γ干扰素释放试验指南
r干扰素释放试验检测方法培训-2015.11.27
第四步：计数细胞
• 计算公式：
需要的细胞悬液量(ml)=每个培养孔需要加入细胞数量 /(100,000)×需要使用 的细胞稀释液量 (ml)/ 计数的每ml细胞数量 (106 / ml)。
• 所需细胞悬液：
A（ul）=（2.5×0.5/ 细胞计数）×1000µl 补加体积（ul）= 500-A
• 注：手工计数细胞数不得低于50个； 机器计数不得低于2.5×106/mL。
阳性抗原PHA
抗体、显色液
其他试剂
无菌Ficoll淋巴细胞分离液（建议分装使用） 1 × PBS洗液（pH7.2-7.4）： 可配置10×PBS母液，稀释使用，0.22um滤膜过滤灭菌 双蒸水或去离子水（高压灭菌或0.22um滤膜过滤灭菌） 细胞培养液：建议分装使用 RPMI1640培养液 台盼蓝染液（0.4%）或其他细胞染色液
尿沉渣板进行 死细胞不能区分 血细胞计数时应该 计数 用0.4%台酚蓝进行 活细胞的染色 3ml淋巴细胞 PBMCs层分离不 分离液,全血 好 进行1:11640 稀释后注入 3ml淋巴细胞分离 液,全血进行 1:11640 稀释后注入 洗板后加显色液
步骤
加入淋巴细胞分离 液的量在6ml,而且 直接将全血注到淋 巴细胞分离液液面
γ-干扰素释放试验（T-SPOT.TB方法）
技术培训
培训内容
T-SPOT.TB 技术原理
1
2 3 4
T-SPOT.TB 检测试剂、组份
T-SPOT.TB技术操作流程（SOP） T-SPOT.TB操作常见问题
γ-干扰素释放试验（IGRAs）
两种IGRAs用于商业诊断：
T-SPOT®.TB
(ELISPOT-based IGRA) Gold (ELISA-based IGRA)
γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素释放实验的原理γ干扰素（Interferon gamma，IFN-γ）是一种由免疫细胞产生的重要分子信号物质，对机体的免疫反应起着重要的调节作用。
γ干扰素释放实验是一种评估机体免疫功能的常用方法之一，可以检测特定细胞（通常是T细胞）对某种刺激物质引起的γ干扰素分泌反应。
γ干扰素释放实验的原理主要涉及以下几个方面：1. 细胞样本的准备：γ干扰素释放实验通常使用外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）或组织细胞作为细胞样本。
这些细胞样本可以通过静脉采集外周血或组织活检等方式获取。
在实验前，需要对细胞进行处理，如离心、洗涤和培养，以确保细胞的状态良好并有足够的数量。
2. 刺激物质的选择：γ干扰素释放实验中常用的刺激物质主要包括抗原、药物或其他具有免疫刺激性的物质。
抗原可以是病原体的特异性成分，如细菌、病毒或其他微生物产生的蛋白质或多肽。
药物刺激物可以是某些药物对机体免疫系统的直接或间接作用引起的免疫反应。
刺激物质的选择应该与样本来源和实验目的相匹配。
3. 实验方法的选择：γ干扰素释放实验可以通过多种方法进行，如ELISA（酶联免疫吸附测定法），ELISPOT（酶联免疫斑点法），流式细胞术等。
这些方法的选择取决于实验的需要和可用设备的条件。
比较常用的方法是ELISPOT法，该方法可以评估单个细胞生产γ干扰素的能力，形成的斑点数量与细胞产生的γ干扰素水平成正比。
4. 数据分析：γ干扰素释放实验得到的数据需要进行合理的分析和解释。
通常，根据刺激物质和实验目的的不同，可以采用差异分析、统计学方法等对数据进行处理。
数据的分析和解释可以为研究者提供了解细胞免疫功能的信息。
通过γ干扰素释放实验，我们可以了解机体对刺激物质的免疫反应程度和免疫调节功能。
这对于疾病的诊断、药物研发和免疫治疗等方面具有重要意义。
总结回顾：γ干扰素释放实验是一种评估机体免疫功能的方法，通过检测特定细胞对刺激物质引起的γ干扰素分泌反应来评估免疫反应的程度和调节能力。
《结核菌素皮肤试验-y干扰素释放试验两步法的操作技术规范》解读
