心律宁片剂中氧化苦参碱的萃取及其含量测定的研究

心律宁片剂中氧化苦参碱的萃取及其含量测定的研究采用超临界CO2流体法提取苦参中的氧化苦参碱，以0.1mL/L氨水作碱化

剂，在45℃、压力42MPa的条件下萃取2h，并用高效液相色谱法对萃取液中的氧化苦参碱进行定量分析，结果表明该方法可靠，精密度高，同时也为其他生物碱利用超临界CO2流体萃取法的萃取及定量建立了一种快速、简便、有效的方法。

[Abstract] Extract oxymatrine from Alkaloids Sophora Flavescen by fluid extraction CO2 beyond limit method with 0.1mL/L ammonia as alkalis at 45℃under the condition of pressure 42MPa for two hours.Carry on quantitative analysis for oxymatrine alkalis in extracting liquid by efficiently liquid chromatography. Result showed the method is credible and sophistication is high，also making use of fluid extraction CO2 beyond limit method to extract for the other alkaloids and fixed amount built up a kind of fast，simple and effective method.

[Key words] Fluid extraction CO2 beyond limit method；Sophora flavescens；Oxymatrine；Efficiently liquid chromatography

苦参为豆科植物苦参的干燥的根，具有清热燥湿、杀虫止痒，利尿等功能。其有效成分生物碱含量较高，主要为：苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱等20余种。大多数单碱对多种类生物（如真菌、细菌、线虫、昆虫、哺乳动物包括人类）有多方面的生物活性。尤其近年来发现的抗癌而又增强免疫力等独特的药理作用为医药界所瞩目。

在超临界CO2流体萃取（CO2-SFE）中，由于处于超临界状态下的CO2流体兼顾液体及气体的传质特点，且超临界CO2流体萃取的特性和极性还可以通过调节萃取压力、温度、加入不同品种的夹带剂等因素方便的调节，从而使超临界CO2流体萃取显示了快速、提取效率高、选择性好等特点[1]，中药中的生物碱等极性偏大，加大压力后，CO2流体的密度和解电常数增大，极性增强：加入夹带剂也可有效地增大流体的溶解性能，促进成分的溶出[2]。本实验用76%的乙醇作为夹带剂对苦参中的氧化苦参碱进行提取。并用高效液相色谱法，以YWG-NH2为固定相，乙腈-无水乙醇-磷酸水溶液为流动相，测定氧化苦参碱的含量，现将实验结果介绍如下。

1 仪器和试剂

FY221-50-60型超临界萃取装置（哈尔滨市天宇科技开发有限公司）；美国WATERS高效液相色谱仪；600高压双泵；2996二极管阵列检测器；7725i定量进样阀；Millenium 32系统软件。

氧化苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；中药材由黑龙江省绥化市药品检验所提供；检定乙腈为HPLC级；水为纯化水；二氧化碳（99.99%）

由市化工厂提供；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：YWG-NH2，250 mm×4.6 mm，10μm，流动相：乙腈∶无水乙醇∶水（80∶10∶10，磷酸调pH=2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：220 nm；用外标法检测。

2.2 超临界CO2流体萃取的条件

2.2.1 碱化试剂的选择生物碱在植物中多数以盐的形式存在，若直接用极性较弱的溶剂提取，往往提取不完全，所以在提取前需先碱化，使之全部转化为游离碱，碱化剂可采用Ca（OH）2、三乙胺或氨水，由于Ca（OH）2不易溶于水，且易产生杂质，而三乙胺对萃取槽的腐蚀性也较大，故本实验采用氨水作为碱化剂，以投料量的二倍量浸泡过夜。

2.2.2 萃取压力的选择[3] 物质处于其临界温度（Tc）、临界压力（Pc）以上时，成为单一相态，称为超临界流体。所以考察压力对提取率的影响，必须选择临界压力以上的压力。在超临界流体中，压力越大，则流体的密度越大，萃取的能力越强，但对于杂质的萃取量也随之增加。CO2的临界压力为7.534 MPa。而在提取生物碱时，35 MPa和42 MPa样品的提取率间有非常显著的差异，但随提取压力的增加，杂质的提取率也有增加，所以选择42 MPa为本实验的萃取压力。

2.3 氧化苦参碱的提取

苦参干粉末投料300 g，加0.1 mL/L氨水600 mL浸泡过夜，次日投入萃取釜中，于45℃、CO2流量0.70 nm3/h连续萃取。萃取过程中分3次加入夹带剂约200 mL，1.5 h后第1次收集萃取液，以后每隔0.5 h收集一次，直到无萃取液产生。整个萃取过程约为2 h，收集萃取液约100 mL，其上层为浅黄至棕黄色透明液体，底部有少许棕黄色沉淀。

2.4 萃取液中苦参碱及氧化苦参碱的总含量测定

2.4.1 线性范围贮备液制备：精密称取氧化苦参碱对照品2 mg，置25 mL 量瓶中，用无水乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀备用。线性范围：精密量取上述贮备液0.25、0.50、1.50、2.50、

3.50、

4.50 mL置10 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，按上述色谱条件进样10μL，记录峰面积，以对照液浓度（C）与其相应峰面积（A）A=277762.0C-10870.0，r=0.9994，线性范围为0.4～0.5μg/mL。

2.4.2 精密度实验取线性方程中1、2、4号对照品，分别进样5μL，测定其峰面积，计算RSD（n=5）分别为0.9%、1.1%、1.7%。