常见病原性细菌的分离鉴定方法1
重要动物病原微生物的分离与鉴定
重要动物病原微生物的分离与鉴定动物疾病是农牧业生产中的一大难题，而许多疾病的病原体是微生物。
为了有效地控制和防治这些病害，分离与鉴定动物病原微生物成为一项至关重要的工作。
本文将重点介绍重要动物病原微生物的分离与鉴定方法。
I. 分离方法分离动物病原微生物的主要目的是将其从感染动物体内提取出来，并进行纯化，以获得单一菌株。
下面讨论几种常用的分离方法。
1. 直接涂片法直接涂片法是最简便的分离方法之一。
将样品（如组织、粪便、血液等）直接取少量涂于无菌玻片上，然后进行染色观察。
通过观察细菌形态、胞内结构等特征，可以初步判断病原微生物的种类。
2. 细菌培养法细菌培养法是最常用的分离方法之一。
将样品进行适当稀释后，在含有养分的琼脂平板上均匀涂布，然后在适宜温度和湿度下培养。
经过一段时间后，可以观察平板上是否有单一的菌落形成。
通过进一步的鉴定试验，可以确定其是否为目标病原微生物。
3. 病毒分离法病毒的分离相对较为复杂，通常需要使用细胞培养或小鼠接种等方法。
细胞培养法是将样品接种于培养瓶中的细胞中，借助细胞的生长状况来判断是否有病毒存在。
小鼠接种法则是将样品注射到小鼠体内，观察小鼠是否出现相应病症。
这些方法都需要一定的实验条件和设备支持。
II. 鉴定方法鉴定动物病原微生物是确定其属于何种种类的过程，常用的方法有以下几种。
1. 形态学鉴定形态学鉴定是通过观察微生物的形态特征来确定其种类。
包括细菌的形态、大小、颜色、形状等特征，以及病毒的结构和形态等。
形态学鉴定通常需要使用显微镜等实验设备，并借助专业知识进行判断。
2. 生理生化鉴定生理生化鉴定是通过微生物的生理特性和生化反应来确定其种类。
包括对微生物在特定条件下的生长特性、代谢方式、产物生成等方面的观察和实验。
这需要采用一系列专门的检测方法和试剂，如对酸碱度、气体生成、酶活性等进行检测。
3. 分子生物学鉴定分子生物学鉴定是近年来发展起来的一种鉴定方法，主要通过对微生物基因组的分析来确定其种类。
病原菌的分离培养
五、实验方法及步骤 （2）右手持接种环，从病料中取少许材料涂布于培养基 边缘，然后将接种环上多余的材料在火焰中烧毁，待接种 环冷却后，再与所涂材料的地方轻轻接触，开始划线，方 法如图3-1。 （3）接种完毕，灼烧接种环，将培养皿盖好，在皿底上 作好日期和接种者等标记，平皿倒扣，置37℃培养18-24h 观察结果。
避免接种环上可能存在 的微生物污染培养物
防Hale Waihona Puke 温度太高 杀死菌种杀死上次划线结束 后接种环上残留的 微生物，使每次划 线的微生物来自上 次划线末端
五、实验结果 大小、性状、边缘、光滑/粗糙、隆起度、颜色等。
六、实验结论及讨论/注意事项
技能 可疑病原菌的分离培养、移植
三、实验内容 在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。
四、实验材料 鸡粪便、接种环、普通琼脂平板、酒精灯、恒温培养箱
四、实验方法及步骤 其目的是使被检查的病料做适当的稀释，以期获得单
个的菌落，便于进行菌落性状的观察，对分离的细菌做初 步鉴定。 划线分离培养法： （1）左手持皿，用左手的拇指、食指及中指将皿盖揭开 呈20°左右的角度(角度愈小愈好，以免空气中的细菌进 入皿中将培养基污染)。
技能 可疑病原菌的分离培养、移植
一、实验目的 1、掌握细菌分离培养和移植的方法 2、熟悉无菌操作方法
二、实验原理 平板划线分离法是一种用于从混合的微生物群落中分离出单个
细胞的方法。该方法的原理是过接种环在平板培养基表面进行多次 由点到线的划线稀释，从而使微生物样品在固体的培养基表面被分 散和稀释，最终形成多个独立的、肉眼见的细胞团，即菌落。
病原菌分离培养与鉴定
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
1929 – Penicillin discovered
1930s– Sulfa drugs discovered
1969 – US surgeon Gen, claims end infectious diseases
Today – Bacteria with multi-drug resistance
Fleming Domagk
一、抗菌药物的杀菌机制
