安捷伦液质联用

液相色谱-质谱联用仪的使用

（Agilent LC-QQQ6490）

文件编号：

版次/修订次：

编写：

日期：

审核：

批准：

批准日期：

文件修订记录表

修改序号

修改

章节号

修改内容

修改

申请人

批准

人

批准

日期

1

初稿

作成初版制作。

年

xx月xx日

主要内容：

仪器型号Agilent LC-QQQ6490

硬件组成色谱系统、质谱系统

软件组成数据采集系统、定性软件、定量软件

方法建立材料的准备、初步方法的建立、方法的优化

关机三大步

一、仪器硬件组成

1.色谱系统

1.1流动相

A.水溶剂：A1：纯水（避光，常更换，防止细菌滋生）

A2：甲酸水、氨水等

B.有机溶剂B1：纯乙腈、纯甲醇、纯异丙醇

B2：含0.1%的甲酸乙腈溶液

注：流动相越简单越好，避免加入无机盐（如H2SO4）

甲醇与乙腈的比较：甲醇：与水相溶会发热；延滞性大，便宜；

乙腈：溶解性不佳，乙腈会结晶；

极性、溶解性和延滞性

极性：水> 甲醇> 乙腈；

延滞性（表面张力）：水> 甲醇> 乙腈；

洗脱能力：甲醇、乙腈> 水

流动相的配置：水相流动相通过0.22μm的膜以达到去除颗粒的目的。超声（10 ~ 20min）以去除气泡；滤头应定期更换

1.2色谱柱

保护套（滤头、套管）

注：进口：用扳手拧，出口管路应多留出一段），安装柱子时应避免这段管路。

色谱柱的冲洗：先用一定比例的流动相冲洗，再用纯有机溶剂进行冲洗；不用时，一般保存在规定的有机溶剂中。

C18柱（农药、兽药）：吸附中弱极性的物质； 亲水性柱：三聚氰胺、PSP 柱

规格： 10 cm × 2.4~3.0 μm ， 0.2 ~0.3 mL/min ；5 cm × 1.8μ m 0.2 mL/min ，其中柱压一般不超过350 bar.

一旦出现：柱压高：堵塞（系统+柱子）；柱压低：漏气（系统+柱子）

1.3六通阀

泵（流动相）

色谱柱

进样针

定量环

排放

1

2

6 5

4

3

装样位置

1

2

6

3

5

4 进样位置

1.4梯度洗脱

注：从低比例有机溶剂的流动相开始，更改比例，但不要改变流速。 阶段A ：现将柱子里、管路中极性杂质先冲出，如水中的极性物质；

阶段B:有机溶剂比例的提升阶段，分离被测液中的各组分，加强被分离组分与流动相的作 用力；对于多组分的分离，更改梯度的斜率，但都是使有机溶剂的比例； 阶段C ：稳定阶段：要有足够的时间使众多的弱极性杂质； 阶段D ：为下一针做着准备。

2.质谱系统

A

B

C

D

2.1 主要部位（接口，其作用是离子化、气化和去溶剂）APCI:大气压化学离子化（甲烷气），间接电离的过程ESI:电喷雾离子源，既是接口装置，又是离子化装置

雾化器

电喷雾离子-4000v

加热氮气干燥气

毛细管口溶剂喷雾

离子源结构图

2.2 真空系统

机械泵（10-4 Torr），作用于离子源，去杂质；

分子涡轮泵（10-5 Torr）在三重四级杆的中间加两个

2.3 质量分析器

+ [加H离子化] [M+1]+ e.g.300+1

解释了流动相加酸的原因

ESI

- [去H离子化] [M-1]+ e.g. 300-1

纯流动相

四级杆的结构图

注：LC-MS 对手性物质较难分离，一般使用手性柱。

质谱的完整结构图

2.4离子扫描方式

（1）Scan(全扫描模式)：需要设定一个扫描范围，如m/z:100~500

（2）SIM(离子选择性扫描模式)：一个四级杆设定一个电压（即参数），如m/z=300 （3）Product ion：SIM + Scan（提高质谱仪电压）

↓↓

选择母离子筛选出子离子（100 ~ 略大于母离子）

(4) MRM（多反应监测）:SIM+SIM，只出现在多级质谱中:

二、仪器软件组成（具体操作过程见文件2）

1.数据采集软件

2.定性分析软件

3.定量分析软件

三、仪器方法的建立

1.一般性操作过程

1.1明确目标物，通过文献的搜集，整理出目标物的质谱参数（碰撞能、母离子、子离子及

加速电压等）以及色谱系统中的梯度程序；

1.2确定色谱系统中的流动相和色谱柱等并准备好；

1.3目标物的单标及混标的配置，配置完成以备用；

1.4仪器方法的建立

1.4.1先进行目标物单标的质谱参数确定（无需连接色谱柱）

1.4.1.1打开数据采集软件：（Data Acquitation Mass Hunter，在线软件中正上方调出“HJJ.Method”文件夹中的“OPTIMIZE.m”方法）

1.4.1.2 在窗口下面的Sample Run 中进行编辑:样品信息（Sample）Position（样品位置）；Injection Volume （进样体积）；数据文件信息（Data file）Name（文件名）和Path（数据文件的存储路径）

1.4.1.3母离子的确定

①打开Method Editor对话框，点击QQQ选项设置各参数，扫描方式：scan