动物组织基因组的提取讲解
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml 的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入 1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μｌ，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
基因组dna提取实验报告
基因组dna提取实验报告基因组 DNA 提取实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取高质量的基因组DNA，以便进行后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
通过本次实验，掌握基因组 DNA 提取的基本原理和操作方法，了解影响 DNA 提取质量的因素，并对提取的 DNA 进行质量检测和分析。
二、实验原理基因组DNA 提取的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜，使细胞内的物质释放出来，然后通过蛋白酶 K 消化蛋白质，去除 RNA 等杂质，再利用酚/氯仿等有机溶剂抽提，将蛋白质、多糖等杂质去除，最后通过乙醇沉淀或异丙醇沉淀得到纯净的基因组 DNA。
三、实验材料与试剂（一）实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）2、植物叶片3、细菌培养物（二）实验试剂1、细胞裂解液（含 TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS 等）2、蛋白酶 K3、酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）4、无水乙醇5、 70%乙醇6、 RNA 酶 A7、 3M 醋酸钠（pH 52）8、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、紫外分光光度计5、电泳仪及电泳槽四、实验步骤（一）动物组织基因组 DNA 提取1、取约 01g 新鲜的动物组织，放入 15ml 离心管中，加入 1ml 细胞裂解液，用剪刀将组织剪碎，然后在冰上放置 10min。
2、向离心管中加入20μl 蛋白酶 K（20mg/ml），充分混匀，在 55℃水浴锅中孵育过夜，直至组织完全消化。
3、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管10min，使溶液充分混匀。
4、 12000rpm 离心 10min，将上清液转移到新的离心管中。
5、重复步骤 3 和 4 一次。
6、向上清液中加入 1/10 体积的 3M 醋酸钠（pH 52）和 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
动物基因组DNA的提取流程总结
动物基因组DNA的提取1.切取组织5g 左右，用组织粉碎机或研钵将细胞分离。
注：1）少量结缔组织并不影响最后得到的DNA勺质量；2）若标本为血液，则只需肝素抗凝、离心后取白细胞层；3）若为培养的贴壁细胞，则用胰酶消化后收集，PBS洗涤即可。
2.加入5ml DNA提取缓冲液，（10mmol/L Tris-CI ,0.1 mol/L EDTA 0.5% SDS）, 混匀。
注：1）最好先加入Tris-Cl、EDTA再加入SDS 2）最好一边匀浆，一边加入液体，使之充分混匀。
3.加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml，混匀，37C温浴过夜。
注：1）致密组织（如小鼠尾巴）可以适当延长蛋白酶的作用时间；2）若组织量很大且组织比较疏松（如动物脾脏），或对所提取的DNA完整性要求不高时，可以不用蛋白酶K,而是剧烈振荡20分钟，将组蛋白与DNA分离。
此法可能会使部分DNA链断裂，但足以达到一般实验要求，并不影响后续处理；3）也可同时加入RNase。
4.加入等体积的酚－氯仿－异戊醇混合物（25:24:1），剧烈振荡10分钟，冰浴10 分钟，2500rpm 10 分钟离心收集水相。
注：不要混带中间蛋白层。
5.加1/10 体积3mol/L NaAc 及 2 倍体积冰预冷的无水乙醇，颠倒混匀。
冰浴1小时，沉淀DNA注：冰浴时间从10分钟到2小时均可，只是时间太短会影响到最后的产量，但不影响质量。
6.用玻棒轻搅钩出DNA沉淀，置于另一离心管中。
注：如果确信没有混入蛋白，也可用离心的方法去除液体，但应在加入蛋白酶K的同时加入RNaseA7.70%^醇洗涤，晾干，加适量TE或灭菌水溶解，-20 C保存。
注：若要长久保存DNA（数年以上），最好将其沉淀以无水乙醇封闭后，置于-80 °C。
动物基因组DNA的提取
动物基因组DNA的提取[实验原理]在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于L嘴菌体构建基因组文库和Southern分析。
通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA 的琼脂糖凝胶电泳技术。
