微生物常用染色法
常用的微生物染色方法
几种常用的微生物染色方法1简单染色不同的细菌，或者由于观察者所侧重观察的内容不同一，所以所使用的染料也有差异，但是简单染色的方法是一样的。
先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上菌膜区域，以覆盖菌膜为准。
按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤(见图5-2)。
最后得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。
如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。
2芽孢染色法芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌能产生内孢子，这些孢子耐高温、干旱及有毒化学试剂。
内孢子还能抵制细菌染色液的进入，在革兰氏染色法涂片染色时，革兰氏阳性菌的芽孢呈现无色。
然而，芽孢一旦着色后就很难脱色。
虽然芽孢通常可在革兰氏染色片中看到(芽孢由于不易让染料进入多呈现无色),但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，更便于观察。
其实验的操作方法与革兰氏染色类似。
主要的芽孢染色法有以下两种。
(一)孔雀绿染色法(1)将生有芽孢的斜而菌苔按革兰氏染色法涂片后，用饱和孔雀绿水溶液(约为7.6%)染10 min。
(2)用自来水冲洗。
(3)用0.5%番红液复染30%.(4)水洗，吸干。
(5)镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈绿色。
(二) 石炭酸复红染色法(1)按常规涂片。
(2)滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。
(3)涂片冷却后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。
(4)彻底水洗。
(5)用吕氏美蓝复染2 min -3 min。
(6)水洗、吸干。
(7)镜检：镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。
具体实验时，在对一些特殊芽孢染色时，需要对染色液和复染液进行修改。
3鞭毛染色鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，直径一般为10nm~20 nm,超出了光学显微镜的观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到鞭毛。
常用微生物染色方法
WOIRD格式革兰染色抗酸染色：分支杆菌属，诺卡放线菌属。
石炭酸复红染色，金永染色。
芽孢染色：用于区分细菌的芽孢和营养细胞。
结果芽孢染成绿色，营养细胞为红色。
晶体染色：观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。
结果晶体染成紫色，芽孢为透明椭圆形，仅见具有轮廓的折光体。
鞭毛染色：有赖夫生染色法、银盐染色法，西萨-基尔染色法等。
一般以西萨-基尔（Cesares-Gill）染法效果最佳。
异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色，直接涂片或改良阿伯特法染色。
墨汁荚膜染色：观察菌体有无荚膜，如新型隐球菌。
碳素墨汁。
镀银染色：螺旋体吉姆萨染色：螺旋体荧光染色魏申染色（wayson）染色：鼠疫耶尔森杆菌。
铬酸P、A、S真菌类染色。
结果：曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。
曲霉菌丝周边紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。
Mann氏甲基蓝伊红染色法：病毒包涵体染色。
Negri氏小体红色。
Nacchiavello氏染色：病毒包涵体染色。
结果：包涵体、立克次氏体均染红色，其余组织呈蓝色。
Crocott-Gomori氏六胺银法：新型隐球菌碘染色法吉姆萨染色：衣原体乳酸酚棉蓝染色，糖原染色：真菌，前者适用于所有真菌，呈蓝色。
吉姆萨染色，瑞氏染色：鞭毛虫，滴虫，锥虫，疟原虫，弓形虫，隐孢子虫等原虫。
三色染色，碘染色：阿米巴等原虫。
荧光素吖啶橙染色：疟原虫。
金胺-酚染色：隐孢子虫。
甲苯胺蓝，四胺银染色：耶氏肺孢子虫。
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细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
几种常用的微生物染色方法汇总
·健康科学·几种常用的微生物染色方法汇总黄波因微生物细胞比较小且透明，在普通的光学显微镜下不容易进行观察。
染色以后微生物细胞会与背景形成比较鲜明的色差，从而可以清楚地观察到微生物的形态，有利于鉴别、强化细化或细胞组分与周围环境之间产生的反差，方便利用普通光学显微镜对微生物细胞进行观察的简便方法。
一、微生物染色原理因微生物细胞含有大量的水分，所以对光线的吸收、反射及水溶液之间的差异不明显，机体属于无色、透明样，且与周围的环境背景之间也没有明显的反差，在普通的光学显微镜下不容易进行识别，所以必须对微生物进行染色，经过染色以后，菌体会与背景有明显色差的形成，才能更加清楚地观察到其形态与结构。
微生物细胞主要是有由蛋白质、核酸等两性电解质以及其他的化合物所组成，所以会表现出两性电解质的性质。
而两性电解质又兼具了碱性基、酸性基，在酸性溶液当中，会解离出含有碱性基呈碱性带正电；在碱性溶液当中，会解离出酸性基呈酸性带负电。
经过测定后，细菌等电pH值在2~5之间，所以在中性、碱性或是偏酸性的溶液中，细菌的等电点均小于上述中溶液的pH值，因此，细菌是带负电荷，容易和带正电荷的碱性染料相互结合，所以应用碱性染料色的比较多。
此外，微生物体内的各种结构的结合力与染料不同，所以可以使用各种染料对微生物的结构分别进行染色，便于观察。
二、染料的种类与选择染料可以分为2种类型：①天然染料，包含胭脂虫红、地衣素、石蕊、苏木素等，大部分都是从植物中所提取的，成分较为复杂。
②人工染料，又被称为煤焦油染料，大部分都是从焦煤油中所提取的，属于苯的衍生物。
大部分染料都属于带色有机酸或是碱类，有的也与有机溶剂相溶，为了使其能够在水中易溶，通常会把它们制作成盐类。
染料按照电离后的染料离子，所带的电荷性质，将其可分为以下几种类型。
（一）酸性染料该类染料进行电离以后，染料离子带负电，例如伊红、刚果红、苯胺黑等，可以和碱性的物质进行结合，成为盐；当培养基为糖类，而分解产酸的时候会使pH值下降，同时细菌所带的正电荷会增加，这时应该选择酸性染料，微生物容易被染色。
微生物常用染色法-PPT
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细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
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涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
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涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
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涂片见G+球菌，呈链状排列
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染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
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大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
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染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
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剂.也可用加热法促进着色.
