莱克多巴胺残留检测不确定度分析

莱克多巴胺残留检测的不确定度分析

摘要:建立液相色谱法测定猪肝中莱克多巴胺残留量检测的数学模型;通过对测量过程中不确定度分量来源的分析,计算各分量的标准不确定度及其自由度,最后合成标准不确定度及其扩展不确定度与有效自由度。

关键词:不确定度评定莱克多巴胺高效液相色谱法猪肝

中图分类号:ts207 文献标识码:a 文章编

号:1674-098x(2011)12(b)-0090-02

数据的准确可靠对分析工作而言是至关重要的,不确定度表征合理地赋予被测量之值的分散性,定量表示测量的准确性。

iso/iec17025－2005《检测和校准实验室能力认可准则》也明确规定,检测实验室应对测量结果给出不确定度评定。本文根据有关标准,结合对实际操作条件的分析,对液相色谱法对猪肉中莱克多巴胺残留量的测量不确定度进行评估。

1 仪器、试剂与方法

1.1 仪器与试剂

agilent1200高效液相色谱仪(fld检测器)、离心机、ph计、梅特勒xs-104电子天平;e120h超声波清洗器、恒温干燥箱等;盐酸莱克多巴胺对照品(含量:98.0±0.5%)其他试剂均为分析纯。

1.2 标准曲线的制备:

精密称取莱克多巴胺对照品约10mg置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀制成0.1mg/ml的溶液作为标准储备液。

精密量取上述标准储备液1ml,2ml分别置于100ml的容量瓶中,加2%的乙酸溶液稀释至刻度摇匀制成1μg/ml及2ug/ml的标准溶液,精密量取1ug/ml的标准溶液5ml、2ml、1ml分别置于10ml的容量瓶中,加2%的乙酸溶液稀释至刻度摇匀制成0.5μg/ml、0.2μg/ml及0.1μg/ml的标准溶液,精密量取1μg/ml的标准溶液5ml 置于100ml的容量瓶中,加2%的乙酸溶液稀释至刻度摇匀制成0.05μg/ml的标准溶液。精密量取上述标准溶液注入高效液相色谱仪,记录色谱图,按照浓度与峰面积制作标准曲线,回归方

程:y=-0.00216+0.00273x(相关系数r＝0.9999),其中y为浓度,x 为峰面积。

1.3 样品残留量的测定过程

精密称取匀浆好的猪肝样品约5g,置于50ml的塑料离心管中加入乙腈20ml,漩涡振摇15min,于4℃的冷冻离心装置上以3500r/min 离心10min,取上清液。将上述肝样用20ml的乙腈按照上述方法重复提取,合并上清液至分液漏斗中,用乙腈饱和的正己烷20ml振摇提取,静置分层后除去正己烷相,重复提取3次(20ml+20ml+20ml)。乙腈相加入20ml饱和nacl溶液,液液萃取后分离乙腈相,50℃旋转蒸干。用2%乙酸溶液洗涤残渣,过分别用甲醇、水、2%乙酸溶液各5ml活化的scx固相萃取柱,用5ml的2%乙酸溶液冲洗杂质,最后用7ml5%氨化甲醇溶液洗提。洗提液50℃n2吹干。用1ml的2%乙酸溶液重新溶解,用微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。

精密量取上述供试品溶液20μl注入液相色谱仪,将峰面积代入

标准曲线计算莱克多巴胺残留量。

2 测量的不确定度来源分析

2.1 测量数学模型

样品中莱克多巴胺的残留量按照以下公式计算。

x= (1)

式(1)中:x为样品中莱克多巴胺残留量,单位为μg·g-1;c为供试品溶液中莱克多巴胺残留量的测定值,单位为:μg/ml;v为样品的最终定容体积;m为样品的质量;r为空白样品的加样回收率。由公式(1)得合成的测量不确定度为:

urel(x)=

2.2 c的不确定度评定

2.2.1 校准计算引入的标准不确定度

对于供试品溶液的浓度采用标准曲线法测定,设标准曲线方程为:y=a+bx,则供试品溶液的浓度测定的数学模型为y=a+bx,其中y 为待测溶液的浓度,x为待测溶液的色谱峰面积。

该分量的标准不确定度为:urel(x)=

(1)标准曲线方程参数的不确定度

其中,标准溶液的平均浓度=0.310,系列浓度的平均峰面积响应=114.42。

计算得回归曲线方程参

数:b=sxy/sxx=0.00273,a=y-bx=-0.00216,s==0.00414。

s2(b)==7.024×10－10,s(b)=2.65×10－5,自由度为:v(a)=m×

n-2=6×2－2＝10。

s2(a)==2.062×10－5,s(a)=0.0045,自由度为:v(b)=m×n-2=6×2－2＝10。

(2)峰面积a测量的标准不确定度

仪器色谱峰面积积分的相对标准不确定度为1.0%,均匀分布属于b类,按可靠性约20%计算其自由度为:v(a)==12

因此,用标准曲线方程计算待测浓度时引入的相对标准不确定度为:

urel(x)==

=0.011

自由度

ν(x)===16.7

2.2.2 标准溶液引起的不确定度

(1)对照品溶液的纯度引起的不确定度:

对照品纯度的不确定度为±0.5%,按正态分布置信水平为95%,纯度的标准不确定度为:u1=0.005/2=0.0025,自由度ν1=∞

(2)称量引入的不确定度:十万分之一电子天平的允许误差为±0.01mg,按照均匀分布,标准不确定度为:0.01/=0.0058mg,称取对照品分为两次独立的称量过程:一次毛重,一次皮重,计算得天平校准的标准不确定度为:=0.0082mg。所以,称取10.05mg对照品的相对标准不确定度为:u2=0.0082/10.05=0.00082。自由度为∞

(3)稀释过程引入的标准不确定度:

①标准储备液制备引入的不确定度:100ml容量瓶引允许误差为±0.10ml,按照均匀分布,其标准不确定度为:0.10/=0.058ml,甲醇的热膨胀系数为1.22×10－3/℃,设温差为5℃,则因温度引起的体积变化为:±1.22×10－3×5×100＝±0.61ml,按均匀分布处理,其标准不确定度为:0.61/=0.35ml。合并上述两项,计算该步骤相对标准不确定度为:

/100=0.0035

②稀释过程中引起的标准不确定度:

上述刻度为1ml、2ml、5ml的a级移液管的容量允差分别为:±0.007ml、±0.010ml、±0.015ml,其相对标准不确定度分别为:±0.007//1=0.004、±0.010//2=0.003、±0.015//5=0.002;上述

10ml、100ml单刻线容量瓶的容量允差分别为±0.020ml、±0.10ml,均按照均匀分布处理,其相对标准不确定度分别为:±

0.020//10=0.0012、±0.10//100=0.00058。水的热膨胀系数为2.1×10－4/℃,设温差为5℃,甲醇的膨胀系数为1.22×10－3/℃,溶剂的膨胀系数对各玻璃量器的相对标准不确定度的影响没有差异,同时,计算应选取最大的不确定度值,即选择0.10ug/ml标准溶液的相对标准不确定度:

=0.0055

由上述结果可知,由标准储备液配制系列标准溶液引入的体积相对不确定度为:

u3==0.0065