果脯中苯甲酸含量的测定

果脯中苯甲酸含量的测定紫外分光光度法

高效液相色谱法

酸碱滴定法测定苯甲酸钠

荧光光谱标准加人法测定苯甲酸钠的含量

电势滴定法测定苯甲酸钠含量

高效离子色谱法测定辣椒红色素中苯甲酸的含量

气相色谱法测定苯甲酸的含量

一、紫外分光光度法

一、实验目的

１、掌握紫外分光光度计的使用方法及正确操作方法；

２、了解不同果脯中苯甲酸测定的处理方法及测定方法。

二、实验原理

苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。通过A-λ实验找到苯甲酸最大吸收锋位置。

另一方面，苯甲酸的钠盐在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。

三、仪器和试剂

7500或240型紫外-可见分光光度计，分析

天平，研钵，容量瓶（50mL若干），抽滤瓶，布氏漏斗，吸量管若干。

苯甲酸标准储备液(0.5000mg/mL):准确称取0.5000g苯甲酸(AR)溶于少量0.01mol/L的NaOH中，然后用上述NaOH溶液定容于1000mL容量瓶中即得。

0.01mol/L的NaOH溶液。

四、实验内容

1.制作标准溶液系列

取5mL标准储备液于50mL容量瓶中，用

0.01MNaOH溶液定容。另取6只50mL容量瓶（标号0~5）分别移取稀释液0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于容量瓶中，定容。

2.样品处理

称取待测果脯样品10g（记录实际称取量）置于研钵中，加入适量0.01M的NaOH，充分研磨。抽滤，注意用氢氧化钠溶液洗涤研钵和布氏漏斗。将滤液收集于同一50mL容量瓶中，定容。从中取2.5mL于50mL容量瓶中，定容。

（如果实验中发现浓度不合适，可另取不同体积样品液稀释）

3.制作A-λ曲线

以0号样为参比，对3号样进行扫描，波长范

围210~240nm，找出最大吸收波长。

4.标准曲线制作与未知样测定

以0号样为参比，在找到的最大吸收波长下测定标准溶液系列的吸光度，最后测定未知液的吸光度。五、计算

制作标准曲线并计算

二、高效液相色谱法

一、实验目的

1.学习高效液相色谱仪的操作

2.了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理

3.掌握高效液相色谱法进行定性定量分析的基本方法

二、实验原理

将浓度不同的苯甲酸标准溶液与未知样品在相同色谱条件下进行分离试验，分别测得它们在色谱图上的保留时间tR 和峰面积A，可直接用tR进行定性分析，并以峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（外标法）测定食品中的苯甲酸。

三、仪器试剂

Agilent1100高效液相色谱仪（带紫外检测器）；色谱柱(Kromasil C18,5 um*150mm*4.6mm),平头微量注射器；

分析天平(精度0.1mg)、料理机。

甲醇(SG)、乙酸铵(AR)、苯甲酸标准品(≥99%,国家标准物

质中心)

实验用水为超纯水

甲醇：经滤膜0.45um过滤；

乙酸铵溶液(0.02mol/l):准确称取1.54g乙酸铵，加入

1000mlH2O溶解，并经0.45um滤膜过滤；

NaHCO3溶液(20g/L):称取2g NaHCO3,加水100ml,摇匀；苯甲酸标准储备液（1mg/ml）：准确称取100mg苯甲酸，加NaHCO3溶液（20g/L）5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶并定容；

流动相：甲醇:乙酸铵溶液(0.02mol/l)=5:95,流动相进入色谱前，用超声波发生装置脱气10min；

待测试样：果脯样品。

四、实验内容

（1）苯甲酸标准使用液（100ug/ml）的配置：取储备液10ml,放入100ml容量瓶，加水稀释至刻度摇匀，并经0.45um滤膜过滤。

（2）标准溶液：分别精密量取5、10 、20、40 mL 的标准使用液至50mL 容量瓶中，用超纯水定容，得10 、20 40 、80 、100 ug/mL 的系列标准溶液.

（3）样品处理：准确称取0.05g果脯置于100ml洁净干燥的烧杯中，用20ml蒸馏水煮沸10min，冷却后，将上层清液经0.45um滤膜过滤于50ml容量瓶，残渣按此步骤再重复

一次，将清液全部转移至容量瓶，并定容至刻度。

4）色谱仪器条件：泵的流速1.0ml/min;检测波长230nm,进样量20ul，柱温室温。

（5）待仪器基线稳定后，由低浓度至高浓度进苯甲酸标准液，记录不同浓度下保留时间及峰高、峰面积；再测定果脯试液的色谱图，分别记录三个样品的保留时间及峰高、峰面积。

五、数据处理

（1）以标样的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

（2）根据保留时间确定样品的中的苯甲酸的色谱峰。（3）根据求取样品中苯甲酸的浓度。

三、酸碱滴定法测定苯甲酸钠（应该会有其他物质干扰，具体量也不好确定）

一、实验原理：

试样中加入饱和氯化钠溶液，在碱性条件下进行萃取，分离出蛋白质、脂肪等，然后酸化，用乙醚提取试样中的苯甲酸，再将乙醚蒸去，溶于中性醚醇混合液中，最后以标准碱液滴定。

二、仪器和试剂：

中性乙醇

0.05mol/L 氢氧化钠标准滴定溶液

Nacl、无水乙醚、1：1盐酸、无水硫酸钠、1%酚酞指示剂电子天平、分液漏斗、滴定装置、蒸馏装置

三、实验内容

1、样品处理：称取待测果脯样品100g（记录实际称取量）置于研钵中，加入适量0.01M的NaOH，充分研磨。抽滤，注意用氢氧化钠溶液洗涤研钵和布氏漏斗。将滤液收集于同一50mL容量瓶中，加AR NaCl直到不溶解为止（降低苯甲酸在水中溶解度，以减少在提取及水洗过程中的损失），用10%NaOH调为碱性（这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）→用饱和NaCl定容50ml→静置2小时→过滤→弃去初液→收集滤液

2、氢氧化钠的标定：

用邻苯二甲酸氢钾标定

准确分别称取邻苯二甲酸氢钾0、2±0、01g 3份与锥形瓶中，酚酞作为指示剂，用配好的氢氧化钠分别滴定，直至溶液变为红色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠的体积，计算取平均值

3、提取及滴定：吸滤液100ml→于500ml分液漏斗→加1

︰1 HCl 4ml酸化→用50ml乙醚分三次提取→每次振荡不能太激烈以防乳化→合并醚层→连接蒸馏装置→回收乙醚（50℃水浴）→用20ml中性醚醇+50ml水溶解残渣→加2滴酚酞→用0.05mol/L NaOH滴出微红色（同时要求做空白