[仪器、材料与试剂](一)仪器1.台式离心机2.玻璃匀浆器3．高压灭菌锅4．恒温水浴(二)材料1．1.5mL微量离心管2．微量取样器和吸头3．无菌过滤器(一次性)4．10 mL注射器5．鼠肝6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)7.十二烷基硫酸钠(SDS)8．乙二胺四乙酸(EDTA)9．蛋白酶K10．RNA酶11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI+HindⅢ相对分子质量标准物(三)试剂1、1.5 mol／L NaCl2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.03．0.5 mol／L EDTA pH8.04．3 mol／L NaAc pH5.2以上均高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／mL配好后用一次性过滤器过滤，-20 保存(教师配制)6.组织匀浆液100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)7．酶解液200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／mL蛋白酶K，1％SDS8．无DNA酵的RNA酶：将胰RNA酶溶解于10mmol／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol ／L NaCl溶液中，浓度l0mg／mL，于100℃水浴处理15min，以降解DNA酶，缓慢冷却到室温，-20℃保存9．TE缓冲液：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)10．平衡酚(pH8.0)：氧仿：异戊醇=25：24：1<体积比)11．氧仿：异戊醇=24：l(体积比)12．5xTBE 5．4gTris，2．75g硼酸2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100mL；13．6x上样缓冲液o．25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液14．λDNA／EcoRI+／HindⅢ相对分于质量标准物片段(bP)21 227，5148，4 973，4 268，3 530，2 027，1 904，1 584，1 315，947，831，564，125[实验步骤]本实验在无液氮的条件下，铡备鼠肝DNA，与有液氮条件下相比，产量和质量都有所下降。
动物组织基因组DNA的提取
实验一动物组织基因组DNA的提取一、实验目的掌握从动物组织中提取总DNA的方法。
二、实验原理DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等实验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中最重要、最基本的操作之一。
染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。
从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。
整个实验可分为细胞裂解、DNA分离与纯化和DNA 的洗脱收集。
1.细胞裂解：酶法（蛋白酶K）。
2. DNA 分离与纯化：细胞破碎后，常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA，主要有硅基质材料、阴离子交换树脂和磁珠等。
本实验采用TIANGEN血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒中的硅基质材料的离心吸附柱。
硅基质材料吸附核酸的原理，主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
三、材料、试剂和设备1.材料：动物组织2.试剂：TIANGEN血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒，无水乙醇等3.设备：离心机，微量移液器等四、实验步骤1.处理材料：取动物组织10mg，尽量切碎，加200μl 缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
2.加入20μl蛋白酶K溶液，混匀后56℃水浴，直至组织溶解（不同组织裂解时间不同，通常需1-3小时即可完成）。
简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
（细胞裂解）3.加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁水珠。
（溶解DNA）注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。
如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA不纯。
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
实验四动物血液基因组DNA的提取ppt课件
用于稀释和清洗实验器 具。
用于离心和吸液操作。
实验设备
紫外分光光度计
用于检测DNA浓度和质量。
离心机
用于高速离心，使细胞沉淀。
移液器
用于准确移取液体。
冰箱和冷藏设备
用于储存试剂和血液样本。
微波炉或恒温水浴锅
用于加热和融化相关试剂。
03
实验操作步骤
样本准备
01
02
03
收集动物血液样本
使用无菌注射器采集动物 静脉血液，存放在无菌的 离心管中。
实验注意事项
样本来源
确保所使用的动物血液样 本来源合法，并符合伦理 要求。
试剂储存与使用
严格按照试剂说明书进行 DNA提取试剂的储存和使 用，避免试剂受到污染或 失效。
仪器操作
正确操作和使用相关仪器 设备，如离心机、PCR仪 等，确保实验结果的准确 性。
异常情况处理与应急措施
皮肤接触
若发生皮肤接触，立即用大量 清水冲洗，并及时就医。
//www.example/genomics-experimental-techniques)
THANKS。
了解基因组DNA的 理化性质和提取过程 中的注意事项。
实验原理
基因组DNA是生物体遗传信息 的载体，存在于细胞核中。
通过离心分离动物血液中的白细 胞和红细胞，利用细胞裂解液裂 解白细胞，释放出基因组DNA
。