构#健康管理机构和高等院校等!在严格遵循现有国 S#\阳性#接受免疫抑制剂(个月和与病原学阳
家规范和标准的基础上!共同编制了'结核菌素皮肤 性肺结核患者有密切接触的9岁以下儿童!H"H硬
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γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素释放实验的原理γ干扰素（interferon-gamma，IFN-γ）是一种重要的细胞因子，是T细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）和淋巴细胞等免疫细胞产生的，对免疫应答和抗病毒、抗肿瘤等方面具有重要的生物学功能。
γ干扰素的释放实验可以用来检测患者免疫系统的功能状态，也可以用来评价特定病原体感染、免疫细胞功能、自身免疫疾病等的发生发展和治疗反应。
1. 细胞治疗法的原理：γ干扰素释放实验主要是通过采集患者的外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs），然后经过体外培养处理，刺激其释放γ干扰素。
在培养过程中，添加特定的激活剂（如病毒、细菌成分或特定抗原）刺激PBMCs。
刺激后，PBMCs 中的T细胞被激活并释放γ干扰素。
通过检测细胞培养液中γ干扰素的浓度，可以间接反映患者免疫系统对刺激剂的反应能力。
2.γ干扰素的检测原理：γ干扰素的检测方法主要有酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术和放射免疫测定法（RIA）等。
其中，ELISA是最常用的检测方法。
ELISA方法利用特异性抗体对γ干扰素进行捕获和检测，可以测定培养液中γ干扰素的浓度。
流式细胞术可以利用荧光修饰的特异性抗体直接检测PBMCs中γ干扰素的表达；RIA方法则利用放射性同位素标记的特异性抗体鉴定γ干扰素。
3.激活剂的选择：γ干扰素释放实验中的激活剂选择对实验结果至关重要。
常用的激活剂包括病毒成分（如病毒感染的细胞裂解液）、特定抗原（如结核分枝杆菌抗原）、细菌成分（如脂多糖）等。
选择合适的激活剂可以最大程度地激活免疫细胞，并促使其释放γ干扰素。
4. 结果判读：γ干扰素的释放实验结果一般用γ干扰素的水平来表示，通常以累积浓度（pg/mL）作为评估指标。
通过对照组（如正常人群）和患者组进行对比，可以评估患者的免疫功能状态。
比如，如果患者的γ干扰素水平显著低于正常人群，可以提示免疫功能受损；而如果γ干扰素水平显著高于正常人群，则可能存在其中一种免疫反应异常。
γ干扰素释放试验标准操作流程
γ干扰素释放试验标准操作流程γ干扰素释放试验标准操作流程概述•γ干扰素释放试验（gamma interferon release assay）是一种用于检测某些感染病原体引起的细胞免疫反应的方法。
•本文将详细说明γ干扰素释放试验的标准操作流程，包括前期准备、实验步骤、数据分析等内容。
前期准备1.确保实验室拥有所需设备和试剂。
2.准备受试者血样（采用血液抽取方法）。
3.验证实验室的操作人员已经接受相关培训，熟悉操作步骤和安全注意事项。
实验步骤1.血样准备–将采集的血样转移到合适的试验管中，确保血样完整且无凝块。
–使用离心机离心血样，将血细胞和血浆分离开来。
2.细胞培养–取得合适的细胞培养板，加入培养基。
–将离心后的血细胞加入培养基中，控制细胞密度在合适范围内。
–孵育细胞，保持适当的温度、湿度和二氧化碳浓度。
3.刺激试剂添加–在培养的细胞上加入激发剂，如特定抗原。
–同时设置阴性对照（如未加刺激剂的细胞）和阳性对照（如已知患者血样）。
4.孵育试验–将细胞培养板放入恒温箱中，保持合适的孵育时间和条件。
–注意观察培养过程中的任何异常变化，记录相关信息。
5.液相检测–采用合适的方法（如ELISA等）检测培养液中的γ干扰素水平。
–按照厂家指南操作试剂盒，记录结果并进行质量控制的数据分析。
1.收集所有实验数据，包括阳性对照、阴性对照和受试者样本的γ干扰素水平测定结果。
