免疫荧光技术的临床应用优秀课件

间接免疫荧光法检测的特点
• 特异性高：阳性与阴性标本的荧光强度差别明显。每种
已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型。
• 基质中抗原谱完整，可检测多种抗体，并且检出 率高。
• 可在一种生物基质上同时检测多种抗不同生化特 性抗原的抗体。
• 当酶免试剂所需要的抗原难以制备或无法获得时， 可选择间接免疫荧光法。
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关， 引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮
核膜型
与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
斑点型
与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体
核仁型
多见于硬皮病
着丝点型
多见于CREST综合征
抗核抗体谱（ANAs）
• 项目包含nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小 体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMA M2，共15项。
• 自身抗体检测的标准和最经典的实验方法是间接免疫荧光 检测法（IFA)。
• 需要荧光显微镜。 • 操作者需要一定的专业知识。 • 操作者需要一定的工作经验。
显微镜下的结果判断为综合 知识的体现，到目前为止， 尚没有任何仪器可取代人工 读片。
国内现状
✓自身抗体的测定不普遍 ✓欠规范 ✓对其意义了解尚少 ✓缺乏研究
Tankertanker Design
免疫荧光技术的临床应用优秀课件
随着人们生活水平和意识的不断提 高，各种因素的影响，近年来每31个人 中就有一个人在受到自身免疫性疾病的 折磨，临床表现复杂，不易早期发现。
自身免疫性疾病涉及 多学科
（风湿免疫科、内分泌科、 血液科、妇产科、皮肤科、 肾病科、消化科等等）
抗核抗体（ANA）
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1：100为阳性 ②常见核型——5种
不同核型的临床意义不同
ANA常见五种核型及临床意义
核膜型——与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
均质型——与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮
斑点型——与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体 核仁型——多见于硬皮病 着丝点型——多见于CREST综合征
• 鉴于自身免疫性疾病的共同特征，通过检测自身抗体可以 有效准确的诊断自身免疫性疾病，为临床提供高效准确的 诊断依据。
自身抗体检测的开展，不仅让我院在自身免疫性疾病 诊断治疗上有很大的提高，还可为陇东南地区400万人口提 供更准确、更专业的自身免疫性疾病诊断服务。节省患者去 外院检测诊断所花费的时间和费用，使我院在整个地区具有 一定的影响力，也会为医院带来可观的经济效益。鉴于此， 我院完全有必要应用间接免疫荧光技术开展自身抗体项目的 检测。
自身免疫性疾病涉及多病种
(混合结缔组织病、系统性红斑狼疮、磷脂综合症、原发性系 统性血管炎、韦格纳肉芽肿、坏死性新月体肾小球肾炎、显 微多动脉炎、习惯性流产、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎、 原发性胆汁性肝硬化、原发性胆管炎等等）
自身免疫性疾病的共同特征：
• 患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋 巴细胞存在，患者组织器官的病理特征为免疫炎 症，用相同抗原在某些动物实验中可复制出相似 的疾病模型，多数病因不明，疾病有重叠现象， 即一个病人可同时患一种以上自身免疫病，病程 一般较长，多迁延为慢性，有遗传倾向。
• 抗nRNP抗体：高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织（MCTD，夏 普综合征）的标志，阳性率为95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关， 在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总 伴有Sm抗体。
• 如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与包 被在固相上的抗原结合。
• 第二步，已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结 合，然后在荧光显微镜下观察结果。
• 阳性标本经系列稀释后可测出其滴度。最适稀释因 子为3.162（10的平方根），这样，每隔一步就出现 一个10的整数倍数（1:10、1:32、1:100、1:320、 1:1000、 1:3200, 1:10000等
97.6 438
抗核抗体（ANA）
定义——以细胞核内物质为抗原的抗体
• ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病 情判断和疗效观察的指标（SLE的筛查抗体）。
• 在非结缔组织病（感染、慢肝、肺纤维化或肿瘤）中也可出现阳性。 • 正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型。 • 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。
目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。
抗核抗体（ANA）
系统性红斑狼疮 • 活动期95－100% • 非活动期80－100% • 药物诱导的红斑狼疮100% • 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征）100% • 类风湿性关节炎20－40% • 进行性系统性硬化症20－50% • 多发性肌炎及皮肌炎85－95% • 干燥综合征30－50% • 慢性活动性肝炎70－80% • 溃疡性结肠炎30－40% • 其它风湿病26% • 正常人5-10%
双链DNA 角蛋白抗体（AKA） 环瓜氨酸肽（CCP）抗体
肝抗原谱9项
蛋白酶3 （PR3）、髓过氧化物酶 （MPO）、肾小球肾炎
抗中性粒细胞浆抗体wk.baidu.com过敏原特应性组合
试剂价格 18.9
180
22 29.5
39 176
78
38 300
收费标准 43.8
329.6
19.5 19.5 78.2 221.4
146.4
1
间接免疫荧 光法（IFA Indirect Fluorescen t Assay ）
2
酶联免疫吸 附法 （ELISA）
3
免疫印迹法 （IB）
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4
其它：IDA、 RIA等
间接免疫荧光法实验原理
• 细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均 可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。
自身抗体种类繁多
常见自身抗体： • 抗核抗体谱(ANAS)检测 • 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）检测 • 类风湿因子和抗CCP抗体 • 自身免疫性肝病相关自身抗体检测
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检验科
拟开展自身抗体检测 项目介绍及相关自身免疫性 疾病
检验项目
抗核抗体 （ANA）
ANA谱3