利用吸附柱去除杂质，如蛋白质 和RNA，纯化基因组DNA。
实验步骤概述
1. 准备实验器材和试剂：离心 机、移液器、离心管、吸附柱 、细胞裂解液、洗涤缓冲液等 。
吸入
若发生吸入，立即离开实验区 域，呼吸新鲜空气，并及时就 医。
化学品泄漏
基因组DNA提取
基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。
实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。
置于液氮中冻结。
2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。
3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。
4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。
如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。
如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。
5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。
6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。
7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。
二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。
实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。
将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。
2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。
3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告 doc 实验目的：本实验旨在通过提取哺乳动物组织中的基因组DNA，以用于后续的PCR反应、基因测序、遗传变异研究等。
实验原理：哺乳动物基因组DNA提取的一般步骤为组织破碎、细胞膜破裂、蛋白质和RNA去除、DNA纯化、质量检测和保存。
下面介绍各个步骤的细节：1.组织破碎：将样本室温下用离心管剪碎，然后用离心机离心5min，上清液中的细胞保存备用。
2.细胞膜破裂：加入50-100μL裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，1% SDS），温和地在60℃下振荡消化30-60min，使细胞膜破裂。
为避免破坏DNA，需在缓冲液中添加RNase，以消化RNA。
整个过程中需注意避免搅拌过度或泡沫产生，以便保证DNA不被过度破坏。
3.蛋白质和RNA去除：加入蛋白质沉淀剂如氯化钾或盐酸盐，并冷藏至室温，使DNA 和蛋白质发生相互作用并形成凝胶。
离心15-20min使凝胶完整沉淀至管底。
注：蛋白质缓冲液中含氯化钾或盐酸盐，可使DNA的负电荷阴离子中和而凝聚起来。
此时，可以用琼脂糖凝胶电泳判断DNA的纯度和产量。
还可以用UV法检测DNA的浓度。
4.DNA纯化：将沉淀物用去离子水洗涤一次沉淀，使DNA更为纯洁。
用50%乙醇洗涤一次去除氯离子，离心以去除乙醇。
5.质量检测：用伊曼纹颅（EtBr）染料判断DNA纯度，光谱仪分析DNA浓度和质量。
6.保存：将DNA储存在-20℃的冰箱中，避免在各操作步骤中破坏DNA性状。
实验步骤：材料：1.全身组织2.标签离心管3.10 mM TrisHCl pH8.5，1 mM EDTA溶液5.RNase A（10 mg/ml）6.盐酸盐7.琼脂糖8.去离子水9.乙醇将实验室提供的全身组织（100mg）裹在湿润的巾纸中，然后将其研磨成粉末。
将粉末倒入银离子处理过的离心管中（1.5 mL），加入500μL的10 mM Tris HCl（pH 8.5）溶液中，轻轻振荡使样品完全混合，并置于4℃下保存备用。
动物基因组提取的方法
动物基因组提取的方法嘿，咱今儿就来讲讲动物基因组提取的那些事儿！你想想啊，动物的身体就像一个神秘的宝库，而基因组呢，就是那宝库中最珍贵的宝藏。
要提取这宝藏，首先得选好材料呀。
就像你要去挖宝，总得找个有宝的地方吧。
动物的各种组织都可以成为我们的目标，比如血液、肌肉、肝脏啥的。
然后呢，就得把这些组织处理一下啦。
就跟咱收拾房间似的，把那些乱七八糟的东西清理掉，留下有用的。
接下来就是关键步骤啦！得让细胞破开，把基因组给释放出来。
这就好像打开一个密封的盒子，让里面的宝贝现身。
可以用一些化学试剂或者物理方法来达到这个目的。
比如说，有些试剂就像一把神奇的钥匙，轻轻一扭，细胞就开了。
提取出来后，还得把杂质去掉呢。
这就好比淘米，把那些沙子、石子啥的都筛出去，留下干净的米粒，也就是我们要的基因组。
这一步可得仔细着点儿，不然杂质混进去了，可就不好啦。
然后呢，就得把基因组浓缩一下啦。
想象一下，就像把一大盆水变成一小瓶精华液，让基因组变得更纯更浓。
提取动物基因组可不简单啊，就跟一场冒险似的。
每一步都得小心翼翼，稍有差错可能就前功尽弃啦。
这过程中得有耐心，还得有细心，就跟绣花似的。
你说，要是能成功提取出动物基因组，那得多有成就感啊！那可是解开动物生命密码的钥匙啊！咱就能更深入地了解动物的奥秘啦，多有意思呀！而且这对生物学研究、医学研究啥的都有着重要的意义呢。
总之啊，动物基因组提取虽然有点复杂，但只要咱掌握了方法，有耐心有细心，就一定能成功。
咱就像探险家一样，在动物的世界里寻找那珍贵的宝藏，为科学的进步贡献自己的一份力量！怎么样，是不是感觉很神奇很有趣呀？还等啥，赶紧去试试吧！。
动物基因组dna分离的原理
