第二章__微生物的纯种分离与培养技术.
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
每克干土含菌数= 同一稀释度的平均菌落数 稀释倍数 1 土壤含水量%
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
表2-2 样品中四大类微生物的菌落数
采样 日期
稀 释
采样 地点
度
菌
落
类 别 数
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
平均每克样品所 含微生物数
细 菌 放线菌 酵母菌 霉 菌
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
（一）系列稀释平板法 1. 取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层 约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土 壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除 去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封 好袋口，并记录取样地点、环境及日期。同时取10～15g，称 重后经105℃烘干8h，置干燥器中冷却后再次称重，计算含水 量。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保 存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌种的变化。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
（二）涂布法分离（酵母菌定量分离用） 依前法向无菌培养皿中倾倒已融化并冷却至45～50℃的 马铃薯葡萄糖培养基，待平板冷凝后，用无菌移液管分别吸 取三个不同稀释度菌悬液0.1mL，依次滴加于相应编号已制备 好的马铃薯葡萄糖培养基平板上，右手持无菌玻璃涂棒，左 手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持玻 璃涂棒于培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布
的相应培养基，见图2-2，轻轻地摇动并旋转平皿，使菌悬液
与培养基混合均匀，水平静置待凝，倒置于相应温度的培养 箱中培养，2～5天后，观察菌落情况及计数。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
1.包装纸套中取出无菌移液 管；2.安装橡皮头，勿用手 指触摸移液管；3.火焰旁取 出土壤悬浮液；4.灼烧试管 口及移液管吸液口；5.在火 焰旁对试管中土壤悬浮液进 行稀释；6.用手掌敲打试管， 混匀土壤稀释液；7.从最小 稀释度开始，将稀释液加入 无菌培养皿中；8.将融化冷 凉至45～50℃培养基倒入培 养皿内；9.用毕的移液管装 入废弃物缸中浸泡消毒后灭 菌洗涤
微生物实验技术
第二章
微生物的纯种分离及培养技术
微生物的纯种分离及培养技术
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母 菌及霉菌的分离与纯化
实验2-2
实验2-3
化能自养微生物的分离与纯化
从沼液中分离产甲烷细菌
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物 的技术。 2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养
细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培
养时间。 4. 学习平板菌落计数法。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
二、实wenku.baidu.com原理
将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或
孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温 度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。 要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生 物生长繁殖的最适培养基及培养条件。微生物四大类菌的分 离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
图2-1 稀释分离过程示意图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
3. 接种 分离不同的微生物类群采用不同的稀释度，参考表2-1进 行选择。 从稀至浓分别吸取各浓度稀释液1mL于各平皿中（每个稀 释度每种做2-3个培养皿，并注意做好浓度及培养基种类标 记），同时做空白对照，倒入熔化后冷却至45℃～50℃左右
28
5～7
土样
霉菌
稀释分离
10-2，10-3，104
马丁氏琼脂
28～30
3～5
面肥 或土样 细菌分离平板
酵母菌
稀释分离
10-4，10-5，106
马铃薯葡萄糖
28～30
2～3
细菌单菌落
划线分离
10-2
牛肉膏蛋白胨
30～37
1～2
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
三、实验材料 1. 菌源土样 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高 氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见 附录Ⅲ。 3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或 95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。4.5 mL无菌水试管 (每人5～7支)。 4. 其他物品 无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂 棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
2. 制备土壤稀释液 称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中，充分振荡，此 即为10-2浓度的菌悬液。用无菌移液管吸取悬液0.5mL于 4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3 浓度。同样方法，依次稀释到10-7。稀释过程需在无菌室或 无菌操作条件下进行，稀释过程见图2-1。
图2-2 稀释分离无菌操作图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
4. 培养 冷凝后，将平板倒置于在各自适宜的温度下培养，培养 一定时间后观察。 5. 计数 选菌落单个分散、菌落数适量且各平行皿数量接近的稀 释度的平皿计数。通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之 间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换算成 每克干土所含菌数，记录于表2-2。
扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划
破(图2-3)。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
图2-3 涂布操作示意图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求
样品来源 分离对象 分离方法 稀释度 培养基名称 培养温度 /℃ 30～37 培养时间/d
土样
细菌
稀释分离
10-5，10-6，107
牛肉膏蛋白胨
1～2
土样
