乳酸环丙沙星注射液细菌内毒素检查方法的研究

复检鲎试剂方法的有效性。
收稿日期：１９９８—０５—１８
多波长直线回归法测定双嘧啶片中磺胺嘧啶和甲氧苄啶的含量
丁里玉 詹文红 刘伟娜 郭金鹏（石家庄０５００１７河北医科大学药学院）
本文论述了多波长直线回归ｊ击同时测定双嘧赃片 中磺胺嘧啶（ｓＤ）和甲氧苄赃（ＴＭＰ）的含量。计算程序 用ＢＡＳＩＣ语言编制。平均回收率及ＲＳＤ分别为１０１ ７％，２．７％；１００．９％，０ ５１％（ｎ＝５。方法简便、快速， 结果满意＝ １实验部分 Ｉ．１仪器与药品：ｕｖ一２２０１双光束自动记录分光光 度计（日本岛津）；４８６／３２微机（长城）；ＳＤ与ＴＭＰ对照 品（河北省药品检验所）；双嘧啶片（市售）；所用试剂均 为分析纯。 １．２标准溶液的配制：准确称取一定量ＳＤ．用适量０． １ｍｏＩ／Ｌ氢氧化钠溶液溶解后置５００ｍｌ量瓶并稀释至刻 度，摇匀，得ｓＤ溶液（Ｉ）。同弦得＇ＩＭＰ溶液（Ⅱ）ｏ １ ３测定渡长的选择：按处方配比，精确吸取溶液 （Ｉ）和（Ⅱ）适量分别配制ｓＤ浓度为８＃ｇ／ｍｌ；ＴＭＰ浓度 为１，－ｇ／ｍｌ的标准溶液和标准混合溶液，以溶剂为空白， 在岛津ｕｖ一２２０１分光光度计上自４００—１９０ｒｉｍ扫描。 通过紫外吸收光谱，经精确选定灵敏度较高的２３１— ２５６ｍｎ为测定区间。
３稳定性试验 ３ １放置时间对测定结果的影响；取上述硫酸阿米卡 星溶液每隔１ｈ测定旋光度，结果表明旋光度在４ｈ内无 变化。于１和５ｄ后再测定其旋光度，结果也无变化。 ３ ２测定温度对旋光度的影响：取上述硫酸阿米卡星 溶液于１５，２０，２５，３０和３５℃下分别测定旋光度，结果 表明，旋光度随温度的升高有变大倾向，但在１５～３５℃ 范围内，测定结果仍然在医院制剂快检规定的误差范 围内． ４回收率试验
公司）；硫酸阿米卡星（成都制药四厂，批号：９７１１０６，效 价：８８７Ｕ／ｒａｇ）；ｐＨ７ ８磷酸盐缓冲液、枯草芽孢杆菌 ［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１ １ ｏ ２标准曲线的建立
精密称取硫酸阿米卡星适覆，用蒸馏水配制成每 １００ｍｌ舍硫酸阿米卡星０ Ｉ一０ ８９的系列溶液，按中国 药典９０年版方法测定旋光度，结果见表ｌ，得回归方 程：Ｄ＝ｌ ４２９０ｃ＋０．０２２１８（Ｒ＝０ ９９９９）。 表１浓度与旋光度的关系
旋涡混台仪：ＸＷ一８０Ａ（上海医科大学仪器厂）；鲎 试剂（ＴＡＬ）（厦门鲎试剂厂，批号：９７１００８，规格：０ １ｎｄ），灵敏度（＾）：０．５ＥＵ／ｍｌ，细菌内毒索检查用水（厦
中国现代应用药学杂志１９９８年８月第１５卷增刊
门鲎试剂厂，批号：９７０９０１，规格２ｍ１），细菌内毒素工作 品（厦门试剂厂，批号９７０９１０．规格：ＩＯＥＵ／支）；其余所 用用具均采用１８０“Ｃ干燥３ｈ，以除去热原。 ２实验方法与结果 ２ １ ＴＡＬ标示灵敏度（ｋ）复核试验
·５Ｓ·
１ ４回收率实验：按处方配比配制模拟片。准确称取 其细粉适量（含ＳＤ ８０ｒａｇ，ＴＭＰｌＯｍｇ），置５００ｍｌ量瓶中， 加适量溶剂溶解后定容摇匀，过滤，取续滤液２ ５ｍｌ置 ５０ｍｌ量瓶中定容，摇匀。以溶剂为空白，于２３１～ ２５６ｎｍ波长区间，约每间隔０．８ｒａｎ测定吸收值（仪器手 动２次的读数为０．８ｒｉｍ，共选３０个波长点测定），将各 组数据输入计算机两组分多渡长直线回归法程序。结 果：ＳＤ与ＴＭＰ的平均回收率与／ＬｅＤ为１０１．７％，２ ７％ 和１００ ９％，０．５１％（ｎ＝５）。 ２实验结果与讨论
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３ １综上所述，乳酸环丙沙星注射液可以由细菌内毒
素检查法取代热原检查；作细菌内毒索检查的合适的
样品浓度是１ ５斗５稀释，合适的ＴＡＬ灵敏度值ｘ为０
５Ｅｕ／ｕｄ。
３ ２若鲎试剂的来源或制造工艺改变，或药品的生产