2.进行质量控制分析–首先，检查实验数据是否符合预期的范围。
–其次，对比阳性对照和阴性对照的水平，确保实验结果可靠。
3.数据解释–根据实验结果判定受试者是否对特定抗原产生γ干扰素反应。
–结合临床资料和相关标准，进行结果的解读和诊断。
结论•本文提供了γ干扰素释放试验标准操作流程的详细说明，以帮助实验室完成该项实验。
•严格按照操作流程进行实验可提高实验的可重复性和结果的准确性。
•数据分析部分应根据实验目的和临床背景进行合理解读，以辅助疾病的诊断和研究。
牛γ-干扰素ELISA试验操作规程 2-百度
牛结核γ-干扰素ELISA试验操作规程SOP序号：REAL-011编制人员：曹瑞青岛瑞尔生物技术有限公司2014-01-01牛结核γ-干扰素ELISA试验操作规程1.简介1.1适用范围本试验用于检测牛全血培养上清中的牛γ-干扰素，根据检测牛PPD、禽PPD 和PBS刺激全血后上清中γ-干扰素量的不同，从而判断牛结核的感染情况。
1.2试验背景牛γ-干扰素试验是以刺激培养全血为基础，检测牛结核病的一种试验方法。
通常，感染分支杆菌的牛，其血液中的淋巴细胞能识别特异的分支杆菌抗原（包括结核菌素PPD），淋巴细胞识别分支杆菌抗原的过程涉及细胞因子的产生和释放，γ-干扰素就是其中最重要的一种。
用结核菌素(PPD)刺激培养牛全血，全血中的T淋巴细胞就会识别PPD，发生细胞免疫反应，其中一个直接的表现就是产生并释放γ-干扰素。
γ-干扰素可用γ-干扰素特异的单克隆抗体夹心法检测。
其它资料背景参考《牛γ-干扰素ELISA检测试剂盒》的说明书。
2.安全性2.1所有操作步骤都应符合当地的“危险物质控制规范”2.2此试验存在一定风险，尽管风险比较小。
阳性反应的上清中可能会含有分支杆菌，因此所有操作步骤都应遵循下面的操作规程。
3.材料3.1试剂牛γ-干扰素ELISA检测试剂盒(青岛瑞尔生物技术有限公司提供)，灭菌的去离子水（溶解试剂盒内物质）。
3.2试验耗材1ml与200µl吸头（无菌）、生物安全口罩、高压灭菌袋、乳胶手套、消毒剂、记号笔、吸水纸、便签纸。
3.3仪器设备酶标仪（含450nm）、单道移液器（0-1000µl，0-200µl）、8-12多道移液器、移液槽、振荡器、计时器。
4.操作程序4.1试剂准备4.1.1ELISA板未开封前，在室温平衡至少1小时。
4.1.2阴阳性对照用无菌蒸馏水或去离子水溶解，确保完全溶解，溶解后的阴阳性对照可在2-8°C保存3个月。
使用前恢复至室温，并充分混匀。
γ干扰素释放试验指南
γ干扰素释放试验在中国应用的建议γ—干扰素释放试验（interferon—γ release assays，IGRAs)是检测结核分枝杆菌(MTB）特异性抗原刺激T 细胞产生的γ—干扰素，以判断是否存在MTB 的感染。
IGRAs 可弥补PPD 试验的不足，目前多个国家已将其用于诊断MTB 潜伏感染(latent tuberculosis infection，LTBI），我国部分医院也已常规开展此项检测，且多家IGRAs 试剂已经或即将进入临床应用。
LTBI 是宿主感染MTB 后的一种特殊状态，感染者体内的MTB 处于持留状态，不能诊断为活动性结核病,但具有发展为活动性结核病的风险.对LTBI 的高危人群进行早期诊断和适当干预，在结核病控制中具有积极意义.PPD 试验作为诊断MTB 感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPD 抗原成分复杂，易受卡介苗接种和非结核分枝杆菌(nontuberculosismycobacterium，NTM）的影响，特异度较低，且对人免疫缺陷病毒（HIV）感染及重症疾病患者等免疫功能受损人群的敏感度不足。
研究结果提示，IGRAs 诊断MTB 感染的特异度高于PPD 试验，但也有文献报道,特别是在中、低收入国家，IGRAs 与PPD 试验相比并没有足够的优势。
IGRAs 技术要求高，操作程序复杂，样本检测时限短,难以实现高通量，价格昂贵。
由于缺乏严谨、大规模和前瞻性的人群研究数据,故IGRAs 的应用范围及结果解读存在较大争议。
