尿素态氮测定方法

原理:

尿素与二乙酰一肟（DAM）产生显色反应，而且在TSA H3PO4和硫酸存在时，可以消除或者减少多种干扰因素，从而准确测定含有20mg L-1的尿素溶液，此方法有很好的灵敏性和稳定性（Page A L, 1982）

仪器：

分光光度计

试剂：

1.乙酸苯汞脂（PMA）溶液：溶解50mg乙酸苯汞（简称PMA, C8H8O2Hg）在1L蒸馏水中。

2.KCL-PMA溶液：溶解1500gKCL在9L水中，再加1LPMA溶液

3.二乙酰一肟（DAM）溶液：溶解2.5g二乙酰一肟（DAM）在100ml水中。

4.氨基硫脲（TSC）溶液：溶解0.25g硫代氨基脲（TSC,C(NH2)nhs）在100ml水中

5.酸试剂：将300ml磷酸（w（H3PO4）=85%）和10ml浓硫酸混合，稀释至500ml，充分

混合。

6.显色剂：加25mlDAM溶液和10mlTSC溶液到500ml的酸试剂中，显色剂现配现用。

7.尿素氮标准溶液(p(N)=100mg L-1)：将0.4288g纯而干燥的尿素溶解在KCL-PMA溶液

ZHONG ,用KCL-PMA溶液在2000ml容量瓶中稀释至刻度，充分混合。

操作步骤：

1.将10g通过2mm筛孔待测土壤加到250ml大口塑料瓶中，加入100ml KCL-PMA溶液，

塞紧瓶盖，在震荡机上震荡1h，滤纸过滤，如果提取液不能立即分析，应储备在冰箱中。

2.尿素态氮测定：用移液管将1ml-10ml的提取液（最高含量为70ug N）加入到50ml容

量瓶中，加入30ml显色剂，摇动容量瓶充分混合，放入热水浴（85度）中，30min后从水浴锅中移出容量瓶，在13度-20度流动水中快速冷却15min，加水定容至50ml。充分混合，然后在分光光度计上用530nm波长比色，用尿素氮作标准曲线，计算出提取液中的尿素氮。

3.标准曲线制作：将10ml标准尿素氮溶液用KCL-PMA在100ml容量瓶中稀释定容。分别

移出0ml 1ml 4ml 7ml 加入到50ml容量瓶中，再加入KCL-PMA溶液至10ml，然后按照上述提取液中尿素氮的测定步骤进行。

结果计算

W（N）=(P×V×ts)/m

W（N）:土壤尿素态氮的质量分数mg kg-1

P:从标准曲线上查的显色液浓度mg L-1

V:显色液体积 ml

Ts;分取倍数

m:土壤质量。