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脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
常见的三种微生物染色方法
常见的三种微生物染色方法学院：生命科学专业：生物科学年级：2010级姓名：王亚军摘要：在用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察细菌的形状及某些细胞的结构。
通过对细菌的简单染色可初步认识细菌的形态特征；通过革兰氏染色可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性;通过对细菌的芽孢染色可初步了解芽孢杆菌的形态特征。
通过这三种常见的微生物染色方法，可对微生物的形态结构进行观察。
关键词：染料革兰氏染色无菌技术芽孢引言：学会油镜的使用；学会对细菌进行涂片；学习无菌操作技术；学会革兰氏染色法及芽孢染色法；了解芽孢杆菌的形态特征，观察押宝的形态、大小、着生位置。
用于为生物染色的染料，是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。
发色基团赋予化合物颜色的特征，助色基团则给予化合物能够成盐的性质仅含发色基团的苯化合物（称色原）即使带有颜色也不能作为染料，因为它不能电离，不能与酸或碱形成盐，对微生物没有结合力，很容易被洗脱或机械方法除去。
染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类，但在微生物染色中，碱性染料较常用。
常用的碱性染料有美蓝、结晶紫、碱性复红、番红、孔雀绿等。
实验内容：一、细菌的简单染色1、原理：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，碱性染料在电离时，其分子染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
故可用单一的碱性染料对细菌进行染色。
2、器材：（1）仪器：显微镜、酒精灯等（2）实验材料：菌种：枯草芽孢杆菌四联球菌染色剂：齐氏石碳酸复红染液3、操作步骤：（1）先将载玻片洗净，擦干。
（2）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴生理盐水，无菌从斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀，涂成薄膜，越薄越好，注意取菌不要太多。
（3）晾干：让涂片自然晾干。
(4)固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
(5)染色：滴加染液于涂片上，然也刚好覆盖涂片薄膜即可。
微生物的染色原理
微生物的染色原理
微生物的染色原理在实验室中被广泛应用，以便观察和研究微生物的形态、结构和分布。
常用的染色方法包括革兰氏染色、抗酸染色和目标特异性染色等。
革兰氏染色是最常用的微生物染色方法之一。
它基于细菌细胞壁的特性，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
染色过程中，先通过紫色染料普鲁士蓝霜处理细菌细胞，使其呈紫色。
随后用碘酒金溶液进行固定，不易被冲洗掉。
然后使用乙醇洗去多余染料，并通过红色染料孔雀石绿进行反染，使革兰氏阴性细菌呈绿色。
抗酸染色用于分辨酸杆菌，如结核分枝杆菌和变形杆菌等。
这种染色方法基于酸性染料的特点，如琼红和文氏染料，能够着色酸杆菌。
染色过程包括涂片染色、定着、洗涤和固定等步骤，最终观察酸杆菌的红色或粉红色。
目标特异性染色常用于检测特定微生物或其特定组分。
例如，荧光染色可以利用荧光染料与微生物靶标结合，使其发出荧光信号；免疫染色可以利用抗体识别特定微生物蛋白质，再用染色剂标记抗体，显示出目标微生物的位置。
总之，微生物染色的原理是通过特定的染料与微生物结构或组分的相互作用，使其呈现出可视化的颜色或荧光信号。
这些染色方法对于微生物的鉴定、分类和研究具有重要的意义。
微生物染色液配制及染色法
微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。
滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。