为了指导IGRAs 在我国的合理应用,中华医学会结核病学分会与《中华结核和呼吸杂志》编辑委员会组织有关专家经过长时间的反复研讨,在借鉴世界卫生组织（WHO）关于中低收入国家IGRAs 应用说明的基础上,结合我国IGRAs 应用现状，提出以下建议。
一、IGRAs 简介但在实际使用中发现，IGRAs 在不同地区、不同人群中的特异度和敏感度均存在较大差异，在某些人群中并未显示其敏感度和特异度优于PPD 试验。
r干扰素释放试验检测方法培训PPT精选文档
AID
20
T-SPOT.TB 结果判读
A B C D
< 10 斑点相减
> 20
通常正常结果，空白对照孔没有或很少斑点（<10个），阳性质控对照孔斑点数 >20个。
21
T-SPOT.TB 结果判读
N孔斑点数 >10 ≤5
6≤N≤10
P孔斑点数 任何值 ≥20 ≤19 ≥20 ≤19
T孔-N孔斑点数 任何值
(刺激所有T细胞都能释放r-干扰素)
6
IGRA中特异结核抗原
结核杆菌RD区特异抗原：
• ESAT-6: Rv3875编码 结核分枝杆菌早期分泌抗原
• CFP-10: Rv3874 编码 结核分枝杆菌培养滤过蛋白10
Rv3874 (CFP-10) Rv3875 (ESAT-6)
Rv3871～Rv3879
8
其他试剂
无菌Ficoll淋巴细胞分离液（建议分装使用）
1 × PBS洗液（pH7.2-7.4）： 可配置10×PBS母液，稀释使用，0.22um滤膜过滤灭菌
双蒸水或去离子水（高压灭菌或0.22um滤膜过滤灭菌）
细胞培养液：建议分装使用 RPMI1640培养液
台盼蓝染液（0.4%）或其他细胞染色液
• 所需细胞悬液：
A（ul）=（2.5×0.5/ 细胞计数）×1000µl 补加体积（ul）= 500-A
• 注：手工计数细胞数不得低于50个； 机器计数不得低于2.5×106/mL。
16
第五步：铺板
可拆卸板（按样本数取出相应条数） 避免交叉污染、混匀细胞悬液
25万个细胞/孔 （100ul）
细胞培养箱（37度） 16-20h（过夜）
45度角 缓慢加入淋巴细胞分离液
γ-干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验
64牛结核病（bovine tuberculosis）是由牛型分枝杆菌等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为需通报的动物疫病。
目前，我国主要采用牛型提纯结核菌素（PPD）进行单纯颈部皮试变态反应（SCT）来进行牛结核病的检疫，对于阳性牛应进行隔离或扑杀，但是许多被扑杀的牛并没有区分检疫方法可能造成的假阳性，这对牛结核病的检疫，奶牛业的发展造成了巨大的阻力。
掌握我市奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛意义重大，因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有广泛应用价值。
为此，本研究旨在γ—干扰素释放试验（IGRA）的应用优势，通过比对单纯颈部皮试变态反应（SCT）、比较皮试变态反应（CCT）和γ—干扰素释放试验（IGRA）之间的效果，为临床实际应用提供依据。
1 材料与方法1.1 PPD与试剂盒皮肤试验用牛型PPD和禽型γ—干扰素释放法检测奶牛结核病的比较试验倪谷音1，毛爱民2，范 锋2（1.无锡市动物园管理处，江苏无锡 214000；2.无锡市动物疫病预防控制中心，江苏无锡 214021）摘要：目的评价γ—干扰素释放试验（IGRA）牛结核病检疫过程中的效果。
方法在牛结核病检疫过程中对皮试初筛为结核病和疑似结核病的89（74/15）头奶牛同时进行r干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应（SCT）和比较皮试变态反应（CCT）检测，结果单纯颈部皮试变态反应二次检疫中89头牛均判为阳性，单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为67头。