放线菌
稀释分离
10-3，10-4，105
高氏1号
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
表2-2 样品中四大类微生物的菌落数
采样 日期
稀 释
采样 地点
度
菌
落
类 别 数
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
平均每克样品所 含微生物数
细 菌 放线菌 酵母菌 霉 菌
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
（一）系列稀释平板法 1. 取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层 约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土 壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除 去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封 好袋口，并记录取样地点、环境及日期。同时取10～15g，称 重后经105℃烘干8h，置干燥器中冷却后再次称重，计算含水 量。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保 存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌种的变化。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
（二）涂布法分离（酵母菌定量分离用） 依前法向无菌培养皿中倾倒已融化并冷却至45～50℃的 马铃薯葡萄糖培养基，待平板冷凝后，用无菌移液管分别吸 取三个不同稀释度菌悬液0.1mL，依次滴加于相应编号已制备 好的马铃薯葡萄糖培养基平板上，右手持无菌玻璃涂棒，左 手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持玻 璃涂棒于培养皿平板表面将菌液自平板中央均匀向四周涂布
的相应培养基，见图2-2，轻轻地摇动并旋转平皿，使菌悬液
与培养基混合均匀，水平静置待凝，倒置于相应温度的培养 箱中培养，2～5天后，观察菌落情况及计数。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
1.包装纸套中取出无菌移液 管；2.安装橡皮头，勿用手 指触摸移液管；3.火焰旁取 出土壤悬浮液；4.灼烧试管 口及移液管吸液口；5.在火 焰旁对试管中土壤悬浮液进 行稀释；6.用手掌敲打试管， 混匀土壤稀释液；7.从最小 稀释度开始，将稀释液加入 无菌培养皿中；8.将融化冷 凉至45～50℃培养基倒入培 养皿内；9.用毕的移液管装 入废弃物缸中浸泡消毒后灭 菌洗涤
微生物实验技术
第二章
微生物的纯种分离及培养技术
微生物的纯种分离及培养技术
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母 菌及霉菌的分离与纯化
实验2-2
实验2-3
化能自养微生物的分离与纯化
从沼液中分离产甲烷细菌
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物 的技术。 2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养
细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培
养时间。 4. 学习平板菌落计数法。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
二、实wenku.baidu.com原理
将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或
孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温 度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。 要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生 物生长繁殖的最适培养基及培养条件。微生物四大类菌的分 离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
图2-1 稀释分离过程示意图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
3. 接种 分离不同的微生物类群采用不同的稀释度，参考表2-1进 行选择。 从稀至浓分别吸取各浓度稀释液1mL于各平皿中（每个稀 释度每种做2-3个培养皿，并注意做好浓度及培养基种类标 记），同时做空白对照，倒入熔化后冷却至45℃～50℃左右
28
5～7
土样
霉菌
稀释分离
10-2，10-3，104
马丁氏琼脂
28～30
3～5
面肥 或土样 细菌分离平板
酵母菌
稀释分离
10-4，10-5，106
马铃薯葡萄糖
28～30
2～3
细菌单菌落
划线分离
10-2
牛肉膏蛋白胨
30～37
1～2
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
三、实验材料 1. 菌源土样 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高 氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见 附录Ⅲ。 3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或 95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。4.5 mL无菌水试管 (每人5～7支)。 4. 其他物品 无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂 棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
2. 制备土壤稀释液 称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中，充分振荡，此 即为10-2浓度的菌悬液。用无菌移液管吸取悬液0.5mL于 4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3 浓度。同样方法，依次稀释到10-7。稀释过程需在无菌室或 无菌操作条件下进行，稀释过程见图2-1。
图2-2 稀释分离无菌操作图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
4. 培养 冷凝后，将平板倒置于在各自适宜的温度下培养，培养 一定时间后观察。 5. 计数 选菌落单个分散、菌落数适量且各平行皿数量接近的稀 释度的平皿计数。通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之 间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换算成 每克干土所含菌数，记录于表2-2。
扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划
破(图2-3)。
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
图2-3 涂布操作示意图
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
实验2-1
土壤中细菌、放线菌、酵母菌 及霉菌的分离与纯化
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求
样品来源 分离对象 分离方法 稀释度 培养基名称 培养温度 /℃ 30～37 培养时间/d
土样
细菌
稀释分离
10-5，10-6，107
牛肉膏蛋白胨
1～2
土样
放线菌
稀释分离
10-3，10-4，105
高氏1号