发酵灭菌、染菌知识(发酵篇)
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
发酵灭菌、染菌知识学习
发酵染菌的危害
• 发酵染菌能给生产带来严重危害， 防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重 要工作内容。尤其是无菌程度要求高的 液体深层发酵，污染防止工作的重要性 更为突出。
本次学习的内容
• • • • • 灭菌或消毒前的准备工作 灭菌操作 染菌的后果﹑预防及处理 染菌分析 补充
• 集气筒试漏法（用不到） 用集气桶试漏的目的是：(1)检查罐上各管道 (包括小排气管道)是否通畅。(2)检查罐上所有的管道 及小排气阀的阀门蕊子是否有漏。 使发酵罐的管道小排气终端都集中在一个排气 桶中，将料液残渣、冷凝水及蒸汽等自小排汽阀排出。 集气桶中盛满自来水，把下水阀关死。罐内充满空气， 使具有一定工作压力。接着将罐上管道阀门及所有的 小排气阀全关死，看集气桶内有无气泡泛出。如没有 气泡，说明所有阀心都不漏。如果有气泡出现，看气 泡在集气桶内的位置，与哪一条管路有关系，再进一 步将该管路阀门关闭，小排气阀门开启，看该管路阀 门是否有漏，再将小排气阀门关闭，管路上的阀门打 开，看小排气阀门是否有漏。
发酵车间复产时，消毒工还应根据复产总进度做好如 下工作。 (1)提前三天消总空气系统，做到无死角，消后吹干。 (2)提前两天对种子罐进行预消，进无菌试验罐。 (3)提前一天对发酵空间、下水道、取样漏斗进行甲 醛消毒。 (4)对各管路汽封、取样管汽封，可提前一天进行 。
2﹑灭菌操作
• 灭菌工艺控制点选择的依据是杂 菌的含量尤其是芽孢杆菌的含量，被灭 菌物料的性质，设备结构及死角，物料 的体积，细菌的致死范围，总蒸汽的质 量及压力，消后营养成份的破坏以及上 述几方面的综合考虑。
• 1．2物料
培养基实罐灭菌前要做到物料过筛入罐 在培养基配制过程中往往会混入绳子、纸片等包 装杂物。培养基成份中除少量可溶性糖、氮和无机盐 外，大部分为颗粒性物料。有些原料如酵母粉、蛋白 胨等在加热配制过程中往往易结团结块。有些原料如 淀粉在配制过程或水解不完全时也会结成团块。根据 热传递原理蒸汽接触颗粒加热时，颗粒的中心温度达 到颗粒表面同样温度所需的时间(响应时间)和颗粒大 小的直径有关，颗粒越大，响应时间越长，颗粒越小， 响应时间越短。为了确保蒸汽的热穿透力，缩短响应 时间，培养基在配制时必须做到物料过筛后进入罐内， 一般控制筛孔直径为5~6mm，以有利于灭菌。
• 3）试漏方法
• 肥皂水试漏 (1)设备容器和管道必须具有足够的工作压力(一般为 0.08~0.1兆帕以上)。 (2)被试漏的容器和管道不能有料液。 (3)被试漏对象不能热烫。 (4)管道及阀门要畅通。 (5)被试漏处一定要有肥皂水浸湿。 在试漏过程中通过眼看、手摸、耳听来仔细认真地进行 观察和判断；不能放过一个泄漏点。
1﹑灭菌或消毒前的准备工作
•1．1设备方面
• 1）消毒前空罐的准备 主要有三个方面。 （1）罐内外设备的检查。 A、罐内传动设备如搅拌轴、搅拌叶、底瓦、拉杆的牢固、 磨损、转动情况有无异常。 B、罐内管路有无穿孔、堵塞、断裂。其中包括夹层或蛇形 管的严密度检查。 C、罐外设备、管路检查有无泄漏、堵塞。阀门换垫片。 （2）罐内死角如罐壁、罐底、托板、蛇管、档板背后堆积物 的清除。 （3）罐体焊缝、阀门、法兰、三通的严密度检查，防止泄漏。
实消过程中突然停搅拌怎么办?