动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。
以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。
一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。
有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。
首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。
然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。
最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。
无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。
这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。
首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。
然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。
第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。
DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。
在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。
然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。
有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。
加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。
离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。
电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。
DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。
然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。
动物基因组的提取原理
动物基因组的提取原理
动物基因组的提取原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞溶解：首先需要将动物细胞进行溶解，以释放细胞内的核酸。
常用的方法包括直接破碎细胞壁、低渗透压溶解细胞膜等。
2. 蛋白质降解：细胞溶解后，利用蛋白酶等酶类将细胞内的蛋白质降解。
这样可以使DNA或RNA与蛋白质的结合解开，便于后续步骤的处理。
3. DNA或RNA的纯化：通过加入盐溶液，使DNA或RNA与其他杂质分离。
常用的方法包括酚-氯仿法、离心柱法等。
酚-氯仿法是将DNA或RNA溶液与酚和氯仿相混合后，通过离心使DNA或RNA落入有机相中，将有机相转移至新的离心管中，用异丙醇沉淀，最后用洗涤液洗净获得纯化的DNA或RNA。
4. DNA或RNA的测定和分析：纯化后的DNA或RNA可以通过吸光光度计进行测定，以确定其浓度和纯度。
此外，还可以使用琼脂糖凝胶电泳等方法对DNA 或RNA进行分析，了解其大小、形态、片段等信息。
总的来说，动物基因组的提取过程主要包括细胞溶解、蛋白质降解、DNA或RNA 的纯化以及测定和分析等步骤。
这些步骤的目的是使DNA或RNA从细胞中获得并纯化，以便进行后续的实验操作。
动物组织基因组DNA的提取
二、实验原理
7、核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质 温度： ① 4℃ ——最佳最简单； ② -70℃——长期保存的良好温度； ③ -20℃ ； 保存介质： TE缓冲液（最常用） 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0 1mmol/L EDTA pH 8.0
三、实验试剂、仪器和耗材
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解； ② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法——蛋白酶、胰蛋白酶； 冰冻法 —— 反复冻融或液氮冻后 组织捣碎； ③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎； 以上原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。 DNA ，抑制 Dnase 活力很容易，但防止机械拉 力张力更重要； RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但 抑制 Rnase 活力较难，故在 RNA 提取中设法抑制 Rnase更重要。
二、实验原理
4、核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质， 用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂， 去垢剂的作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； ② 溶解核糖体上面的蛋白，使其解聚，将核酸 释放出来； ③ 对Rnase和Dnase有一定的抑制作用； 如: SDS，脱氧胆酸钠，4-氨基水杨酸钠，萘-1， 5-二磺酸钠等