• 抑制细菌细胞壁的合成：青霉素、溶菌酶等 • 影响细菌胞浆膜通透性：多粘菌素等抗生素 • 抑制细菌蛋白质的合成：红霉素、链霉素等 • 抑制细菌的核酸代谢：利福平等抗生素 • 抑制细菌的叶酸代谢：磺胺类等抗生素
Cell wall synthesis
collection and transportation of specimen
避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则
不同期不同标本 用抗生素以前
采集病变明显部位
标本必须新鲜
运送注意保存
细菌感
（二）病原菌分离培养与鉴定：形态学检查
不染色检查法 压滴法 悬滴法 暗视野显微镜法
检查用仪器 普通光学显微镜 light microscope 暗视野显微镜 dark-field microscope 荧光显微镜 fluorescence microscope ……
猪常见细菌性病原菌的分离鉴定及药敏实验研究
猪常见细菌性病原菌的分离鉴定及药敏实验研究作者：方勤来源：《农业开发与装备》 2018年第2期摘要：课题试图通过对重庆涪陵区两规模化猪场送检的病死猪病料进行细菌分离鉴定，掌握川渝地区猪场常见的致病性细菌种类，主要有大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌。
通过对分离的纯化菌进行生化试验和药敏试验，查出耐药，减少治疗错误，并了解其敏感抗生素种类，便于猪场选择治疗方案、节省费用。
利用耐药检测结果控制抗菌药物的应用，减少耐药菌株的出现，选择高效合理的抗菌药物，对于指导临床用药具有重要作用。
在更有效的防治细菌性疾病的同时，能够最大化提高养殖业的经济效益。
关键词：耐药性；抗生素；分离；鉴定1材料与方法1.1材料1.1.1试剂。
普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、营养肉汤培养基、SS琼脂平板和各种微量生化鉴定管。
1.1.2仪器。
LDZX-40B1高压灭菌锅（中国.上海）、电子天平、锥形瓶、灭菌培养皿、生化培养箱、超净工作台。
1.1.3培养基的制备。
营养肉汤：称取12.5g溶于500mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用；营养琼脂：称取33g于1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用；麦康凯琼脂：称取55g溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，经121℃高压蒸汽灭菌20min，置于4℃保存备用。
1.1.4病料。
无菌采取A、B两猪场病死猪心、肺、淋巴等脏器，置于4℃冰箱待检验。
1.1.5抗菌药物。
药敏实验采用的抗生素类药物有TET（四环素）、NT（呋喃妥因）、KAN （卡纳霉素）、GEN（庆大霉素）、VAN（万古霉素）、CIP（环丙沙星）、SXT（复方新诺明）、EM（红霉素）、OFX（氧氟沙星）、CEP（头孢噻吩）。
1.2方法1.2.1分离培养及纯化。
将病料无菌划线接种于普通营养琼脂平板，置于37℃恒温培养箱中培养18～24h，然后用接种环无菌挑取单个完整的菌落，接种于普通琼脂培养基，进行纯化培养得到纯培养物。
医学微生物—常见病原性细菌(肠道杆菌)
病原生物与免疫学
肠道杆菌——志贺菌属
⒈掌握志贺菌属 的致病性及防治原则。 ⒉熟悉志贺菌属 的生物学特征。 ⒊了解志贺菌属 的微生物检查方法。
病原生物与免疫学
志贺菌属
临床病例： 王某，女，18岁。一天前发热38℃，腹痛、腹泻，
水样便。现腹痛加剧，3 便检:镜下满视野白细胞。血液检查:血白细胞为
15000/mm3,中性粒细胞90%。请问： 根据症状初步诊断是什么?
➢ 内毒素肠壁通透性↑内毒素吸收↑ 发热、神志障碍、中 毒性休克等；
➢ 内毒素肠粘膜炎症、溃疡、出血脓血粘液便； ➢ 内毒素肠壁植物神经肠功能紊乱腹痛、里急后重。
病原生物与免疫学
(二)致病性和免疫性
⒉所致疾病 —细菌性痢疾 传染源：病人和带菌者 传播途径：粪-口径 临床类型： 急性菌痢：起病急、病程短
病原生物与免疫学
沙门菌属
临床病例： 患者，男，20岁。腹泻8天，大便每天5-6次，偶尔
有粘液和血丝，伴食欲差。之后持续高热，表情冷漠。 体检:肝脏右肋下2cm，脾脏左肋下1cm，躯干腹侧
可见散在的，压之退色的淡红色皮疹。血液检查:白细 胞数量减少。
问题: 你的初步诊断是什么?依据是什么? 需要进一步进行的检查是什么?