• 2.1.2使用蒸汽前必须排尽蒸汽管道内的冷凝水 蒸汽管道内由于常温的冷却作用必然有较多的残 存冷凝水，冬季或较长时间未使用的蒸汽管道内残存 冷凝水更多。这些冷凝水中夹带着大量铁锈及杂物， 如不将其排尽，在通蒸汽时会直接引入罐内，或堵塞 轧坏阀门，或者污染培养基和增加消后体积。尤其是 在空气过滤器灭菌时会湿透过滤介质，降低过滤效率， 甚至堵死纤维介质的过滤微孔，使之失效，所以必须 在使用蒸汽前排尽蒸汽管道内的冷凝水。
• 1．3人员
灭菌操作时应注意的安全问题 (1)压力容器的开盖或维修必须先切断压力源，确认 无压力后方可进行，严禁带压开盖拆阀。 (2)下罐检修或洗罐必须检查并确认搅拌电源已经切 断，罐上有人监护方可下罐操作。 (3)灭菌操作时应戴好劳防用品，开启阀门时人的身 体应当侧向阀门，以防不测引起烫伤。 (4)开启阀门时应事先确认管道的走向，防止气汽液 料引入旁路。排汽时应防止排出的蒸汽冲及人身和电 气设备。 (5)高温操作时必须保护好罐上视镜玻璃，严禁用冷 水冲洒或硬物锐器撞击而引起爆裂，亦减少向视镜内 窥视以免发生人身事故。 (6)产格遵守压力容器耐压规定。高温灭菌后的不得 关死排汽和用冷水冷却，防止产生负压损坏设备(空消 情况)。
• 2）灭菌前要对设备严密度进行试漏 抗生素发酵是一个无菌培养过程，必须 在密闭的设备条件下进行。发酵过程中还必须 进行接种，补加糖、油物料，加空气等工艺操 作。发酵罐内虽然保持正压，但是一旦遇到突 然停电、停空气、泡沫窜顶等异常情况，如果 设备渗漏，将导致负压抽吸使发酵染菌。因此 设备严密度是防止染菌的基本条件。
•ຫໍສະໝຸດ Baidu
实消过程中的三要素是: (1)发酵罐及附属阀门管线无泄漏，无 死角、无堵塞。 (2)灭菌时夹层或蛇管内冷水彻底排尽。 (3)灭菌时做到进汽量分主、次，以加 速热传递的对流，避免假压力。
• 2．1灭菌操作 • 2.1.1实消过程中要开动搅拌 实消全过程中，开动搅拌的目的是： （1）使消毒灭菌的物料均匀受热，加速热 传导及对流，避免假压力的形成。 （2）避免物料的沉积、分层。
• 设备严密度试漏应包括哪些范围 (1)罐体：包括轴封，进出料阀，移种补料阀，夹套进 水及冷水回水阀，空气进罐阀，油、糖、酸、氟物料 阀，取样及冲视镜阀，以及各阀所属的小排汽阀。 (2)空气过滤器，法兰接口床垫，压力表丝口等。 (3)油、糖罐(补料罐)：包括进空气阀、蒸汽阀、出料阀， 以及各小排汽阀。 (4)与单体罐相连结的各系统管道分配站阀及小排汽阀。 上述各类阀门的阀座、阀芯、平面盘根，管件阀们的丝 口，焊疤接口，都应进行严密试漏。
• 2.1.3在灭菌过程中要控制好培养基的泡沫 灭菌时，随着罐温的上升，培养基中的有机氮源 因配比、品种、装量的差异，或者由于用汽不当会产 生大量的泡沫。这些泡沫的内部是空气，由于空气的 比热大，液体的比热小，泡沫便成为隔热层，蒸汽热 量难以穿透，杂菌不易被杀灭。尤其是发生泡沫顶罐 逃液，或在培养液表面形成厚厚的泡沫层都易使培养 基灭菌不彻底，是灭菌操作应防止的弊病。选择适当 的原料配比和培养基装量，提高原材料质量，消前适 量补加油脂或者化学消泡剂，讲究合理的用汽操作可 以防止在培养基灭菌过程中泡沫失控。
发酵染菌的危害