水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。
革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。
染液如因蒸发减少时，应随时添加。
染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
常用微生物染色方法
原理
一 通透性学说 二 等电点学说
三 化学学说
革兰氏阳性菌含有大量核糖 核酸镁盐，其可与结晶紫-碘 结合成大分子复合物，因而 不易被95％酒精脱色；而阴 性菌中此物质含量较少，因 而吸附染料量很少，分子量 也较小，故易被酒精脱色。
细菌涂片的制备
涂片：取一张洁净载玻片，用已灭菌的接种环取一环 生理盐水于玻片中央，再将接种环灭菌，取菌与生理 盐水磨匀，涂布成1cm×1cm大小区域的均匀薄膜，使 盐水磨成灰白色为宜，接种环灭菌后放回试管架。 干燥：涂片最好在室温下自然干燥或将标本片涂抹面 向上，置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干。 固定：常用火焰加热法，手执载玻片一端，标本面向 上，迅速来回通过火焰三次。
操作步骤 1、涂片经火焰固定，加石碳酸复红溶液用火 焰微热至出现蒸气约3分钟（防止染液蒸发干， 必要时可续加第一液数滴，水洗。 2、用3%盐酸酒精脱色约1分钟，直至涂片无色 或淡粉红色为止，水洗 3、再加复染液复染1分钟，水洗，干后镜检。 结果判断 抗酸杆菌呈红色，其他细菌及细胞 呈蓝色。
注意事项 1．抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加 标本涂片的厚度，发提高检出率。染厚涂片时， 须掌握复染时间，如果背景过深，会影响镜检。 痰标本找抗酸杆菌，应先高压杀菌，避免实验室 污染。 2．尿、粪中找到抗酸杆菌须作潘氏染色，排除 耻后杆菌，才能报告。 标本中找到抗酸杆菌，须作传染病报告。 3．离心应为3000转/分，30分钟。 4．涂片至少保留三个月。
注意点
⒈取菌量不可太多，涂片应均匀，否则影响染色结果 ⒉干燥时切忌高热，以免细菌变形 ⒊固定时温度不可过高时间不可长，以防涂抹面 烧焦及玻片烧裂
固定的目的
杀死细菌，使菌体蛋白凝固，染料易于着色 改变细菌通透性，以利于染料进入细胞内 使菌体与玻片粘附牢固，在染色时不致被染 料和水冲掉
常用的微生物检验方法
常用的微生物检验方法1. 菌落计数法：通过将微生物样品接种在固体培养基上，经过一定时间的培养，形成可见的菌落，通过计算菌落数量来估计微生物浓度。
这种方法适用于细菌和真菌的定量分析。
2. 涂片染色法：将微生物样品涂在载玻片上，经过固定、染色、清洗等步骤，可以在显微镜下观察到微生物的形态和结构。
这种方法常用于细菌的形态观察和分类鉴定。
3. 荧光染色法：利用荧光染料对微生物细胞进行染色，通过荧光显微镜观察。
荧光染色法具有灵敏度高、分辨率高、专一性强等优点，适用于微生物快速检测和定量分析。
4. 核酸分子检测法：通过提取微生物的核酸（DNA或RNA），利用聚合酶链式反应（PCR）等分子生物学技术进行扩增、检测和分析，可实现微生物的定性和定量检测。
这种方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点。
5. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过检测微生物特异性抗原或抗体，实现微生物的定性和定量检测。
ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于微生物感染病的诊断和监测。
6. 生物发光法：利用微生物产生的生物发光反应进行检测，可以实现微生物的快速定性和定量分析。
生物发光法具有灵敏度高、检测速度快、可线性范围宽等优点，适用于对微生物污染的快速检测。
7. 侵袭性检测法：通过无菌操作将微生物接种至实验动物体内，通过观察动物的病理变化和死亡情况来评价微生物的毒力和致病性。
这种方法适用于对微生物的生物学特性进行研究。
8. 培养法：通过将微生物样品接种在适宜的培养基中，进行一定时间的培养，通过观察培养物的生长情况和变化来判断微生物的种类和数量。
这种方法适用于多种微生物的检测和鉴定。
常用的微生物染色方法
常用的微生物染色方法微生物染色是微生物学研究中非常重要的方法，通过染色可以使微生物的形态和结构更加清晰，便于观察和研究。