实验一 动物肝脏组织中基因组DNA提取和鉴定
微溶于低盐溶液（0.14mol/L）
RNA-Pro(RNP) 溶于低盐溶液（0.14mol/L） (存在于核仁及细胞质) 微溶于高盐溶液（1mol/L）
8
三、仪器和试剂
1、仪器： 低速离心机、落地式高速冷冻离心机、摇床、稳 压电源、电泳槽、凝胶成像系统。 2、试剂： 0.14mol/L NaCl－0.15mol/L EDTA(pH=8.0)； 2.5mol/L NaCl；25% SDS；氯仿/异戊醇=24:1 （V/V）；95%乙醇；1×TAE；琼脂糖；上样缓冲液。
10
四、实验步骤
1、DNA的提取 （4）将上述沉淀转移至100mL锥形瓶中，加入10mL预冷的 0.14mol/L NaCl-0.14mol/L EDTA溶液，缓慢搅拌，同时加 入750uL 25%SDS溶液，用封口膜封口，置于摇床中，30℃ 150r/min震荡30min。 （5）加入7mL 2.5mol/L NaCl，用封口膜封口，置于摇床中， 30℃ 150r/min震荡10min。 。 （6）再加入17mL 氯仿:异戊醇溶液，用封口膜封口，置于 摇床中，30℃ 150r/min震荡20min。 。
离子去污剂法：利用SDS、CTAB（十六烷基三甲基溴化
铵）等去污剂使蛋白质变性，直接从生物材料中提取 DNA。
苯酚抽提法：苯酚既是蛋白变性剂，又能抑制DNase的 降解。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA连接键已 断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。 蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
11
四、实验步骤
1、DNA的提取 （7）将混合液转移至50mL刻度离心管中， 3500r/min离心 10min ，取上清至一个新的50mL刻度离心管。 （8）加入20mL95%乙醇溶液，上下颠倒混匀后，出现丝状 物，用枪头挑取丝状物，或者3500r/min离心5min 。 （9）弃去上清液（注意：缓慢倒去上清液），沉淀物质即 为DNA，空气干燥后即可加入适量的TE缓冲液。
实验二动物基因组DNA的提取
01
02
03
04
掌握了动物基因组DNA 提取的基本原理和操作 流程。
了解了不同动物组织对 DNA提取的影响因素和 注意事项。
学会了使用离心机、移 液器等实验器材，提高 了实验操作技能。
培养了团队合作和实验 数据分析的能力。
本实验的不足之处和改进建议
实验操作过程中，部分步骤不
够规范，可能导致提取的DNA
学生将了解基因组DNA提取在法医学、生物多 样性保护和生物进化等领域的应用，以及其在 解决人类健康问题中的潜在价值。
02
实验原理
基因组DNA的组成和结构
基因组DNA
是指构成生物体基因组的全部DNA， 它包含生物体的全部遗传信息。
DNA结构
DNA由四种不同的脱氧核苷酸组 成，它们按照一定的顺序排列， 形成两条互补的螺旋链。
DNA提取的基本原理
01
02
03
细胞裂解
通过物理或化学方法将细 胞膜破裂，释放出细胞内 的DNA。
核酸吸附
利用核酸结合物（如硅胶、 玻璃等）将DNA吸附，去 除其他杂质。
洗涤与洗脱
通过洗涤去除杂质，然后 用洗脱液将DNA从吸附剂 上洗脱下来。
动物基因组DNA提取的常用方法
酚-氯仿提取法
利用酚-氯仿混合液反复抽提细胞 裂解物，使DNA充分释放并溶解 在氯仿中，然后进行离心分离。
纯度检测
利用紫外分光光度计测定DNA样品在260nm和280nm处的吸光度，计算 OD260/OD280比值，用以评估DNA样品的纯度。比值接近1.8表示DNA样品 纯度较高。
DNA提取的成功率和产量分析
成功率分析
根据DNA提取的质量和纯度检测结果， 评估提取的DNA是否可用于后续实验， 如PCR扩增、测序等。提取质量良好 且纯度较高的DNA样品成功率较高。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
实验十动物组织DNA的提取
试剂
提取缓冲液：200 mmol/L Tris· Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS 24：1的氯仿：异戊醇 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方(1000ml):
操作步骤
1. 肝脏1g左右, (剪碎) 置研钵中，加入2-3mL提取缓 冲液， 研磨成浆；吸入10mL EP管中，摇动混匀； 2. 60℃水浴保温15min，不时颠倒混匀； 3. 室温下3000rpm离心7min； 4. 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1 的氯仿：异戊醇，上下颠另一只离心管中； 7. 重复4-5步2-3次; (此步不做） 8. 加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现 絮状DNA沉淀。
实验原理
细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 中，而不溶于有机溶剂。 目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 CTAB法和SDS法（表面活性剂，能溶解细胞膜 和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以 游离出来）。
动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首 先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等 细胞内杂质污染；最后纯化出ＤＮＡ。
DNA提取原则
保证DNA结构的完整性
纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
结果分析与讨论
动物组织中 总DNA的提取
Total DNA extraction from eukaryotic tissue
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
RNA（核糖核酸）
存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬 菌 体，其或只含DNA，或只含有RNA。
2、核酸制备的一般原则 核酸的理化性质
在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在
微溶于水，不溶于乙醇，氯仿等有机溶剂
在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
核酸保存的主要条件是温度和介质
温度： 4℃ 样品经常使用 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存,避免反复冻融
保存介质： 灭菌水 TE缓冲溶液(最常用)： 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
三、动物基因组DNA的提取
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
• •
组织匀浆液 （装入10ml离心管中） 10ml
100mmol／L NaCl：0.2ml（5M NaCl） 25 mmol／L EDTA(pH8.0)： 0.5ml（ 0.5M EDTA pH8.0) l0mmol／L Tris·HCIpH 8.0)：0.1ml（1M Tris·HCIpH 8.0) 加三蒸水: 9.2ml
DNase抑制
①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase基本可以全部失活。
②去垢剂、蛋白变性剂及DNase抑制剂也可使 DNase失活。
RNase抑制
①操作要带手套。 ②所有器皿要严格消毒， ③试剂处理 ④低温操作 ⑤在分离过程中要加入一定的RNase抑制剂。
离心机， 涡旋振荡器
试剂：RNase A、Proteinase K、Lysis Buffer 、Wash buffer
A、 Wash buffer B、TE buffer。
实验前：Wash buffer A中加入18ml 无水乙醇，充分混匀； Wash buffer B中加入64ml 无水乙醇，充分混匀
2. 操作步骤
1）样品预处理 取新鲜动物组织25-50 mg（组织量不宜过多，否则容易 导致裂解不完全而堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小 块，直接放入匀浆器中匀浆。
2）加入600 μl 的Lysis Buffer，颠倒充分混匀。如需消 化RNA，可加入20 μl RNase A，颠倒混匀，室温放置5 min。 3）加入10 μl Proteinase K，混匀。56℃水浴45 min-1 h， 其间颠倒混匀数次直到看到组织完全裂解，裂解完全的 标准为液体变得清亮及粘稠。（此步骤可以过夜处理）
常用的RNA酶抑制剂
• 焦磷酸二乙酯（DEPC） • 异硫氰酸胍
抑制强烈、不彻底 有效抑制、分解核蛋白
• 氧钒核糖核苷复合物
• 其它：SDS、尿素、硅藻土等
有效抑制
• RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin） 有效抑制
有效抑制
核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸 提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂。 去垢剂的作用： 1．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出 来； 3．对RNase、DNase有一定的抑制作用。 如：SDS、脱氧胆酸钠、4-氨基水杨酸钠、萘-1.5-二磺酸钠、 三异丙基萘磺酸钠
放置5min
混匀
56℃水浴，45min 颠倒混匀数次
加800ul无水乙醇 12000rpm，10min 转入离心柱 12000rpm，1min 取上清转入新离心管 可分次转入 离心 混匀 离心 12000rpm，1min 12000rpm，1min 弃废液，加入 弃废液，加入 700ul Wash buffer B 700ul Wash buffer A 离心 离心 12000rpm，2min 12000rpm，1min 弃废液，加入 弃废液 500ul Wash buffer B 离心 离心 柱膜中央加100ul 将离心柱置新离心管中， 开离心柱盖，放置5min
三、动物基因组DNA的提取
（2）阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 可以直接从生物材料中 提取DNA。 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合, 而阴离子 去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。
三、动物基因组DNA的提取
（3）苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。 用苯酚处理匀浆液时, 由于蛋白与DNA 连接键已断, 蛋白分子表面又 含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
计算方法： 5 mol／L NaCl 100mmol／L 5 mol／L× x ＝ 0.1mol／L ×10ml 0.2ml
3. 注意事项——核酸分离、纯化
