7-土源性线虫病检测技术

钩蚴：
左-美蚴
右-亚蚴
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9.用放大镜(4×以上)或解剖镜以侧照法检出沉淀 物内有无活的幼虫。如有活的幼虫，可先将管底部 浸于50-60℃的热水内抑制虫体活动。
10.吸取沉淀物1-3滴于载玻片上，将载玻片置于低倍 镜下(10×10)检查，为使可折光的幼虫易于观察，检 查时要尽量缩小光圈减弱光线，如需详细辨认幼虫， 可加上盖玻片，在高倍镜下(10×40)检查，必要时可 用目镜测微计测量幼虫。


玻片边缘。
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二、操作步骤

（六）待加藤片透明后镜检。粪膜置于30～ 36℃温箱中约半小时或室温25℃约1小时左右粪 膜透明，无水雾后，即可镜检。

（七）镜检：将透明后的加藤片置于光学显微
镜的载物台上，在低倍镜（100×）下进行镜检， 仔细检查每一张片的每一个视野，必要时用高 倍镜（400×）作进一步鉴定，及时在原始记录 表上记录观察结果。
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5.在培养管上贴上标签并写上受检者的姓名和编号
6.每10管用橡皮筋扎住，上下均包以旧报纸，再用
橡皮筋扎紧。
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7．将培养管置于31℃温度中培养4天，或置于26～30℃ 温度中培养6～8天。以保证所有幼虫都有足够的时间发 育到感染期幼虫。
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8.分离幼虫：沿管壁加入约45℃温水，淹没滤纸上的粪便， 0.5小时后用镊子轻轻取出滤纸条，弃去。将培养管静置1 小时，用吸管吸去上清液，幼虫留于管底0.5ml或更少的 水内。
总之，涂片放置的时间取决于粪样透明度，只要透明
了，就应及时镜检，否则透明过度，薄壳虫卵易变形看不 清楚，会造成漏检或误判。（例如：钩虫卵检查，透明时 间宜短，不要超过30分钟。）
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适用范围：适用于人体蠕虫卵的
定性和定量检查，定量只适用于 钩、蛔、鞭虫卵及其他吸虫卵的 检查。

优点：方法简便，操作过程中虫
高，即每个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）多于10 个，用定视野抽查法推算全片蛔虫卵、肝吸 虫卵数。
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二、操作步骤

（八）虫卵计数
按下图分布固定抽查10个视野，并算出抽查的 10个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）的平均数乘以全片的 视野数，得到全片虫卵数近似值全片粪膜蛔虫卵 （肝吸虫卵）总数。
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二、操作步骤

（八）虫卵计数
是世界卫生组织、我国推荐的，检测肠道线虫 虫卵的主要方法。 基本原理：利用粪便定量或定性厚涂片，可作 虫卵定量检查。经甘油和孔雀绿处理，使粪膜透明，
从而使粪渣与虫卵产生鲜明的对比，便于光线透过
和镜检。孔雀绿则使视野光线变得柔和，以减少眼 睛的疲劳。
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一、材料和试剂

透明液 配制方法：取蒸馏水100mL、纯甘油100mL、3％孔雀绿（或亚甲基蓝） 1mL，按此比例混合均匀。也可不用孔雀绿或亚甲基蓝。
时间不宜超过早上8点。

皮肤皱褶，特别是肛周3点及9点钟处，以利粘 着虫卵。
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试管滤纸培养法：
本方法主要用于检查线虫幼虫和鉴别美洲钩虫和 十二指肠钩虫的幼虫。 (一) 材料 锥形离心管（长11.5cm、管口内径1.5cm）。
试管架、吸管、载玻片、盖玻片(20×20mm)、小镊子、 滤纸条（宽度略大于试管直径，长度略短于试管，约 9.0×1.6cm，滤纸条要用剪刀剪，防止毛边）

软性塑料刮片 规格为两头刮片型或一端刮片 型，长60mm，宽6mm，厚2mm。

载玻片
规格为75mm×25.5mm，厚1.0mm～1.2mm。
ห้องสมุดไป่ตู้
其它 镊子、剪刀、记号笔、标本盒、吸水纸、光学显微镜、一次性手套等。
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二、操作步骤
刮 填 盖 压 透
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二、操作步骤

（一）用标本盒收集约5g粪样，在标本盒 上按顺序编写检验号，并记录好相关信息，
(三) 注意事项
如载玻片上的幼虫蠕动过快，难于观察，可用以下方 法制动：
1．将载玻片放在90℃的热水上用热气熏。 2．从一侧加3%～5%福尔马林一滴使之慢慢渗入。 3．加入1：4000的稀碘液一滴，使之慢慢渗入。
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土源性线虫病检测技术
疾病预防控制中心
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土源性线虫病的检测主要是采用病原学检查方法
生理盐水直接涂片法
改良加藤厚涂片法
粪便检查法
（钩、蛔、鞭）
饱和盐水浮聚法 水洗沉淀法（钩虫卵除外）
病原学检查方法
试管滤纸培养法（钩蚴培养） 透明胶纸肛拭法
（蛲）
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改良加藤厚涂片法又称厚涂片透明法，为粪便
定量或定性检查蠕虫卵的方法。

在定量应用中，为提高检出率，有时要求每一 样本作3张加藤片。
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三、注意事项

粪膜要均匀铺开，不宜过厚。 透明时间要适度。如透明时间短，虫卵难以发现；时
间过长则虫卵变形，不易辨认。一般在室温25℃、湿度75
％下，涂片放置不宜超过2小时（室温35℃时0.5小时即 可）；若温度低，空气湿度大，涂片放置时间可适当延长。