阳性符合率为75.3％；γ—干扰素释放试验和单纯颈部皮试变态反应检测两者的阳性符合数为64头，阳性符合率为71.9％；γ—干扰素释放试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为58头，阳性符合率为79.5 ％。
阴性符合数为16头，阴性符合率为48.4 ％；结论γ—干扰素释放试验在保持较高灵敏度的同时，具有比变态反应更好的特异性。
关键词：牛结核；γ—干扰素试验；单纯颈部皮试变态反应；比较皮试变态反应中图分类号：S852.618；S855.2 文献标识码：B 文章编号：1005-944X（2014）01-0064-03A Comparative Study of γ—Interferon Release Assay in Bovine TuberculosisNi Guyin1，Mao Aimin2，Fan Feng2（1.Wuxi Zoo Management Offi ce， Wuxi， Jiangsu 214000；2. Wuxi Center for Animal Disease Prevention And Control， Wuxi， Jiangsu 214021）Abstract：Objective To evaluate the effect of γ—interferon release assay （IGRA） in bovine tuberculosis detection.Method 89（74 positive/15 suspicious） dairy cows preliminarily screened with skin test were tested byγ—inerfer-on release assay （IGRA）， simple cervical allergy skin test （SCT） and comparative allergy cervical test （CCT）.Result 89 cows were considered as bovine tuberculosis positive in SCT， and 67 of them were considered as posi-tive in CCT with the positive coincidence of 75.3%. 64 cows were considered as positive both in IGRA and SCT with the positive coincidence of 71.9%. 58 cows were considered as positive both in IGRA and CCT， with the positive coin-cidence of 79.5%. 16 cows were considered as negative， with the negative coincidence of 48.4%. Conclusion The γ—interferon release was of higher sensitivity and better specifi city than the other two allergy tests.Key words：bovine tuberculosis；γ—interferon release assay； simple cervical allergy skin test； comparative aller-gy skin test基金项目：江苏省2012农业三新工程《奶牛布病，结核病防治集成技术的推广应用》项目资助，SXGC[2012]0322014年第31卷第1期PPD购自中国兽医监察所；IGRA试剂盒购自瑞士Prionics公司。
结核感染T细胞干扰素释放试验要点
4、TB-IGRA阳性，表明机体曾经患过结核病，不能区分目前是否为活动性结核病；
5、TB-IGRA所用抗原为MTB特异性抗原，阴性检测结果代表目前机体没有MTB特异抗原致敏的T淋巴细胞，即受检者目前未感染MTB。
