医学检验论文

河南焦作职工医学院

毕业论文（设计）题目：检验乙肝两对半质量的比较分析

姓名：葛娟

学号：1562530063

专业：临床医学检验

年级：2015级

层次：高升专

完成日期：2016.01.25

指导教师：代晓凤

检验乙肝两对半质量的比较分析

【摘要】目的:探讨与分析临床检验乙肝两对半的检验质量影响因素性。方法：整理本医院在实际研究当中对乙肝两对半的检验质量影响因素的各种因素，同时对其实施相应综合措施进行探讨。结果: 根据讨论中所得的原因对其进行有效的控制，避免出现假阳性和假阴性结果,保证检验质量,为临床提供正确可靠的检测结果。结论: 全面、细致以及周到的具有综合性的措施能够在最大程度上使对标本质量产生的影响有所减少，对影响因素进行有效的控制，使检验标本质量得到了一定程度上的提高【关键词】乙型肝炎；血清标志物；检验质量

酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)广泛用于乙肝两对半检测。但ELISA测定中影响因素较多,有时可见到一些假阳性或假阴性,本文就ELISA测定乙肝两对半的影响因素做讨论。对ELISA与时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)检测方法进行比较,就包括试剂、标本、操作、干扰因素的影响进行分析。乙肝两对半的检验质量影响因素还包括使用仪器设备的功能以及检修、药物的影响等,一般检测时应从多方面排除干扰因素,避免出现假阳性和假阴性结果,保证检验质量,为临床提供正确可靠的检测结果。

1乙肝两对半定性与定量方法

1.1酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶联免疫吸附法(ELISA法)是为乙肝患者进行临床检测时常用的方法，因本身方法学的局限性，易造成HBV漏诊。ELISA是一种酶标记固相免疫测定技术。其基本原理是把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；并将抗原或抗体与某种酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性；测定是将受检样品（含待测抗原或抗体）和酶标记抗原和抗体按一定程度与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物；用洗涤的方法将固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例；加入底物，底物被固相载体上的酶催化变成有色产物，通过定性或定量检测有色产物量即可确定样品中待检物质含量，所以ELISA法是目前我国各级医院的检验科用来预防、诊断、筛查乙肝的主要技术手段。

1.2 时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）

时间分辨荧光免疫分析法师在荧光分析（FIA）的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析法。也是目前最灵敏的微量分析技术，其灵敏度高达10∧(-12)g/ml，较放射免疫分析(RIA)高出3个数量级。它利用了具有独特荧光特性的镧系及其螯合物为示踪物，通过标记多肽、蛋白质、抗体、激素、核酸探针、生物活性细胞，反应体系发生相关反应之后，采用时间分辨荧光免疫分析仪来测定最终产物中的荧光强度，再根据荧光强度与相对荧光强度的比值，可判断反应体系中的被测物浓度，以此完成定量分析。实际上是在荧光分析的基础上发展起来的，它是一种特别的荧光分析，它利用了荧光的波长其激发波长的巨大差异客服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的同时，时间分辨荧光免疫（TRF）分析法之所以能够成为一种更新，更灵敏的检测方法，主要取决于标记稀土离子的独特的荧光光谱特性，激发谱宽，STOKES位移大，荧光寿命长，通过采用高灵敏的时间分辨荧光分辨技术经延时，门宽选择，排除背景荧光的干扰，极大地提高信嗓比。此项分析技术具有灵敏度

高，稳定性好，线性范围宽，标记物制备简便，有效期长，不污染环境，操作简单，应用范围广等优点，是取代酶标放免的最佳免疫分析先进技术。

2 ELISA 与TRFIA检测方法的比较

对乙肝两对半的定量测定(TRFIA)和定性酶标测定(ELISA)的研究表明，两种方法对HBs－Ag,HBs-Ab,HBe-Ag,HBc-Ab的阳性检出率差异不明显，无统计学意义(P＞0.05)；TRFIA法的HBe-Ab 的阳性率差异高于ELISA法，有统计学意义(P＜0.05)；两者均可满足对乙肝两对半5项指标的检测要求。ELISA用于预防性筛查乙肝，可定性检测HBV，而TRFIA技术灵敏度高、稳定性好、特异性高、动态范围宽，用于乙肝患者临床诊断、观察疗效等方面，可提供动态数据指导临床接种乙肝疫苗，是理想的定量检测方法。“乙肝两对半”的检测结果意义在于反映机体感染HBV后免疫应答结果。

3样本采集与处理的影响

3.1标本的采集处理可对ELISA的检验质量产生不同程度的影响

标本及混有红细胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，（因此）严重溶血标本禁用。

3. 2相关报道显示样品的存放时间直接影响结果的准确性，室温下保存的血清标本

HBsAb从第5天、HBeAg从第7天、HBsAg从第9天开始就发生显著变化）（p<0.01）；4～8℃下保存的血清标本HBsAb从第7天、HBsAg从第14天开始发生显著变化（p<0.01），于-80℃低温保存的血清样本HBV血清标记物可在4个月内稳定保存（p>0.05）；采集的样品应及时进行检测，可避免因存放过久的检验误差。

3.3标本凝固不全，正常血液采集后1／2~2h开始凝固，18~24ｈ完全血块完全收缩

在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白血块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳（阴）性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。

3.4乙肝两对半定量检测能提供乙肝病毒标志物的精确含量

这不仅是方法学上的进步，在临床的使用上也有较大优越性。临床应用情况表明，乙肝两对半定量检测值的高低是诊断乙肝的可靠依据。资料显示，血清乙肝病毒血症水平的增加触发了机体免疫反应，结果导致肝脏损害，表现为转氨酶（ALT）升高。检测乙肝病毒含量不仅能较好地反应乙肝病毒携带者的病毒血清水平和感染强弱程度，对动态观察治疗前后乙肝病毒含量变化以及评价和预测疗效均有重要意义。因此，乙肝两对半定量检测的变化对评价和预测疗效均有意义，是疗效观察的有效指标。如伴随着