病原生物与免疫学
志贺菌属
志贺菌属细菌又称痢疾杆菌，是人类细菌性 痢疾的病原菌。
细菌性痢疾是一种常 见病,主要流行于发展中 国家,全世界年病例数超过2亿例,其中500万例需住 院治疗,年死亡病例达65万例。
病原生物与免疫学
志贺菌属 (一)生物学性状 1.形态与染色：革兰阴性杆菌。无鞭毛，有菌毛。
志贺菌，革染，×1000
鼠伤寒沙门菌 革染，×1000
鼠伤寒沙门菌 电镜，×20000
常见病原菌分离方法
常用的几种典型的病原菌分离方法1．斑点病原菌的分离从病斑部分切取每边3～5 mm的小块组织，在70％酒精中浸数秒钟后，移入0.1％的升汞水溶液中处理3～5 min，以灭菌水冲洗3次，移置培养皿的培养基中，然后培养。
2．维管束组织内病原菌的分离从根茎维管束组织分离病菌，可先将寄主病部表面用70％酒精擦拭消毒，将表皮组织用灭菌的解剖刀削去，然后切取其中小块变色的维管束组织，用升汞或漂白粉液消毒后。
，用灭菌水冲洗几次，移置培养基面上。
3．根腐病病原菌的分离根腐或基腐病的分离，由材料的大小决定。
材料小的可仿照斑点病的分离法，材料大的则可以用维管束组织内病原的分离法。
4．肉质组织中病原菌的分离多肉的根、茎及果实等，可以采用维管束组织内病菌分离法除去表面组织，切取小块病组织分离。
如有杂菌感染可采用“直接接种”法，待出现症状后，用此法再行分离。
5．种子内病原菌分离将整个种子或者种子的一部分进行表面消毒(升汞或漂白粉)，用灭菌水洗涤后，移置培养基上。
6．孢子分离法能产生大量孢子的病菌如青霉素、链格孢等，则可配制成孢子悬浮液以稀释法或划线法分离之。
7、土壤带菌分离法为了研究一些真菌在土壤中存活和分布的情形，从有病的土壤中分离它们是必要的。
分离方法是将土壤取出少许，配制成悬浮液，然后用稀释法或划线法分离。
附录2 真菌单孢子分离技术一、目的要求了解单孢分离技术的基本原理，掌握简便实用的单孢分离方法。
二、基本原理单孢分离的方法很多，如振落法、稀释法和直接挑取法。
振落法和稀释法的共同点都是采用某种方法，使真菌孢子较稀疏地分散在水琼脂平板上，然后在显微镜下检查寻找在水琼脂平板表面的单个孢子，一旦找到理想的单个孢子，就通过无菌操作将其(连同一部分培养基)移植到PDA斜面培养基上，置适温下培养，形成的菌落即为单孢系菌株。
直接挑取法是在实体解剖镜下直接挑取单个孢子进行分离纯化的方法。
三、材料、用具与仪器1．材料(依本地资源情况进行选择，下列材料供参考)(1) 稻瘟病叶、病节、病穗颈(Pyricolaria oryzae)。
细菌分离鉴定（完整版）
细菌分离鉴定细菌分离鉴定[细菌分离鉴定]细菌分离鉴定目的要求：熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法，细菌分离鉴定。
实验内容：一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定(一)标本采集1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
(二)分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→涂片、染色、镜检↑挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检(三)常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
材料(1) 标本：脓拭子(2) 培养基：血琼脂平板(3) 兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片方法脓汁→革兰染色→镜检↓↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)，鉴定材料《细菌分离鉴定》()。
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。
目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。
对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。
这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。
近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。
常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。
随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室J。
核酸分子杂交技术、PCR技术、基因芯片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。
1传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。
1．1直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。
直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。
直接涂片镜检不需要特殊的仪器和设备，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。
1．2分离培养与生化反应分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。
细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。
细菌的分离、培养和鉴定
② 加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质 （如血液/血清、酵母浸膏或生长因子等）；用以培养对 营养要求高的微生物（2216E）
③ 选择培养基：利用细菌对某种或某些化学物质的敏感性 不同；在培养基中加入这类物质，利于所需分离的细菌生 长，而抑制不需要的细菌生长，从而达到分离某种微生物 的目的。（中国科学院海洋研究所专利：一种定量检测鳗弧 菌的选择性培养基及其制备）【利用鳗弧菌对氨苄青霉素的抗性 】
④ 鉴别培养基：是一类含有某种特定化合物或试剂的培养
基。某种细菌在这种培养基上培养后，产生某种代谢产物，
能与这种特定化合物或试剂发生某种明显的特征性反应；
从而达到区分不同的微生物.。（TCBS）
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ❖ 病料在接种培养基后，经过一段时间，应检查其 生长状况。首先用肉眼检查有无细菌生长；若有， 则需进一步检查菌落是否纯一。形态特征包括： 大小、形状、突起或扁平、凹陷、边缘（光滑、 波形、锯齿状、卷发状等）、颜色（红色、灰白 色、黄色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度 （不透明、半透明、透明等）和粘度等
水可直接涂布平板
• 平板置于28℃ 恒温培养箱培养24h，观察细菌生
长状况
（注意：操作台在使用前后都需要用酒精棉球擦拭
台面，保持操作台的整洁）
.