说明：近期有其它细菌感染、慢性病等可能会造成体内γ-干扰素升高，或者近期接受γ-干扰素治疗也会导致体内γ-干扰素水平过高。
免疫缺陷患者，应用免疫抑制剂、肾上腺皮质激素治疗患者，病危病人和免疫能力极其低下，在接受结核杆菌相关抗原刺激时，γ干扰素的分泌比较低，可能会产生阴性结果。
建议对该类患者检测前参考CD4含量水平或者T淋巴细胞水平。
结核感染T细胞(TB-IGRA)/γ-干扰素释放试验
项目名称
标本类型
临床意义
“结核感染T细胞(TB-IGRA)”(又称“γ-干扰素释放试验”）
肝素锂抗凝血（长绿管），采集静脉血不低于4mL
1、可用于结核病辅助诊断，特别是对于菌阴肺结核和肺外结核的辅助诊断有更大的临床意义；
2、潜伏性结核筛查(不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响)，主要用于生物制剂/免疫抑制剂使用前后的结核感染筛查；
小鼠γ干扰素(IFN-γ)说明书
小鼠γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。
用纯化的小鼠γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
γ-干扰素释放试验(IGRA)对于诊断结核分枝杆菌感染的应用
支气管肺泡灌洗液中的 Ｔ细胞反应以检测结核分枝杆菌感染
的试验也取得 了较好 的效 果 ， 为这类试验 的应用拓展 了新思
路。
一
呈细胞的主要组织相容性复合体 （ 白细胞抗 原 ） 人 相结 合 ， 表
达于巨噬细胞表面 ， 并递 呈给 Ｔ细 胞。特异性 Ｃ ４ Ｄ Ｔ细 胞 能产生特征性淋巴因子 ， 包括一种 能够刺激 Ｔ细胞增殖 的生 长 因子 白介素一 ２和一种 巨噬细胞反应 中介物 ＾ 干扰素 ， 一 ｙ 一 ＾干 ｙ 扰素 为巨噬细胞杀菌机制所必需 。
重要 的。 一 干扰素 释放试 验诞 生 的早期 曾使 用 Ｐ Ｄ作 为特 Ｐ 异性抗 原 ， 由于 Ｐ Ｄ成分不单一 ， 异性和敏感性 均不理想 。 Ｐ 特
后来研 究者开始使用 Ｅ Ａ ６ 和 Ｃ Ｐ１ ＳＴ Ｆ ．０作为抗原 ， 得到 了较 好的效果。Ｅ Ａ ￣（ Ｓ Ｔ 早期分泌抗原靶６０ ０ 白，ａｌ ｓｃ ｔ ０ 蛋 ｅｒ ｅｒ ｏ ｙ ｅ—
９３ ８８％ ．
Hale Waihona Puke 吸附／ 酶联免疫斑点 ） 方法定 量检测检 测全血／ 周血单核 细 外
胞在结核菌特异性抗原刺激 下释放 ＾干扰 素的水平 ， 于诊 ｙ 一 用 断潜伏性结核分枝 杆菌感 染 以及结 核病 。 目前这 类 一 扰 干 素释放试验中 ， 有两种较为成熟 的方法 ， Ｑ ａｔ Ｆ Ｒ Ｎ Ｔ 即 ｕｎｉ Ｅ Ｏ —Ｂ Ｇ Ｌ Ｏ Ｄ试验 （ Ｖ — Ｑ ｒＧ）（ ｅｅｔ ｎｏ ｏ ｔｄ Ｃ ｍｅ ｅ Ａ ｓａ— Ｃｌ ｓｓＩｃｒ ｒ ｅ ，ａ ￣ ， ｕｔ ｌ ｌ ｉ ｐａ ｒ
这个基 因片断不存在于大部分的非结核 分枝杆菌 以及所有的 牛型分枝杆菌（ 包括卡介苗 ） 因此 Ｅ Ａ ６ 和 Ｃ Ｐ１ 中， ＳＴ Ｆ． ０作为
结核特异性γ干扰素释放试验(TBIGRA)送检注意事项PPT课件
γ干扰素释放试验特点
❖ 全球应用最广泛、认可度最高的结核快速诊断技术； ❖ 世界卫生组织（WHO）及欧美多国结核诊疗指南推荐 ❖ 美国及欧洲结核杆菌感染测试准则之一 ❖ 更高的敏感度及特异性
临床主要应用
❖ 不明原因的发热/免疫力低下/受抑制患者的结核诊断 ❖ ”菌阴“结核的辅助诊断 ❖ 肺外结核的鉴别诊断 ❖ HIV感染/肾透析/器官移植患者的结核诊断 ❖ 抗结核治疗的疗效评估 ❖ 儿童结核病的辅助诊断 ❖ 高危人群结核感染筛查 ❖ 常规体检、出国体检
；
和T-SPOT比较
操 作 更 稳 定，结 果 更 客 观
试剂盒 采集
运输时间 提取细胞 孵育 结果判读
A.TB
肝素抗凝全血4-6ml 16h
T-SPOT 肝素抗凝全血4-7ml 4h
否
是 仪器
是
是 人工
γ干扰素释放试验特点