工艺、处方、成分改变，要重做干扰试验；若药品特殊组
分的来源或鲎试剂的批号改变，要用阳性产品对照来
取经热原检查合格的３批乳酸环丙沙星注射液， 均采用直接取样和将其进行（１ ５—５）稀释，按细菌内 毒索检查法的干扰试验操作，结果乳酸环丙沙星对细 菌内毒豢检查有抑制作用，而将其进行（１．５—５）稀释， 可消除干扰作用。
２ ４细苗内毒素检查与热原检查结果比较
２．４．１将５批乳酸环丙沙星注射液均作（１ ５４５）稀
释，采用ｘ为０ ５Ｅｕ／ｕｄ的ＴＡＬ，按细菌内毒索检查｛击检
查．同时增加１支阳性产品对照管（ＰＰＣ，即０．１１Ｔｌｌ ＡＴＬ
＋０．１ｍｌ舍２＾浓度内毒索样品稀释液）。 ２．４．２对上述同样５批样品作热原检查：样品经过（１， ５—５）稀释，选用ｘ为０ ５Ｅｕ／ｒｒｄ的ＴＡＬ，细菌内毒索检
查法与热原检查结果吻合。 ３讨论
操作按中国药典９５版二部附录ⅪＥ，结果见表ｌ。 即灵敏度复核值ｘ。为０ ２５ＥＵ／Ⅱｈ，由于０ ５ｘ＜ｋ＜２ｘ， 奉批ＴＡＬ灵敏度标示值正确，按０，５ＥＵ／ｎｆｌ使用。 ２．２乳酸环丙沙星注射液内毒索理论限值（Ｌ）和最大 有效稀释倍数（Ｄ）的计算
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万方数据
表１ １、札灵敏度（ｂ）复核结果
ＴＡｔ
收稿日期：１９９８—０６—３０
乳酸环丙沙星注射液细菌内毒素检查方法的研究
王新桃 丁玉峰（武援４３００３０同济医科大学附属同济医院）
环丙沙星是台成的第３代喹诺酮类抗菌药物，为 国家基本药物。其药用品有盐酸盐一水台物（供口服 用）和乳酸盐（供注射用），其乳酸盐规定的检查项是热 原检查，而采用细菌内毒素检查国内尚未见报道。本 文通过实验探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查衿 测的可行性。 １实验材料
按处方精密配制成硫酸阿米卡星滴眼液，照上述 方法测定旋光度，按回收方程计算，其平均回收率为
６讨论 ６ ｌ旋光法与抗生素微生物检定法测定结果无显著 性差异。但旋光法较后者有快捷、耗时耗费少等优点， 尤适于医院快检。 ６．２由于不同批次的原料药的质量不同，其比旋度也 不同。因此测定样品时应采用与所配样品同一批次的 原料药所作的标准曲线。 ６．３为减少温度对测定结果的影响，应将检品温度凋 节至室温。
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万方数据
２ １样品测定结果：取双嘧睫１０片，精确称量，研 成细粉。精确称取此粉适量（相当含ＳＤ ２００ｒａｇ）置 ５００ｍｌ量瓶中，加适量溶剂溶解，定容，摇匀，过滤，弃去 初滤涟。精确量取续滤液ｌｒｖｌ置５０ｍｌ量瓶中，定容，摇 匀。依回收率测定项下操作，测定结果３次平均值：ＳＤ 为１０１ ２％，ＲＳＤ＝３ ７％；ＴＭＰ为９９ ４％，冗ｓＤ＝ １ ７％。与上簿市药品标准法结果ＳＤ为９８ ８％，ＲＳＤ ＝０．２６％：＂ＩＭｐ为９６ ９％，ＲＳＤ＝０．６９％比较基本一
ｈ
内毒索维度（ＥＵ／ｍ１）
批号
阴性
结果（ｋ （ＥＵ／ｍ］
＋
＋
＋
一
一
９７１０。８
０５
Ｏ ２５
乳酸环丙沙星注射液热原检查的兔注射剂量（Ｍ）
毒素理论限值（Ｌ）为：Ｌ＝丽Ｋ＝赞＝１．６７Ｅｕ／ｍｌ；Ｄ 为３ｍｌ／ｋｇ，细菌内毒索阚值（Ｋ）为５ ０ＥＵ／ｋｇ，则细菌内
＝÷。因此，若选用ｘ为０．５Ｅｕ／ｍｌ的ＴＡＬ，Ｄ为３．３４ 倍．即（１ ５—５）稀释。 ２ ３干扰试验结果
９９ ２２％，ＣＶ为０．７３％。 ５样品测定
取我院五官制荆配制的２５００Ｕ／ｍｌ硫酸阿米卡星 浦眼液６批，分别用抗生素微生物桅定法和旋光法测
：６）。２种方法所测得的结果在㈣０ 定，结果见表２。Ｔ０１（神＝２，Ｔ＝８，Ｔ＞Ｒｌｉｅ，）．Ｐ＞０ １（“ ０５的水平上无 显著性差异。 表２ ２种测定方法的结果及其比较