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二、细菌的培养
培养基：培养基是指由人工方法配合而成的，用于微生物 培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的混合营养制品。
培养基的种类
① 基础培养基：含有一般细菌生长繁殖需要的基本营养物 质；可作为一些特殊培养基的基础成分（普通营养琼脂）
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生化鉴定管
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养 基质的分解能力也不一样，因而代谢产物 或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
病原体实验室检测方法
病原体实验室检测方法病原体实验室检测方法是指通过特定的实验室技术来检测病原体（包括细菌、病毒、寄生虫等）是否存在以及确定其类型和数量。
这些检测方法在诊断和监测传染病、疫情调查和预防控制等方面起着至关重要的作用。
以下将介绍一些常用的病原体实验室检测方法。
一、细菌检测方法：1.细菌涂片检测法：将样品刮取或脱落涂布到玻璃片上，然后通过染色和显微镜观察细菌的形态、结构和分布情况，从而快速鉴定细菌种类。
2.培养法：将样品在适当的培养基上进行培养，利用细菌的生长特性、形态和抗生素敏感性等进行细菌的鉴定和分类。
3.PCR（聚合酶链反应）法：通过扩增微生物DNA或RNA片段，利用特定引物和酶的作用，可以检测微生物的存在和种类，并且可以从非活体样本中检测到微生物。
4.药敏试验：通过将不同抗生素与细菌进行作用，观察其对生长的影响，从而确定该细菌的药物敏感性。
二、病毒检测方法：1.核酸提取和PCR法：通过提取病毒RNA或DNA，然后用特定的引物扩增并检测病毒核酸，从而确定病毒的存在和种类。
2.组织培养法：将样品接种到合适的细胞培养物上，观察细胞的形态和病变，并通过电镜、PCR等方法检测细胞内的病毒。
3.免疫学检测：通过检测病毒抗原或抗体的存在和滴度来确定病毒感染的情况，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）等。
4.电子显微镜法：通过电子显微镜观察样品中的病毒颗粒，从而确定其形态和类型。
三、寄生虫检测方法：1.寄生虫涂片检测法：将样品制作成薄片，在显微镜下观察寄生虫的形态、结构和分布情况，从而确定寄生虫的种类。
2.氏染色法：染色使寄生虫产生独特的颜色特征，借助显微镜观察寄生虫的颜色和形态特征，从而鉴定寄生虫种类。
3.蛋囊检测法：通过提取样品中的蛋囊，观察其形态和特征，从而确定寄生虫的存在。
4.免疫学检测：通过检测寄生虫抗原或抗体的存在和滴度来确定寄生虫感染的情况，包括ELISA、IFA等方法。
四、其他病原体检测方法：1.快速诊断试剂：通过特定的化学试剂和技术，可以快速检测病原体的存在和种类，如快速血液测试、尿液测试和呼气测试等。
粪便中病原菌的分离培养与鉴定
粪便中病原菌的分离培养与鉴定[摘要]目的：从粪便中分离、培养和检测病原菌，对于临床治疗及预后调查有一定的价值。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等，各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。
此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。
方法：本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征，再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。
可鉴定粪便标本中的病原菌。
[关键词]革兰染色大肠埃希菌志贺菌分离培养鉴定1.实验材料与仪器1.1标本：粪便标本1.2培养基：普通琼脂平板、伊红美蓝平板、营养琼脂斜面培养基、营养肉汤液体培养基、半固体琼脂培养基1.3试剂：细菌干粉培养基革兰染色法[1]试剂【结晶紫、碘酒、95%乙醇、稀释复红】、糖发酵管【乳糖、葡萄糖】、褔氏志贺菌诊断血清。
1.4仪器：接种环、接种针、酒精灯、试管架、恒温培养箱、显微镜、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁尔灭、灭菌平皿、刻度吸管、吸水纸、橡皮筋。
2.实验过程2.1细菌的分离与培养细菌分离培养：伊红美蓝平板分区划线分离（5区）。
无菌操作取粪便标本于固体平板培养基上，采用分区画线分离法培养细菌。
于37℃培养24小时，从而分离出单个菌落。
2.2细菌群体生长特征的观察观察形成菌落的大小、形状、边缘、表面、色素。
粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。
紫黑色菌落具有金属光泽、大而隆起、不透明，菌落直径2～3mm。
