应用微生物技术

应用微生物技术期末考试知识点总结

（仅供参考，有不足之处指出完善）

第一章应用微生物技术的基本操作（小题）

湿热灭菌

1）常压蒸汽灭菌：

常压条件下，在不能密闭的容器内灭菌；

不具备高压蒸汽灭菌情况下，或不宜高压蒸煮的物质如糖液，牛奶，明胶；

温度不超过100℃，大多数微生物被杀死，芽孢细菌短时间不能杀死；

常压蒸汽持续灭菌：持续加热6-8h；

间歇灭菌：芽孢100℃短时间内不会失活而微生物营养体半小时即被杀死，芽孢萌发后耐热性消失，通过反复培养反复灭菌；；

2）高压蒸汽灭菌：

穿透力强，效果最好；

常用于培养基的灭菌；

培养基中某些成分分解氧化，酸度增加，pH下降0.2-0.3；

葡萄糖等

营养物质破坏，并形成一引起浑浊和沉淀；葡萄糖溶液分别灭菌，压力尽可能低些；

3 过滤除菌

用于多汁不宜用湿热灭菌的液体物质，如抗生素，血清，糖；发酵工业中无菌空气的制备高温湿热短时灭菌：

不但灭菌时间短，而且培养基成分破坏小；

但温度高，对设备要求严格；120℃；

通气式发酵罐模式图（会画）

空气除菌流程；

1）采气：含菌少的空气：采气口距地面20-30m；郊区；

2）粗过滤器：捕集较大的灰尘颗粒；

3）空压机：能耗大；

4）储气罐：高温除菌；

5）冷却器：空气经压缩机后可达120℃高温，若不冷却会烧焦过滤介质；立式列管式热交换器，沉浸式热交换器，喷淋式热交换器；

6）油水分离器：空气经压缩机后会带上一些润滑油；空气冷却后，水汽凝结成水滴；

7）加热器：空气湿度仍较大；通过加热，降低空气湿度；

8）总过滤器，分过滤器

抢温接种：在固体料灭菌后不要使料温降得过低才接种，而在料温高于培养温度5-10℃接种；可使培养基在接种后得到适宜的温度条件，能迅速生长繁殖，长势好，杂菌不易滋生；适于芽孢菌和产生孢子的菌接种；

堆积起温：大量的固体曲料接种后，不要立即分装曲盘或上帘，先堆积起来，上加覆盖物，防止散热，使培养菌适应新环境条件，逐渐生长旺盛，产生较大热量使料温升高，再分装一定容器中培养；这样可避免一开始培养菌繁殖慢，料温上不去，拖延培养时间，水分蒸发大，杂菌易发展等缺点；

碳源：葡萄糖是最易利用的碳源，速效碳源；但高浓度葡萄糖加速菌体代谢，溶解氧不能满足需要，中间代谢物如乳酸丙酮酸不能完全氧化积累在菌体或培养基中，pH下降，微生物受到抑制；

淀粉为长效碳源，利用较慢，高浓度不会对微生物产生不利影响；

培养基添加的无机盐一般为：磷酸氢二钾和硫酸镁

习题：常压蒸汽灭菌时，为杀死芽孢，可用的方法有和；高压蒸汽灭菌后，培养基的pH一般会；葡萄糖高压灭菌后会受到破坏，解决办法有；微生物工业上，培养基灭菌一般采用温时；培养基中含有机物浓度高时，灭菌时间应；微生物工业上，空气除菌流程包括；固体料要抢温接种，堆积起温，原因是什么；葡萄糖是速效碳源，使用时应注意什么；举例：生理酸性盐，生理碱性盐；绘制通风搅拌式发酵罐结构模式图；

根据微生物类型选择：

牛肉膏蛋白胨培养基（普通肉汤培养基）培养细菌；

高氏一号合成培养基培养放线菌；

麦芽汁培养基部养酵母菌；

查氏合成培养基培养霉菌；

通风发酵池（会画）

发酵工艺：

（1）孢子：斜面；（2）种子：摇床或种子罐；（3）发酵：发酵罐或通风发酵池

第二章微生物肥料概述

（本章需掌握一种微生物肥料如根瘤菌、磷细菌、钾细菌）下面以根瘤菌的生产为例来说：一）菌种的制作

斜面培养

豆芽汁培养基：0.5kg绿豆芽，洗净放入锅里加水1kg煮沸20-30min，过滤即得豆芽汁，加20g琼脂加水0.5kg煮溶，过滤，混合后加糖，加碳酸钙，补水到1000ml，调pH6.8-7.2，121℃30min，趁热取出摆斜面；

28℃2-4d，菌苔长满取出放冰箱保存

二）扩大培养

1 固体扩大培养

用克氏瓶制成斜面，作斜面菌种或液体种子接种，菌苔长满；

2 液体扩大培养

三角瓶摇床培养；

500ml三角瓶装150ml培养基，28℃旋转式摇床230rpm，2-3d，每毫升含菌几十亿到一百亿；做种子；

3 发酵罐培养

培养基，罐体，管道消毒，接种量2-3%，28-30℃，罐压，通气量0.8-1：1，搅拌速度360rpm，培养两天；

三）吸附剂的准备和接种

草炭，含丰富有机质，保水力强，疏松不黏结，通气良好；晒干，打碎，过筛，除去石头，杂草，调pH6.8-7.6，用石灰或过磷酸钙调节；装瓶2/3或3/4，126℃2-3h；

接种：

接种室：接种前一天关闭门窗，用福尔马林熏蒸，紫外灯照射；

加压喷射法装瓶，或装袋（塑料袋用福尔马林熏）；

造粒方式：圆盘分开造粒；

生产流程：

斜面菌种，固体种子培养或液体种子培养，扩大培养；

草炭肥土晒干，粉碎，过筛，灭菌，混合吸附；包装，成品；

剂型：

粉状（草炭，蛭石或其他载体），液体，种衣剂，冻干菌；

第三章微生物与生物农药（重要）

苏云金芽孢杆菌（有大题）

1、苏云金芽孢杆菌（BT）的生理特性：

革兰氏阳性，周生鞭毛或无鞭毛，能形成芽孢的杆状细菌；生长发育过程中，伴随着芽孢的产生会有伴孢晶体产生

好氧，需要足够空气才能生长好，形成芽孢；

对营养要求不高，所需营养为动植物蛋白的衍生物；

温度适应范围广，10-40℃都能生长，28-32℃最合适；温度较高，生长速度快，但产生伴胞晶体的量不一定多；

适于微碱性条件，最适pH7.5，pH8.5还能形成芽孢，pH5不能形成芽孢；

杀虫机理：

苏云金杆菌经昆虫口侵入，在碱性肠道中被水解成毒性短肽，肠道壁细胞被破坏，肠壁穿孔，血液pH由6.8升到8，虫体全身麻痹；芽孢和细菌大量侵入血腔；细菌大量繁殖，产生败