全球应用最广泛、认可度最高的结核快速诊断技术； 世界卫生组织（WHO）及欧美多国结核诊疗指南推荐 美国及欧洲结核杆菌感染测试准则之一 更高的敏感度及特异性
❖ 感染后起病缓慢，常有不规则发热，咳嗽，食欲减退，消 瘦等，与初期感冒无大区别。肺部结核感染的种类很多， 在小儿时期常见的有：原发综合症、肺门淋巴结结核、急 性粟粒性肺结核和结核性胸膜炎等。
结核病疫情
❖ 感染人数：全球人口的1/3，中国的感染率为44.5%；感 染者一生中会有约10%的风险发展成为结核病；
稳定性及储藏要求
时间要求 样本拒收及采取措施
影响／干扰因素 其它条件
具体内容无特殊要求
肝素抗凝全血4-5毫升（国产肝素管即可） 600（无物价编码、根据成本自主定价） 室温条件下运送 周一、周四检测，周四、周日报告
γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素释放实验的原理
γ干扰素是一种重要的细胞因子，它对免疫系统的调节起着关键作用。
γ干扰素释放实验（gamma interferon release assay, IGRA）是一种用于检测结核菌感染的方法。
其原理如下：
1. γ干扰素是由淋巴细胞分泌的，而结核菌感染会刺激机体产生γ干扰素。
因此，通过测量γ干扰素的释放量可以间接评估机体是否感染了结核菌。
2. 在IGRA实验中，先采集被测者的血液样本，其中含有感染结核菌的T淋巴细胞。
3. 接着，将被测样本分成两个试管，一个试管中加入结核菌特异性抗原（比如结核分枝杆菌的成分），另一个试管中则不加入抗原。
4. 如果被测者感染了结核菌，那么在抗原存在的试管中，T细胞会受到刺激，产生γ干扰素并释放到培养基中。
5. 最后，通过一种敏感的检测方法（比如ELISA），可以定量测量培养基中的γ干扰素浓度。
如果被测者感染了结核菌，那么在抗原刺激下产生的γ干扰素浓度会比没有抗原刺激的试管高，从而可以判断他是否感染了结核菌。
这个实验方法的优点是简单、可靠，且无副作用，因此被广泛应用于结核菌感染的筛查和诊断。
γ-干扰素体外释放试验
注：细菌学阳性为菌培和涂片检测方法其中一种或两种结果为阳性。
肺结核辅助诊断
IGRA可作为活动性肺结核的辅助性诊断指标
Wang等报道了在台湾大学医院开展的平行比较IGRA和涂片镜检的 研究结果。
•IGRA的敏感性和特异性分别为87％和89％，涂片镜检分别为56％ 和58％ •IGRA的阳性预测值和阴性预测值分别为92％和82％，远高于涂片 镜检的67％和47％
结核γ -干扰素释放试验
郭建惠
死亡最多
结核流行情况
1/3
每年900万/170万
TB感染的诊断方法
涂片法 培养法 PCR 结核抗体/抗原 检测 TST IGRA 标本
痰液或其他体液
痰液或其他体液
痰液或其他体液
血液或其他体液
皮下注射
血液
检测 类型
活动性结核
活动性结核
活动性结核
活动性结核
活动性结核 潜伏结核感染
3.1 菌培/涂片 断
肺结核的辅助诊
解决的临床问题
类似实验和细菌学检测结果比较
样本分类 肺结核病 总数 721 细菌学阳性 444 WT（+） 591 进口（+） 564
单一肺外结核病
结核合并其他疾病 合计 灵敏度
35
30 786
5
9 458 58.3%
28
18 637 81.0%
29
17 610 77.6%
皮科
眼科
生殖中心
解决的临床问题
A. 大幅提高结核感染的检出能力，可用于肺结核等结核感染的辅 助诊断，特别是对于痰涂阴性肺结核的辅助诊断； B. 使用高特异性抗原，有效避免卡介苗干扰；可用于非结核杆菌 肺部感染、肺炎等疑似病例与肺结核的鉴别诊断； C. 使用全血进行测试，克服痰涂、菌培和分子检测肺外结核取样 难的问题，可有效检出肺外结核； D. 可用于免疫抑制剂治疗、血液透析患者、器官移植等临床治疗 前的结核感染排查 E. 特殊人群的结核筛查：如糖尿病人等
γ干扰素释放试验指南
γ干扰素释放试验在中国应用的建议γ- 干扰素释放试验（interferon-γ release assays，IGRAs）是检测结核分枝杆菌(MTB) 特异性抗原刺激T 细胞产生的γ- 干扰素，以判断是否存在MTB 的感染。