淡粉红色菌落，半透明，直径1～2mm。
2.3细菌纯培养粪便标本在伊红蓝平板上，有紫黑色，粉红色两种菌落。
分别挑选这两种菌落在斜面培养基上接种标记，在37℃培养24h。
2.3.1斜面接种法选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落在平皿底部玻璃上，画个大圈选择菌落，右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，再用灭菌的接种环套住菌落，轻刮取菌，将其伸入代接斜面试管底部，轻轻向上划线，接接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上，观察斜面培养基。
肺炎链球菌的分离和鉴定
血琼脂培养基
将样本接种在含有血液和琼脂的培养基上， 适宜的温度下培养，观察是否有肺炎链球菌 的生长。
分离步骤
增菌
将采集的样本在适宜的温度和环境下进行增菌培 养，使细菌增殖。
纯化
对单个菌落进行纯化培养，确保分离得到的菌株 为纯培养物。
ABCD
分离
将增菌后的样本划线接种在选择性培养基上，使 肺炎链球菌在培养基上形成单个菌落。
需要加强临床医生和微生物实 验室之间的合作，提高肺炎链 球菌的早期诊断和治疗效果。
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鉴定
通过形态学观察、生化试验和分子生物学方法对 纯化的菌株进行鉴定，确认为肺炎链球菌。
04
鉴定方法
形态学鉴定
总结词
通过观察细菌的形态、染色特性及排列方式，初步判断是否为肺炎链球菌。
详细描述
在显微镜下观察细菌的形态，肺炎链球菌通常呈双排列或四排列，呈革兰氏阳性染色。
生化鉴定
要点一
总结词
通过细菌的生化反应来进一步确定是否为肺炎链球菌。
鉴定准确性
分子生物学鉴定和血清型鉴定的 结果一致，表明实验鉴定方法的 准确性较高。
临床意义
了解分离菌株的血清型和抗生素 敏感性，对于指导临床合理用药、 控制感染和预防疾病传播具有重 要意义。
06
结论与展望
研究结论
01
肺炎链球菌是引起肺炎的重要病原菌，具有多重耐药性，给临床治疗 带来挑战。
02
分离和鉴定肺炎链球菌的方法不断改进，包括传统的培养法、免疫学 方法和分子生物学方法等。
详细描述
肺炎链球菌是一种需氧或兼性厌氧的细菌，在培养基中生长迅速。在血琼脂平板上，肺 炎链球菌形成中等大小、灰白色、半透明、圆形、凸起的菌落，表面光滑，周围有明显
病原体实验室检测方法
病原体实验室检测方法病原体实验室检测方法是指在实验室环境中，使用各种技术和方法来检测、识别和鉴定病原体。
以下是几种常见的病原体实验室检测方法：1.显微镜检查显微镜检查是一种基本且常用的病原体实验室检测方法。
通过显微镜可以观察病原体的大小、形态、结构等特征，从而对病原体进行鉴定。
在显微镜下，病原体通常呈现出独特的形态和结构，如细菌、病毒、真菌等。
此外，显微镜还可以用于观察细胞结构、病理改变等，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
1.培养分离培养分离是一种常用的病原体实验室检测方法。
通过将病原体接种到特定的培养基上，在适宜的温度和湿度下培养一定时间，使病原体繁殖并形成肉眼可见的菌落或病毒斑。
通过观察菌落或病毒斑的特征、染色特性、生化反应等指标，可以对病原体进行鉴定和分类。
培养分离对于某些传染病的诊断和治疗具有重要意义，如细菌性痢疾、肺炎等。
1.免疫学检测免疫学检测是一种基于抗原-抗体反应的病原体实验室检测方法。
通过使用特异性抗体检测病原体中的抗原，可以快速、灵敏地检测出病原体。
免疫学检测方法包括凝集反应、沉淀反应、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
这些方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于大规模筛查和流行病学调查。
1.分子生物学检测分子生物学检测是一种基于分子杂交和基因测序的病原体实验室检测方法。
通过检测病原体基因序列中的特定片段，可以快速、准确地检测出病原体。
分子生物学检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）、基因芯片等。
这些方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于快速诊断和鉴别诊断。
1.血清学检测血清学检测是一种基于血清中抗体水平检测的病原体实验室检测方法。
通过检测血清中特异性抗体的存在和水平，可以判断机体是否感染过某种病原体并评估其免疫状态。
血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光等。
这些方法适用于流行病学调查、疫苗接种后的免疫效果评估等。
1.病理学检查病理学检查是一种通过观察组织病理改变来诊断疾病的实验室检测方法。
养殖场中常见疾病的病原体检测方法