亲水性透明玻璃纸
预处理方法：取厚40μm的亲水性透明玻璃纸，剪切成大小为 25mm×40mm的长方形，置于配制好的透明液中浸泡24h以上备用。

尼龙绢网 80目的尼龙绢网，裁剪成5cm×5cm大小备用。
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一、材料和试剂

塑料定量板 规格为30mm×40mm×1mm的聚苯 乙烯模板，中央孔为圆台形，其短 径为3mm，长径为4mm，高1mm，容 积为38.75mm3。
亚洲钩蚴（AdL）
不见或不明显 可见，透明如丝状
美洲钩蚴（NaL）
明显，呈黑色杆状 清晰，二矛前端分叉，矛间隙窄
头端
鞘膜横纹
高倍镜
高倍镜
呈扁平形，中间微有凹陷
有时可见，但微细不显著
呈圆形，无凹陷
明显，横纹线条较粗
肠管形态
食道形态 外形 虫体色调 鞘后端至 虫体后端 间隙 活动方式
高倍镜
高倍镜 低倍镜和 高倍镜 低倍镜 高倍镜 高倍镜 低倍镜
管腔较狭窄，肠细胞颗粒丰富，有折 光性，肠管深绿色
食道彭大部较少，折光性较弱，无折 光带 细长，似园柱状，自头部至肛门宽几 乎相等 深绿黑色 虫体半透明，肠管呈绿黑色 较短窄0.0506 (0.044~0.058) 头、尾同时左右摆动，活动 敏捷
管腔宽广，肠细胞颗粒少，管腔中央 透亮，肠管色浅
食道彭大部显著，在神经环至食道彭 大部腹侧有一细长折光带 较粗短似纺锤形，自食道基底部向前 及向后渐次狭小 淡绿褐色或绿黄色 虫体半透明，肠管淡绿或绿褐色 较长宽 0.0621 (0.052~0.072) 以头部左右摆动为主，尾部仅作被动 运动，活动缓慢 44
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示教
覆盖筛网 刮取粪液
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示教
在定量孔上填上粪液
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示教
盖上甘油玻璃纸
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示教
用一张载玻片压片
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示教
加藤片透明
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示教
约半小时透明后可镜检
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二、操作步骤

（八）虫卵计数 1. 每张涂片发现的鞭虫卵、钩虫卵全片计数。 2. 每张涂片发现的蛔虫卵、肝吸虫卵原则上 全片计数，但如果蛔虫、肝吸虫感染度特别
卵不会散失，检出率比直接涂片
法高。

不足：过硬和过稀的粪便不宜使 用本法。泡沫状的粪便会在玻璃 纸下形成许多微小气泡，妨碍镜
检。
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透明胶纸肛拭法
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一、材料：市售透明胶带（宽约2.5CM）、 载玻片、牛皮纸、圆底试管
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透明胶带纸粘贴载玻片
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载玻片透明胶带纸规格
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操作步骤：1.从载玻片上取下透明胶带纸
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操作步骤：2.将无胶的一面紧贴试管圆底， 让有胶的一面裹在外
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操作步骤：3.用裹在试管圆底外的透明胶带纸 在肛周左右转动粘压
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操作步骤：4.在肛周粘压后，从试管上取下透明胶带纸，两端拉紧， 让中部透明胶带纸（有胶一面）覆回载玻片，如不平用试管盖压平
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三、注意事项

于清晨受检者未排便、未运动时进行检查， 检查前不要清洗肛门，以免影响检出率。 操作过程中，要尽量暴露受检者肛门及附近
显微镜、温箱、解剖镜或放大镜、竹签、旧报纸、橡 皮筋。
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培养钩蚴材料：
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(二) 步骤 1.每管内加入冷开水约2ml。 2.将滤纸条沿长轴纵折，以保持挺直。 3.用竹签取0.5g粪便，涂于滤纸中段，左右各留 0.5cm，上下端各留2cm空白，不涂粪便。
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4.将涂布粪便的滤纸插入管中，但不应该接触管 底，滤纸条插入管中的深度以水只接触纸条而不 碰到粪便为度。
每份粪样取1～3张载玻片写上与检验号相
同的编号。

（二）将80目的尼龙绢摊在粪样上，用刮 棒压平后刮取粪便。
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二、操作步骤

（三）将定量板放置玻片中央，定量孔小孔朝 上，将粪样填满、抹平。约41.7mg细粪渣。 （四）垂直向上移去定量板，将亲水玻璃纸抖 掉多余水分，盖在粪样上。 （五）取另一张载玻片轻压粪样，均匀展开至
计算3张加藤片的虫卵数分别为A、
B、C，每克粪便虫卵数(EPG)为：
(A+B+C) ×8；如只有1张加藤片则应乘
以24。（1÷41.7≈24）
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三、注意事项

亲水性玻璃纸在使用前需全部浸入透明液中， 浸泡24小时以上。

刮取粪渣填入定量板必须填满全孔并抹平，压
制涂片时尽量使粪便均匀展开至边缘，并避免 粪渣溢出。
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亚洲钩蚴
美洲钩蚴
鞘纹
食道矛
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丝状蚴鉴别
美洲钩虫
十二指肠
钩虫
低倍镜下食 管矛明显 高倍镜下尾 部鞘膜横纹 明显
低倍镜下食 管矛不明显
高倍镜下尾部 鞘膜横纹不明 显
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丝状蚴鉴别
美洲钩虫
食管矛
十二指肠钩虫
鞘膜横纹
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亚洲钩蚴和美洲钩蚴生活或固定后的主要鉴别点
鉴别点
食道矛
检查法
低倍镜 高倍镜