生物芯片及其在食品检测中的应用

生物芯片及其在食品检测中的应用

生物芯片技术及其在食品检测中的应用

摘要：生物芯片技术（包括基因芯片，蛋白芯片等）以及相应的生物信息学工具，正开始从医学应用领域逐渐应用于其他新的领域，比如食品安全领域。本文主要介绍了目前的生物芯片在食品安全领域相关检测方面的最新应用情况。

关键词：生物芯片；食品检测；应用

食品安全问题是一个全球性的问题。据世界卫生组织估计，仅在亚太地区每年就有70 多万人死于食物中毒。近年来，世界上相继发生的诸多危及人身健康的畜禽及其制品的食品安全事件，不仅直接关系到人类的健康生存，也严重影响到经济和社会的发展。在肉制品的安全事件中，食源性疾病占有相当的数目和种类，其特点是易爆发、传染性强、流行范围广、危害严重。但由于检测技术的滞后，现行的食品卫生标准不能对食源性病毒进行有效的检测。而生物芯片应用于食源性病毒的检测，可大大提高检测的灵敏度和专一性，缩短了检测所需的时间，并为食源性病毒检测方法的完善、标准化及实际应用带来了希望。民以食为天，食以安为先。充足、营养和安全的食品是人类生存的基本需要。生物芯

片在生物安全和食品安全检测方面的应用刚刚开始，但已显示出优势。

1 生物芯片技术概述

1.1 生物芯片

生物芯片的最初构想来源于Affymetrix公司的前身Affy -max公司里的一次即兴的建议。由Fodor组织半导体专家和分子生物学专家共同研制出来的。1991年利用光蚀刻光导合成多肽，1993年设计了一种寡核苷酸生物芯片，1994年又提出用光导合成的寡核苷酸芯片进行DNA 序列快速分析，到 1996年制造出世界上第一块商业化的生物芯片[1]。

生物芯片是根据生物大分子间具有特异相互识别的能力，利用微电子、微机械、微加工技术,在玻璃、硅片或尼龙膜等各种固体支持物上构建的微型生化分析系统，通过计算机对反应信号搜集处理，可对细胞、糖、脂、核酸、蛋白质以及其它小分子物质进行准确、快速、大信息量的检测。生物芯片使样品检测、分析过程高通量、连续化、集成化、微型化、自动化。

1.2 生物芯片分类

芯片种类较多，根据芯片上的固定的探针不

同，生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片；另外根据原理还可分为元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片；以其片基的不同分为无机片基和有机合成物片基;按其应用的不同可以分为表达谱芯片、诊断芯片、芯片；按其结构的不同可以分DNA阵列和寡核苷酸芯片。其中应用最多，应用范围最广的生物芯片是基因芯片。

1.2．1 基因芯片

又称DNA微探针阵列(Microarray)，是生物芯片的一种。基因芯片产生的基础是分子生物学、微电子技术、高分子化学合成技术、激光技术和计算机科学的发展及其有机结合[2]。基因芯片原理根据核酸的分子杂交衍生而来，即应用固体基因表面上集成已知序列的基因探针对未知序列的核酸序列进行杂交检测。样品与探针杂交后，再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描。算机系统对每一探针上的荧光信号作比较和杂交探针位置的检测,分析得出结果，实现基因信息的快速检测[3]。其检测的步骤如下[4]:样品处理、扩增、然后标记的靶基因与固化处理的基因芯片进行核酸杂交、洗涤、检测信息、数

据处理、综合信息处理。基因芯片技术的主要特点为：技术操作简单、自动化程度高、序列数量大、检测效率高、应用范围广、成本相对低。1.2.2 蛋白质芯片蛋白质芯片

又称为蛋白质微阵列 (proteinmicroarray)是大量的蛋白质分子(例如抗体或抗原分子)或肽链有序排列固定在载体薄片上形成的。蛋白质或肽能特异性地与配体分子(如抗体或抗原)结合的原理，芯片上的蛋白质分子或肽链与样品中的相关成分发生反应,然后加入标记分子，并用阅读仪分析和存储结果，这就是蛋白质芯片的工作原理[5]。与传统的研究方法相比有以下特点：( 1)蛋白芯片是一种高通量的研究方法,能在一次实验中提供大量的信息,使我们能够全而、准确地研究蛋白表达谱；( 2)灵敏度高，它可以检测出蛋白样品中微量蛋白的存在，检测水平已达ng级； ( 3)所需的样品量极少。

2 生物芯片在食品检测中的应用

2.1 在转基因食品检测中的应用

就目前转基因食品检测中常用的ELIS和PCR技术而言，最大的缺点是检测范围窄,效率低,无法高通大规模地同时检测多种样品，尤其

是对转基因背景一无所知的情况下，对各种候选待检基因序列或蛋白的逐一筛查几乎是不可能的。生物芯片具有高通量、微型化、自动化和信息化的特点,是转基因食品检测的方向。现已广泛应用于大豆、玉米、油菜、棉花等农作物样品的检测。

在农业上,基因芯片筛选发生基因突变的食品原料作物；寻找高产、抗虫、抗病、经济价值高的作物，进行农药的筛选；检测各种作物的基因组；通过比较差异表达寻找新基因。

许小丹等[6]制备了检测及鉴定转基因大豆的寡核苷酸芯片。该芯片探针特异性好、灵敏度高，检测极限为0.1ng(DNA)，从而消除假阴性概率，灵敏度优于凝胶电泳检测。

上海博星基因芯片研究所得研究人员采用基因芯片对大豆、玉米、油菜、棉花等转基因农作物进行检测，该芯片不仅可以了解4中农作物的转基因背景，还可以适应不同样品品种的不同生物学背景[7]。根据基因芯片技术的特点，仅靠一个实验就能筛选出大量的各种转基因食品。因此，生物芯片可以传统方法的不足，是食品安全检测最具潜力的技术之一，是转基因食品检测的

方向。

2.2 在识别不明肉类中的应用

2004年3月法国“biomerieux”公司推出了一种能够识别不明肉类的新型基因芯片[8]。名为“食品专家-ID”检测方法，包括精心选自33种脊椎动物的88000个探针，这些动物包括鸵鸟、非洲鳗和猫，人类 DNA也包括在内、不过主要作为“对照”。芯片由affymetrix公司制造，该芯片将用于肉类产品的品质证明，检测的结果是给出一张“身份识别卡”，在上面开列出所有检测到的物种名称。这种芯片不但能揭示出标价100美元的鹅肝酱是否掺入猪肝等廉价替代品，而且可以检测出吃了脊椎动物副产品的动物的肉制品中所携带的病毒蛋白，如疯牛病等，还能用于确认某些指标要求严格的食品是否达标。

2.3 在细菌检测方面的应用

细菌污染是食品最常见的污染。因此，食品中病原性细菌检测是食品卫生安全检测中一个重要的方面。细菌对食品污染，不但会造成巨大的经济损失，致病细菌的存在还会严重威胁人类的健康[8]。传统的细菌培养需要复杂的营养条