养殖场中常见疾病的病原体检测方法养殖场中常见疾病的病原体检测方法：养殖业是农业中的重要组成部分，在农村地区扮演着促进经济发展和提供就业机会的重要角色。
然而，养殖业也会面临许多困扰，包括常见的疾病。
为了确保畜禽健康和提高产量，养殖场经营者需要及时识别并控制这些病原体。
在本文中，我们将讨论养殖场中常见疾病的病原体检测方法。
1. 细菌检测方法：- 传统培养法：通过从动物体内或环境中采集样本，如血液、尿液、粪便、水等，将其分离并在不同的培养基中培养细菌。
通过观察细菌在培养基上的形态、生长速率和产生的代谢产物，可以确定细菌种类。
- 快速检测法：使用快速检测试剂盒进行细菌鉴定。
这些试剂盒包含特定的试剂和培养基，可以在短时间内确定细菌的存在与否。
此方法比传统培养法更为快速和有效。
2. 病毒检测方法：- PCR法：聚合酶链反应 (PCR) 是一种高度敏感且特异性的病毒检测方法。
通过提取样本中的核酸，然后使用特定引物和酶进行反应，可以扩增病毒的基因组，并利用凝胶电泳或实时荧光定量PCR进行检测。
- 免疫组化法：使用特定抗体与病毒抗原结合，然后使用染色剂标记抗体进行检测。
这种方法可用于检测活体或死亡病毒。
3. 真菌检测方法：- 直接检测法：将畜禽体内或环境中的样本进行直接检测。
通过显微镜观察及染色技术，可以确定真菌的存在和种类。
- 菌落计数法：将样本进行稀释并培养在特定培养基上，通过观察菌落的数量和形态特征来确定真菌的种类和密度。
4. 寄生虫检测方法：- 直接检测法：通过直接观察畜禽的体表或粪便等样本，使用显微镜进行检测。
这种方法适用于大型寄生虫的检测，如蛔虫和疥螨。
- 组织检测法：通过取样畜禽的组织或被病原体感染的组织进行检测。
这种方法适用于寄生虫的幼虫或卵的检测，如细小线虫或弓形虫。
5. 免疫学检测方法：- ELISA法：酶联免疫吸附试验可以检测免疫反应中产生的抗体或抗原，通过特定的颜色反应或荧光信号来确定病原体的存在与否。
病原体分离与鉴定实验技术
病原体分离与鉴定实验技术病原体分离与鉴定是微生物学研究中的重要环节，其结果对于疾病的诊断、预防和治疗具有重要意义。
本文将介绍一些常用的病原体分离与鉴定实验技术。
一、细菌的分离与鉴定1. 样本采集与处理首先，我们需要从患者的体液、组织或病灶中采集样本。
常见的样本包括血液、尿液、痰液、伤口分泌物等。
采集后，样本需要进行适当的处理，如离心沉淀、过滤等，以获取纯净的菌种。
2. 培养与分离将经过处理的样本接种于含有适宜营养物质的培养基上，并进行适当的培养条件，如温度、湿度等控制。
通过观察培养的菌落形态、色素、气味等特点，选择单个菌落进行分离。
3. 形态学鉴定通过显微镜观察菌体的形态特点，如形状、大小、结构等，可以初步判断细菌的分类。
4. 生理生化鉴定细菌具有各种代谢特点，可通过测定其对营养物质的利用能力、产酶能力、产气或产酸能力等特性，进行病原菌的初步鉴定。
5. 血清学鉴定血清学鉴定是通过观察病原菌与抗血清或其他特定蛋白质结合反应，来确定病原菌的种属或亚种属。
该方法常用于鉴定沙门菌、流感嗜血杆菌等。
二、病毒的分离与鉴定1. 细胞培养法病毒的分离最常用的方法之一是细胞培养法。
将待测样本接种于合适的细胞系，并观察细胞的形态变化、细胞的病变以及病毒是否复制等现象，可以初步判断是否存在病毒感染。
2. 核酸扩增技术核酸扩增技术是近年来病毒鉴定的重要方法之一。
通过PCR、实时荧光定量PCR等技术可以快速、准确地检测病毒的核酸序列，从而进行病毒的鉴定。
3. 血清学检测病毒感染后，机体会产生特异性的抗体。
通过血清学检测，可以检测患者血清中是否存在特定病毒的抗体，从而进行病毒鉴定。
三、真菌与寄生虫的分离与鉴定1. 样本采集与处理对于真菌和寄生虫的分离与鉴定同样需要采集患者的组织、分泌物等样本，样本的处理与细菌类似，需要消毒、离心等步骤。
2. 培养与分离将样本接种于含有适宜营养物质的培养基上，并进行适当的培养条件控制，如温度、湿度等。
感染病原微生物的分离和鉴定技术
感染病原微生物的分离和鉴定技术病原微生物是引起疾病的原因之一。
因此，当怀疑病人患有感染性疾病时，需要进行微生物分离和鉴定。
这项技术可以用于确定病原微生物的身份、了解病原微生物的潜在危险以及确定最佳治疗方案。
本文将介绍常见的微生物分离和鉴定技术。
1.细菌分离和鉴定细菌是最常见的病原体之一，因此需要进行细菌分离和鉴定。
一种常用的细菌分离技术是“血平板法”，该技术涉及到将病原体培养在含有富含营养物质的平板上。
之后，将血清添加到平板上，检测是否会有细菌菌落的形成。
如果有形成，则表明这个平板上有可能存在细菌。
鉴定细菌可以通过筛选一系列不同的培养基来实现，例如酸敏素、米斯敦抑制剂、麦康凯脱氧胆汁盐紫、以及气孔试验等。
这些试验基于细菌菌株的不同特征，根据这些特征，可以确定细菌的身份并提供最佳治疗方法。
2.真菌分离和鉴定真菌在感染中也扮演着关键角色，因此需要进行真菌的分离和鉴定。
真菌分离可以通过使用含有营养物质的试管培养基，以及空气稀释，将真菌放置在伏井玻璃中进行。
真菌会在此处生长，并形成真菌菌落。
然后，将这些菌落移动至可供鉴定的培养基上。
鉴定真菌通常涉及使用孢子分析、显微镜观察、以及通过生物技术方法应用基因测序等。