• 发酵染菌能给生产带来严重危害， 防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重 要工作内容。尤其是无菌程度要求高的 液体深层发酵，污染防止工作的重要性 更为突出。
本次学习的内容
• • • • • 灭菌或消毒前的准备工作 灭菌操作 染菌的后果﹑预防及处理 染菌分析 补充
• 集气筒试漏法（用不到） 用集气桶试漏的目的是：(1)检查罐上各管道 (包括小排气管道)是否通畅。(2)检查罐上所有的管道 及小排气阀的阀门蕊子是否有漏。 使发酵罐的管道小排气终端都集中在一个排气 桶中，将料液残渣、冷凝水及蒸汽等自小排汽阀排出。 集气桶中盛满自来水，把下水阀关死。罐内充满空气， 使具有一定工作压力。接着将罐上管道阀门及所有的 小排气阀全关死，看集气桶内有无气泡泛出。如没有 气泡，说明所有阀心都不漏。如果有气泡出现，看气 泡在集气桶内的位置，与哪一条管路有关系，再进一 步将该管路阀门关闭，小排气阀门开启，看该管路阀 门是否有漏，再将小排气阀门关闭，管路上的阀门打 开，看小排气阀门是否有漏。
发酵车间复产时，消毒工还应根据复产总进度做好如 下工作。 (1)提前三天消总空气系统，做到无死角，消后吹干。 (2)提前两天对种子罐进行预消，进无菌试验罐。 (3)提前一天对发酵空间、下水道、取样漏斗进行甲 醛消毒。 (4)对各管路汽封、取样管汽封，可提前一天进行 。
2﹑灭菌操作
• 灭菌工艺控制点选择的依据是杂 菌的含量尤其是芽孢杆菌的含量，被灭 菌物料的性质，设备结构及死角，物料 的体积，细菌的致死范围，总蒸汽的质 量及压力，消后营养成份的破坏以及上 述几方面的综合考虑。
• 1．2物料
培养基实罐灭菌前要做到物料过筛入罐 在培养基配制过程中往往会混入绳子、纸片等包 装杂物。培养基成份中除少量可溶性糖、氮和无机盐 外，大部分为颗粒性物料。有些原料如酵母粉、蛋白 胨等在加热配制过程中往往易结团结块。有些原料如 淀粉在配制过程或水解不完全时也会结成团块。根据 热传递原理蒸汽接触颗粒加热时，颗粒的中心温度达 到颗粒表面同样温度所需的时间(响应时间)和颗粒大 小的直径有关，颗粒越大，响应时间越长，颗粒越小， 响应时间越短。为了确保蒸汽的热穿透力，缩短响应 时间，培养基在配制时必须做到物料过筛后进入罐内， 一般控制筛孔直径为5~6mm，以有利于灭菌。
• 3）试漏方法
• 肥皂水试漏 (1)设备容器和管道必须具有足够的工作压力(一般为 0.08~0.1兆帕以上)。 (2)被试漏的容器和管道不能有料液。 (3)被试漏对象不能热烫。 (4)管道及阀门要畅通。 (5)被试漏处一定要有肥皂水浸湿。 在试漏过程中通过眼看、手摸、耳听来仔细认真地进行 观察和判断；不能放过一个泄漏点。
1﹑灭菌或消毒前的准备工作
•1．1设备方面
• 1）消毒前空罐的准备 主要有三个方面。 （1）罐内外设备的检查。 A、罐内传动设备如搅拌轴、搅拌叶、底瓦、拉杆的牢固、 磨损、转动情况有无异常。 B、罐内管路有无穿孔、堵塞、断裂。其中包括夹层或蛇形 管的严密度检查。 C、罐外设备、管路检查有无泄漏、堵塞。阀门换垫片。 （2）罐内死角如罐壁、罐底、托板、蛇管、档板背后堆积物 的清除。 （3）罐体焊缝、阀门、法兰、三通的严密度检查，防止泄漏。
实消过程中突然停搅拌怎么办?