IGRAs 可弥补PPD 试验的不足，目前多个国家已将其用于诊断MTB 潜伏感染(latent tuberculosis infection，LTBI)，我国部分医院也已常规开展此项检测，且多家IGRAs 试剂已经或即将进入临床应用。
LTBI 是宿主感染MTB 后的一种特殊状态，感染者体内的MTB 处于持留状态，不能诊断为活动性结核病，但具有发展为活动性结核病的风险。
对LTBI 的高危人群进行早期诊断和适当干预，在结核病控制中具有积极意义。
PPD 试验作为诊断MTB 感染的传统方法，具有操作简便、成本低廉的特点，至今仍广泛使用，但该方法使用的PPD 抗原成分复杂，易受卡介苗接种和非结核分枝杆菌(nontuberculosismycobacterium，NTM) 的影响，特异度较低，且对人免疫缺陷病毒(HIV) 感染及重症疾病患者等免疫功能受损人群的敏感度不足。
研究结果提示，IGRAs 诊断MTB 感染的特异度高于PPD 试验，但也有文献报道，特别是在中、低收入国家，IGRAs 与PPD 试验相比并没有足够的优势。
IGRAs 技术要求高，操作程序复杂，样本检测时限短，难以实现高通量，价格昂贵。
由于缺乏严谨、大规模和前瞻性的人群研究数据，故IGRAs 的应用范围及结果解读存在较大争议。
为了指导IGRAs 在我国的合理应用，中华医学会结核病学分会与《中华结核和呼吸杂志》编辑委员会组织有关专家经过长时间的反复研讨，在借鉴世界卫生组织(WHO) 关于中低收入国家IGRAs 应用说明的基础上，结合我国IGRAs 应用现状，提出以下建议。
一、IGRAs 简介1．IGRAs 的原理和主要方法：受到MTB 抗原刺激致敏的T 细胞再次遇到同类抗原时可产生γ- 干扰素，IGRAs 通过检测全血或分离自全血的单核细胞在MTB 特异性抗原刺激下产生的γ- 干扰素，判断受试者是否感染MTB。
γ-干扰素释放试验的结果解读
γ-干扰素释放试验的结果解读检验科的工作繁琐而单调，除了每天的整理标本、上机实验和仪器维护，实验结果的正确解读也是检验师必备的技能。
γ-干扰素释放实验(IGRAs)是世界卫生组织推荐的用于诊断结核分枝杆菌感染的体外免疫学方法，但是有些临床或检验同行对该实验结果的解读有一定的偏颇，本文就该问题进行了梳理，希望对大家有所帮助。
IGRAs检测的基本原理为感染者体内致敏的T细胞，在体外再次接受结核特异性抗原刺激后，激活的效应T细胞能够产生抗原特异性γ干扰素（IFN-γ），通过对IFN-γ的检测可以反映机体是否存在MTB 感染。
再看报告单时，我们会看到四个指标，分别为：IGRA-N、IGRA-P、IGRA-T和TG-IGRA。
IGRA-N，即阴性对照管。
在对全血T淋巴细胞培养时，加入物质为缓冲液，它反应了患者的免疫基础水平。
一般情况下，该值远低于阳性对照管，但在一些特殊疾病状态下，如类风湿等自身免疫性疾病时，该值会接近于阳性对照管，影响实验结论。
IGRA-P，即阳性对照管。
在对全血T淋巴细胞培养时，该培养管加的激活剂为植物血凝素（PHA)，PHA可激活小淋巴细胞转化为淋巴母细胞，继而分裂增殖，释放淋巴因子，是干扰素的诱导剂。
对于免疫功能正常的人来说，该值会远高于阴性对照管，但在一些免疫力低下，如HIV感染者或是使用免疫抑制剂的患者中，该值往往比较低，几乎接近于阴性对照。
IGRA-T，即样本检测管，在对全血T淋巴细胞培养时，该培养管加的激活剂为MTB特异性抗原——早期分泌抗原（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10），如果检测者体内有结核杆菌致敏的T细胞，当加入以上两种抗原时，会迅速激活体内的效应T细胞产生特异性IFN-γ。
TG-IGRA，即实验结论，通常为阳性、阴性或不确定。
该实验结论由IGRA-N、IGRA-P和IGRA-T三个检测值套用专门的公式计算而来，因此该实验结论与以上三个值的变化密切相关。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。