这些方法可以帮助确定真菌的身份，并提供治疗建议。
3.病毒分离和鉴定病毒分离是通过将病毒放入终端宿主细胞中，利用宿主细胞来复制病毒。
在病毒复制完成后，通过对复制物进行抽取和鉴定，可以确定病毒的身份。
病毒的鉴定可以通过许多方法来完成，包括免疫学方法、PCR、以及使用重组DNA技术等。
这些方法通常涉及到分析病毒抗原的特征，使用核酸杂交等技术来分析病毒的序列信息，以及将对病毒有抵抗力的DNA结合到相同的DNA中以产生抗体。
4.寄生虫的分离和鉴定寄生虫的分离通常涉及将其放置在带有试管中的培养基中，以便在培养基中生长和复制。
这提供了一种寄生虫的纯化方法，然后可以将其在不同的培养基上进行鉴定。
鉴定寄生虫方法包括孢子分析，通过显微镜观察寄生虫组织，以及使用PCR等技术。
病原菌的分离鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除病原菌的分离鉴定篇一：常见病原菌采样分离过程金黄色葡萄球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）奶样的采集：采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后Lh、右前RF、右后Rh编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。
（2）乳房皮肤拭子用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。
拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
（3）鼻腔拭子用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。
菌种的初步分离首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤35℃培养18小时左右。
需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。
2、菌种的保存2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。
3、菌种的复苏如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。
肠球菌采样分离过程1、样本采集及初步分离（1）肛门拭子以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
（2）泄殖腔拭子以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告摘要本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。
本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。
引言肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。
一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。
有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。
在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。
在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。
材料与方法实验所需材料：-食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等）-选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar）-氯霉素（50μg/ml）-β-半乳糖苷酶-生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢）实验步骤：1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。
2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。
3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。
结果经过实验分离和鉴定，本实验成功分离出大肠杆菌和沙门菌等常见的肠道病原菌，并且还分离出一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
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在载玻片两端滴加生理盐水一滴，用 接种环挑取待检菌(金葡菌、白葡菌)， 分别与它们研磨、混匀，滴加兔血浆1滴， 立即观察有无凝固颗粒，若有即为阳性。 此法用于测定结合型凝固酶。
