真菌毒素的检验

• 2）动态样品的采集 • 用商品化的十字交叉切分自动采样器 • （3）采样量 • 采大样，按四分法对角连续多次分样缩减至1－2kg，最后取代表 样全部粉碎。 • 美国农业部USDA的方法：成批样每批取3份大样，每份22kg。
• 实验室分析用的样品为1－5kg。
• 2.提取 • 1.提取溶剂 • 溶剂的选择取决于待测毒素的种类、毒素性质、毒素在提取溶 剂中的溶解度、提取溶剂的毒性价格、非测定成分在提取溶剂 中的分配系数等。 • 选用：毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统 • 常用溶剂：甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中 一种或多种不同配比的混合物。 • 2.提取温度 • 温度影响毒素的回收率，适当升高温度可以增加毒素的回收率。 • 3.食品基质 • 固体食品：选用浸剂、洗脱、索氏回流等方法。 • 液体食品：液－液分配方法。 • 提取酸性真菌毒素时，通常需提高提取溶剂系统中水相的pH 值，使其有效地将被提取物碱化或形成水溶性碱混合物后，再 进行提取。
主要内容
1.概述 2.真菌毒素分类 3.真菌毒素检测基本步骤
1.概述
• 真菌毒素--由真菌生产的有毒代谢产物。具有毒性、致癌 性、致突变型和致畸性等。“毒蘑菇、迷神麦、醉谷病” • 真菌毒素的危害： • （1）引起粮食作物的病害和产品腐败变质； • （2）对人类和动物健康产生威胁。
• 1.黄曲霉毒素（aflatoxin，AFT)的特性
• AFT目前已分离鉴定出20余种异构体，其中最常见的包括B1、B2、 G1、G2、M1、M2 。
• 特性：
• ⑴紫外线下发不同颜色的荧光，蓝色荧光（Blue fluorescence）为 B族，黄绿色荧光（yellow-Green fluorescence）为G族；M1和M2 为B1、B2的羟化衍生物，主要存在于奶（milk）及奶制品、肉类 （meat）中，故名M族。
2.真菌毒素分类 • 按产生菌可分为：曲霉毒素类、青霉毒素类、镰刀菌毒素 类等。水活度（Aw对真菌生长和产毒影响较大。 • 真菌毒素毒性： • （1）致DNA损伤，有的致癌； • （2）细胞毒性，有的破坏质膜和细胞酶的作用 • 常见的真菌性食物中毒：黄曲霉毒素中毒、黄变米或灰变 米中毒，赤霉沼渣粉中毒等。
• ⑵呋喃环有双键者毒性强，具有致癌性； • ⑶溶于油、氯仿、甲醇等有机溶剂，不溶于水、乙醚、石油醚； • ⑷耐热，加热到280℃才裂解破坏； • ⑸在中性和酸性溶液中稳定，在pH值9-10的强碱性溶液中迅速分 解。
• 2.黄曲霉毒素的毒性 • 急性毒性：剧毒物，毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。 • 慢性毒性：动物生长迟缓，肝脏出现亚急性或慢性损伤。 • 三致作用：致癌、致畸、致突变 。 • 3.黄曲霉毒素产生的影响因素 • 培养基：花生、玉米等是黄曲霉的天然培养基。 • 温度和湿度：最适生长温度在37℃左右，产毒温度略低于 最适生长温度，黄曲霉毒素产毒温度28-32℃，相对湿度 85％以上。 • 水分：产毒的适宜水分活度为0.8-0.9。 • pH值：最适pH值为3 。
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4.检测 （1）薄层色谱法 （2）高效液相色谱法 （3）气相色谱法 （4）酶联免疫吸附试验
第二节 主要真菌毒素及其检验
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1.黄曲霉毒素 （1）特性 （2）食品中来源 （3）毒性与危害 （4）检测方法
Байду номын сангаас
• 霉菌 • 霉菌均由分枝或不分枝的菌丝构成，许多菌丝交织在一起 形成菌丝体，菌丝在光学显微镜下呈管状，2～10 um 比 一般细菌放线菌细胞大几倍至几十倍，与酵母菌相似，而 其菌丝又分为有隔菌丝和无隔菌丝，再就是根据其功能不 同又分为营养菌丝，气生菌丝。 • 无隔菌丝：菌丝为长管状，单细胞，细胞质内含多个核， 其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多，以 及细胞质的增加，如毛霉，根霉，犁头霉。 • 有隔菌丝：为大多数的。菌丝由横隔膜分隔成成串的多细 胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核，有些菌丝外观看 起来像多细胞，但横隔膜上有小孔，使细胞质或细胞核， 可自由流通，每个细胞功能也相同，如青、曲、白地霉。
3.真菌毒素检测基本步骤
• 1.采样和样品的准备 • （1）采样的地点 • 根据分析目的的不同确定采样地点，如：农田、仓库、加 工厂、运输工具、零售商和医院等。 • （2）采样方法 • 1）静态样品的采集 • 静态样品：麻袋、箱柜和车厢等容器存放分样品均属静态 样品。 • 采样工具：顶端尖锐的长柄采样钎子。 • 采样数量：小批量时采1/4；大批量时为整批麻袋数
• 霉菌培养特性的鉴定 • 青、曲--察氏培养基，镰刀菌、芽枝霉--马铃薯葡萄糖琼 脂进行划线或点种于琼脂上，25～28℃，定期观察。 • ①生长速度：培养一定天数（5、10、15天）测大小，描 述常以极慢、慢、中等、快、说明。 • ②菌的颜色：包括子实体，气生菌丝、菌核，埋伏菌丝及 其颜色。 • ③菌落表面构造：蔬松，紧密、扁平、隆起，凹陷，或皱 褶，有无同心环，放射沟，并观察菌全部，中心部，中间 部分及边缘部分。 • ④菌落质地：外观似毡状、绒毛状、棉絮状、羊毛状、襄 状、粉粒状、明胶状或皮革状。
• 营养菌丝（基质菌丝）就是在生长过程中，伸入到培养的 基质中，为真菌提供营养的菌丝。 • 气生菌丝图（繁殖菌丝）它主要是伸入到菌周的空气环境 中，它主要作用是产生孢子，产生孢子时的气生菌丝称繁 殖菌丝。 • 霉菌的繁殖 • 主要是由繁殖器官产生孢子，繁殖器管是由繁殖菌丝产生 的可以是单细胞，也可是多细胞，有时产生无性孢子，有 时产生有性孢子，如青霉，曲霉，在生长过程中，由于生 长条件的改变，有时产生有性孢子，有时产生无性孢子， 但主要还是以无性孢子为主。 • 有性孢子：子囊孢子，结合孢子，卵孢子，担孢子。 • 无性孢子：分生孢子，关节孢子，芽生孢子，孢子襄孢子， 厚膜孢子。
• 3. 纯化 • 纯化：在确保不损失待测毒素的前提下除去干扰杂质的过程称 为纯化。 • 常用净化方法： • 液－固萃取、液－液分配、化学吸附、色谱法、透析法以及 SFE法等。 • 使用最广泛的是色谱法。 • 色谱法：薄层色谱法（柱色谱法最常用） • 吸附色谱柱常用的吸附剂： • 硅胶、矾土、氧化铝、活性炭、弗罗里硅土 • 分配色谱柱常用的填充剂：硅藻土、纤维素。 • 固相提取（广泛采用） • 免疫亲和柱IAC（应用于农产品的新技术）