• 2.1.2使用蒸汽前必须排尽蒸汽管道内的冷凝水 蒸汽管道内由于常温的冷却作用必然有较多的残 存冷凝水，冬季或较长时间未使用的蒸汽管道内残存 冷凝水更多。这些冷凝水中夹带着大量铁锈及杂物， 如不将其排尽，在通蒸汽时会直接引入罐内，或堵塞 轧坏阀门，或者污染培养基和增加消后体积。尤其是 在空气过滤器灭菌时会湿透过滤介质，降低过滤效率， 甚至堵死纤维介质的过滤微孔，使之失效，所以必须 在使用蒸汽前排尽蒸汽管道内的冷凝水。
• 1．3人员
灭菌操作时应注意的安全问题 (1)压力容器的开盖或维修必须先切断压力源，确认 无压力后方可进行，严禁带压开盖拆阀。 (2)下罐检修或洗罐必须检查并确认搅拌电源已经切 断，罐上有人监护方可下罐操作。 (3)灭菌操作时应戴好劳防用品，开启阀门时人的身 体应当侧向阀门，以防不测引起烫伤。 (4)开启阀门时应事先确认管道的走向，防止气汽液 料引入旁路。排汽时应防止排出的蒸汽冲及人身和电 气设备。 (5)高温操作时必须保护好罐上视镜玻璃，严禁用冷 水冲洒或硬物锐器撞击而引起爆裂，亦减少向视镜内 窥视以免发生人身事故。 (6)产格遵守压力容器耐压规定。高温灭菌后的不得 关死排汽和用冷水冷却，防止产生负压损坏设备(空消 情况)。
• 2）灭菌前要对设备严密度进行试漏 抗生素发酵是一个无菌培养过程，必须 在密闭的设备条件下进行。发酵过程中还必须 进行接种，补加糖、油物料，加空气等工艺操 作。发酵罐内虽然保持正压，但是一旦遇到突 然停电、停空气、泡沫窜顶等异常情况，如果 设备渗漏，将导致负压抽吸使发酵染菌。因此 设备严密度是防止染菌的基本条件。
•ຫໍສະໝຸດ Baidu
实消过程中的三要素是: (1)发酵罐及附属阀门管线无泄漏，无 死角、无堵塞。 (2)灭菌时夹层或蛇管内冷水彻底排尽。 (3)灭菌时做到进汽量分主、次，以加 速热传递的对流，避免假压力。
• 2．1灭菌操作 • 2.1.1实消过程中要开动搅拌 实消全过程中，开动搅拌的目的是： （1）使消毒灭菌的物料均匀受热，加速热 传导及对流，避免假压力的形成。 （2）避免物料的沉积、分层。
• 设备严密度试漏应包括哪些范围 (1)罐体：包括轴封，进出料阀，移种补料阀，夹套进 水及冷水回水阀，空气进罐阀，油、糖、酸、氟物料 阀，取样及冲视镜阀，以及各阀所属的小排汽阀。 (2)空气过滤器，法兰接口床垫，压力表丝口等。 (3)油、糖罐(补料罐)：包括进空气阀、蒸汽阀、出料阀， 以及各小排汽阀。 (4)与单体罐相连结的各系统管道分配站阀及小排汽阀。 上述各类阀门的阀座、阀芯、平面盘根，管件阀们的丝 口，焊疤接口，都应进行严密试漏。
• 2.1.3在灭菌过程中要控制好培养基的泡沫 灭菌时，随着罐温的上升，培养基中的有机氮源 因配比、品种、装量的差异，或者由于用汽不当会产 生大量的泡沫。这些泡沫的内部是空气，由于空气的 比热大，液体的比热小，泡沫便成为隔热层，蒸汽热 量难以穿透，杂菌不易被杀灭。尤其是发生泡沫顶罐 逃液，或在培养液表面形成厚厚的泡沫层都易使培养 基灭菌不彻底，是灭菌操作应防止的弊病。选择适当 的原料配比和培养基装量，提高原材料质量，消前适 量补加油脂或者化学消泡剂，讲究合理的用汽操作可 以防止在培养基灭菌过程中泡沫失控。