采用吸附材料吸附的方式分离DNA时，应提 供相应的缓冲体系 采用有机（酚/氯仿）抽提时应充分混匀，但 动作要轻柔 离心分离两相时，应保证一定的转速和时间 针对不同材料的特点，在提取过程中辅以相 应的去杂质的方法
3. 注意事项——核酸沉淀、溶解
当沉淀时间有限时，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀，沉淀会更充分 沉淀时加入1/10体积的NaAc（pH5.2，3M），有利于充分沉淀 沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等 晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥） 若长期储存建议使用TE缓冲液溶解 TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase pH值为8.0，可防止DNA发生酸解
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次 重复操作，再合并含DNA 的水相。
利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此法的特点是使提取 的DNA保持天然状态 。
DNA的提取：苯酚抽提法（试剂盒）
1. 材料、设备及试剂 材料：冷冻或新鲜猪肝组织 设备：EP管、微量取液器(20μl, 200μl, 1000μl)， 台式高速
4）12,000 rpm 离心10 min，将上清转入新的离心管 中，加入800 μ l 无水乙醇，混匀。
5）将液体转入离心柱（一次加不完，可分次转入）， 12,000 rpm 离心1min，弃废液。
6） 加入700 μ l Wash buffer A（使用前请先检查 是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心30 s -1 min，弃废液。 7）加入700 μl Wash buffer B（使用前请先检查是 否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm 离心30 s -1 min，弃废液。
3. 核酸制备的一般步骤：
I.材料准备 破碎组织细胞 II.破碎细胞或包膜－内容物释放
提取
III.核酸分离、纯化
纯化
IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质
V.核酸溶解在适量缓冲液或水中
1）破碎细胞（防止核酸酶的作用） 微生物：溶菌酶、SDS裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶， 冰冻法：反复冻融或液氮冻后组织捣碎。 动物：液氮处理后用匀浆器或者研钵破碎。 细胞器DNA：首先纯化细胞器。 以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂
12000rpm，30sec 取离心后所得溶液再加入 放置3min 离心柱中，放置2min 离心 65℃预热的TE buffer 12000rpm，2min 收集离心后所得溶液，即为纯化后基因组DNA 离心
3. 注意事项——材料准备
最好使用新鲜材料，低温保存的样品材料不要 反复冻融
提取血液基因组DNA时，要选择有核细胞 （白细胞） 细胞培养时间不能过长，否则会造成DNA降 解
11）离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min， 12,000 rpm 离心2 min。所得的溶液为纯化后的基因组DNA。
称取肝脏0.5g
冰冷的生理盐水清洗（3次） 5ml生理盐水
剪碎
匀浆
各组取1/10组 织细胞液
移至1.5ml离心管
至液体变清亮 及粘稠
加600ul Lysis Buffer颠倒混匀， 加10ul Proteinase K 加20ul RNase A
DNA溶液粘度很大，RNA的粘度较小 在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来
2、核酸制备的一般原则
分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子(蛋白，脂类，多糖类)的污染。 核酸纯化应达到的要求： ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。
核酸制备中常用的蛋白质变性剂
作用： 1.使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造 成蛋白污染。
2.使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。
3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
核酸制备中常用的酶 DNase:降解DNA RNase：降解RNA 蛋白酶K：降解蛋白质 溶菌酶：破碎细胞
核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解：排除核酸酶。
⑤排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时，应去除 RNA，反之亦然。
核酸酶的抑制和抑制剂 降低温度，改变pH及盐的浓度，都利于对核酸酶活性 的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然， 几个条件并用更好。 对于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止机械张力 拉断则更重要。 对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑 制RNase活力较难，故在RNA提取中设法抑制RNase更 重要。