含 量 。结 果 显 示 ， Ａ Ｂ 一 ８用蒸 馏 水 １ １ ０ ｍ ｌ 洗脱 ， Ｄ １ ０ １ 用 蒸馏 水 ８ Ｏ ａ ｒ ｌ 洗脱， 最 终 流出液 中性 糖浓 度低 于 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ ｍ ｌ ， 可认 为 水溶 性 杂 质 洗 脱 完 全 。故 认 为 Ａ Ｂ 一 ８水 洗 终 点 为 １ １ ０ ｍ ｌ（ 约为 ７ Ｂ Ｖ） ， Ｄ１ ０ １ 水洗终 点 为 ８ ０ ｍ ｌ （ 约为 ５ Ｂ Ｖ） 。 ２ ． ２ ， ３ ． ２ 大孑 Ｌ 树 脂动 态洗 脱 曲线 的绘 制 ： 对 已用 蒸馏 水洗 脱过 的 大 孑 Ｌ 树脂 柱用 ３ ０ ％、 ６ ０ ％、 ９ ０ ％的乙醇 以流 速 １ ． ５ Ｂ Ｖ ／ ｈ各洗脱 １ １ ０ ｍ ｌ ， 每１ ０ ｍ ｌ 收集 一份 。测定 总木 脂素 浓度 ， 绘 制动 态洗 脱 曲线 ， 选 择 最 佳洗 脱 溶剂 。 ２ ． ２ ． ３ ． ３ 最 佳洗 脱条 件考察 ：分 别称 取 Ａ Ｂ 一 ８ 、 Ｄ １ ０ Ｉ 大孑 Ｌ 树脂 １ ０ ｇ ， 各取 ６ ０ ｍ ｌ 上柱液以 １ Ｂ Ｖ ／ ｈ上 样 ，分 别 用 １ １ ０ ｍ ｌ 、 ８ ０ ｍ ｌ 蒸 馏 水 以 １ ． ５ Ｂ Ｖ ／ ｈ 洗 去杂 质 ，大 孑 Ｌ 树 脂动 态洗 脱 曲线显 示 ， ６ ０ ％乙醇 ｌ １ ０ ｍ ｌ 洗 脱不 完 全 ， 故 各用 ６ ０ ％乙醇 １ ２ ０ ｍ ｌ 以２ Ｂ Ｖ ／ ｈ进行 洗脱 。洗脱 液
中 图分类 号 ： Ｒ ２ ８ ４ 文献标 识码 ： Ｂ 文章 编号 ： １ ０ ０ ６ — ０ ９ ７ ９ （ ２ ０ １ ３ ） ３ ５ — ０ ０ ５ ０ 一 ｏ ｌ
本实 验将 在前 人 的基础 上 ， 设 计 正交 实验考 察 五味 子 总木 脂 素 乙醇提 取 最佳 条件 ，通过 大孑 Ｌ 树脂 静态 吸 附一 洗 脱 实验 和动态 吸 附一 洗 脱 试验 考察 大孑 Ｌ 树脂 分离 总木 脂索 的最佳 条 件 ，以期望 得 到总 木脂 素纯 度较 高的 提纯 物 。
ｌ 实验 材料 、 试 剂与 仪器
北五 味子 ； 古 蓬香素 标准 品 ； 乙醇 、 变色 酸 、 硫酸 、 盐酸、 氢氧 化
钠均 为分析 纯 ； Ａ Ｂ 一 ８ 型大孑 Ｌ 树脂 ； ＤＩ Ｏ １ 型 大孔树 脂。电子天平 ； 旋
转蒸 发仪 ； Ｔ Ｕ 一 １ ９ ０ １ 双光束 紫外可见分 光光度 计 ； 恒温 干燥箱 。