二、链球菌属
葡萄球菌菌落观察（教师示教）
分别取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球 菌培养物，用分离划线方法接种血平板， 置37℃培养，18h～24h以后观察结果。
血琼脂平板中18h-24h后形成圆形隆 起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明 的菌落，不同菌种可产生金黄色、白色或 柠檬色色素。某些菌种（株）有溶血现象。
血浆凝固酶试验（教师示教）
（学生操作 ）
小结
1.一般细菌的鉴定流程 2.化脓性球菌的鉴定方法
一般细菌的鉴定流程 细菌学检验Biblioteka 采集标本和注意事项的一般程序
分离与培养 1.培养基的选用
2.培养方法
3.无菌操作
细菌的鉴定 1.涂片，革兰染色，镜检
2.生化反应
3.血清学鉴定
化脓性球菌的生物学性状
葡萄球菌 链球菌（肺炎球菌） 奈瑟菌属
麦芽糖发酵试验：分别取脑膜炎球菌、 淋球菌接种于麦芽糖发酵管中，置 37℃24h～48h观察结果。
细菌学检验的一般程序
涂片染色
初步诊 断报告
增菌
快速诊 断试验
接种平板培养基，分离单个菌落
挑取可疑菌落
涂片染色
各种鉴定试验
生化试验 血清学实验 动物试验 药敏试验
明确诊断报告
血液标本
革兰染色 染色性 形状排列
血平板分离培养 溶血现象、革兰染色
初步诊断
葡萄球菌属 乙型链球菌 甲型链球菌或 肺炎链球菌
血浆凝固酶试验
（+）
金黄色葡 萄球菌
（-）
表皮葡萄球 菌
胆汁溶菌试验 菊糖发酵试验
（+）
（-）
肺炎链球菌 甲型链球菌
1．链球菌的镜下形态
2．链球菌的培养特性
3．链球菌的生化反应
(1)奥普托欣（Optochin）敏感试验 (2)胆汁溶菌试验 (3)菊糖发酵试验
4．乳胶法抗“O”试验
链球菌镜下形态观察（学生操作）
分别取甲、乙型溶血性链球菌培养物 涂片，革兰染色，镜检。观察并记录结果 填入实验报告。
革兰染色后细菌呈紫蓝色，菌体呈 圆形或卵圆形，直径0.6—1.0µm，常呈 链状排列 。
取肺炎球菌培养物涂片，革兰染色， 镜检。
革兰染色阳性，常呈双排列。菌体呈 矛头状，尖端向外钝端相接。无芽胞，无 鞭毛，在人及动物体内能形成荚膜。
肺炎链球菌菌落观察（教师示教）
取肺炎球菌培养物，接种于血平板， 置37℃培养，18h～24 h后观察血平板 上生长的菌落大小。形态、溶血性。
在血平板上与甲型溶血性链球菌很 相似，形成细小、灰白、圆形略扁、半 透明，直径0.5—1.5mm的菌落，有甲型 溶血环。
常见病原性细菌 的分离鉴定方法1
学习要求
1．熟悉一般细菌的鉴定流程。 2．掌握化脓性球菌的鉴定方法。 3．掌握肠道细菌的鉴定方法。
实验内容
1. 一般细菌的鉴定流程。 2. 化脓性球菌的生物学性状。 3. 化脓性球菌的鉴定方法。 4. 血液标本1和血液标本2的检查。
（学生操作） 5. 粪便标本1和粪便标本2的检查。
各加10%去管氧不胆变酸色钠。溶液0.2 ml，摇匀
后置37 ℃水浴15 min后观察结果。如细
菌悬液仍为浑浊状，为阴性；细菌悬液
由浑浊变为透明状为胆汁溶菌试验阳性。
2．胆汁溶菌试验
三、奈瑟菌属
形态学观察（学生操作）
分别取脑膜炎球菌和淋球菌培养物涂片， 革兰染色，镜检，油镜下观察细菌的大小、形 态、排列及染色性。
一、葡萄球菌属
1．葡萄球菌的镜下形态 2．葡萄球菌的培养特性 3．葡萄球菌的生化反应
(1)血浆凝固酶试验 (2)触酶试验 (3)甘露醇发酵试验
葡萄球菌镜下形态观察（学生操作）
取葡萄球菌培养物少许涂片，革兰 染色，镜检。观察结果填入实验报告。
革兰染色后细菌呈紫蓝色，球形或椭 圆形，直径0.5—1.2µm，排列成葡萄串状。
肺炎球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别
取肺炎球菌和甲型溶血性链球菌
分别接种于菊糖发酵培养基，置
胆汁或胆盐3能7℃活培化养肺2炎4h球～菌48自h，溶可酶见，肺促炎球
1.
菊糖发酵试验使细菌裂解菌自分溶解。菊分糖别、取产肺酸炎，球使菌培和养甲基变
型溶血性链红球色菌，0而．甲8m型l于溶2血支性试链管球中菌，培养
菌落观察（教师示教 ）
分别取脑膜炎球菌、淋球菌接种于巧 克力色血平板，置37℃培养24h或48h后观 察结果，注意菌落形态、大小等特征。
奈瑟菌属生化鉴定
氧化酶试验：氧化酶可将二甲基对二苯 二胺或四甲基对二苯二胺试剂氧化成红紫色 的酿类化合物。 分别滴加氧化酶试剂在脑膜 炎球菌、淋球菌及白色葡萄球菌培养物上， 几分钟后观察结果。
链球菌菌落观察（教师示教）
分别取甲、乙型溶血性链球菌接种 于血琼脂平板，置37℃培养18h～24h后 观察结果。
血琼脂中形成灰白色、表面光滑、 边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌 落。菌落周围因链球菌种类不同，可呈 现透明溶血环、草绿色溶血环或无溶血 环。
肺炎链球菌镜下形态观察（学生操作）