下面将介绍几种常用的微生物染色方法。
1. 革兰氏染色法（Gram染色）：革兰氏染色法是最常用的微生物染色方法之一、该方法可以根据细胞壁结构的差异将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有较厚的细胞壁，可以保留紫色的革兰氏染料-碘-酒精复合物，呈紫色；而革兰氏阴性菌由于细胞壁较薄，无法保留染料-碘-酒精复合物，经酒精洗涤后以褪色方式显现嫩蓝色。
2. 去瓶球菌染色法（Ziehl-Neelsen染色）：该染色方法主要用于诊断结核菌感染。
结核菌具有酸酒杆菌的特征，该染色方法通过热定性进行，即将杆菌加热固定在玻璃片上。
染色液为仲子红与甲苯红的酒精醚溶液，结核菌上的脂质物质可以吸附染色液，呈现红色。
3.金黄色葡萄球菌染色法：金黄色葡萄球菌染色采用的是接种在含有豆粉和盐的琼脂糖平板上的细菌进行。
染色液为碘酸钾和碘甘液的混合物，在细菌细胞内部染出棕色团块。
4. 吉姆萨染色法（Giemsa染色）：吉姆萨染色法主要用于染色血液细胞、细菌和寄生虫等。
染色液为吉姆萨染料溶液，通过染色液和蒸馏水的混合来染色。
吉姆萨染色方法对捕获染色成分极为敏感，将蓝色碱性染料用于碱性碳水化合物和核酸材料，将红色和紫红色酸性染料用于酸性成分，如蛋白质和细胞质组分。
5. 格拉姆-韦瑞染色法（Gram-Weigert染色）：该染色法用于菌体内基质和胞外多糖的特异染色。
六元蔗糖银试剂与格拉姆染色特殊染料结合，生成黑色的沉淀物，用以观察菌体内多糖地点和部位。
6.碘染色法：碘染色用于染色藻类和真菌。
该染色法主要原理是将菌丝或细胞的内部特异性细胞器染为紫黑色，以便更容易观察和研究。
7.寇歇染色法：寇歇染色法主要应用于真菌的染色，染色方法与碘染色类似，可以观察到真菌菌丝和孢子的形态和结构。
总结起来，微生物染色方法有很多种，每种方法适用于特定的微生物和研究目的。
微生物的染色方法
微生物的染色方法微生物的染色方法是一种实验技术，用于将细菌、真菌、原虫等微生物在显微镜下进行观察和研究。
染色方法能够使微生物结构和特征更加清晰可见，便于对其进行分类、鉴定和研究。
常用的微生物染色方法包括：常规染色、特殊染色和免疫荧光染色。
常规染色是最基本的微生物染色方法，常用的常规染色方法有革兰氏染色、李斯特氏染色和孢子染色等。
其中，革兰氏染色是最常用的常规染色方法之一。
革兰氏染色的步骤包括将微生物样品涂在玻璃片上，加热固定，然后依次经过靛基紫、碘酒、酒精和脱色液的染色处理，最后用苏木精红染色，过脱色液和背景脱色液，最后在显微镜下观察。
革兰氏染色可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是微生物鉴定中重要的基础染色方法。
特殊染色是根据微生物的特殊结构和特征进行染色的方法，常用的有抗酸染色、肉眼观察的染色和木纹酸染色等。
抗酸染色常见的有抗酸快速染色法和冷抗酸染色法。
抗酸染色是其中最为常见的一种特殊染色方法，适用于结核菌、非结核分枝杆菌等需要染色的抗酸杆菌。
抗酸染色的步骤有固定、染色液处理、脱色液处理等，最后在显微镜下观察。
免疫荧光染色是一种利用特异性抗体和荧光染料标记来检测微生物的方法。
它主要应用于对细菌、病毒等病原微生物的检测和鉴定。
免疫荧光染色的步骤包括样品处理、抗原检测、抗体处理、荧光染料标记等。
通过免疫荧光染色，我们可以直观地看到染色的微生物在显微镜下呈现出荧光的强度和颜色，以此来判断微生物的存在与数量。
除了上述常用的染色方法外，还有一些特殊的染色方法，如荧光原位杂交（F I S H）染色、电子显微镜染色等。
荧光原位杂交染色是一种特异性的D N A或RN A测序方法，通过标记了荧光探针的原位杂交来检测微生物中特定的基因序列。
电子显微镜染色是一种特殊的染色方法，主要用于电子显微镜下对微生物进行观察和研究，通过金属薄膜染色或重金属染色使微生物在电子显微镜下呈现高对比度的图像。
总结来说，微生物的染色方法有多种，包括常规染色、特殊染色和免疫荧光染色等。
细菌的染色方法范文
细菌的染色方法范文细菌染色是一种常见的实验方法，用于从复杂的细菌群体中提取有关其结构、形态和一些特定性质的信息。
它是微生物学研究中不可或缺的工具。
本文将介绍常见的细菌染色方法，包括简单染色、差异染色和特殊染色。
1.简单染色简单染色是最基本的细菌染色方法，使用一种染色剂将细菌细胞全部染色。
最常用的染色剂是碘蓝和甲基蓝。
染色方法如下：(1)将细菌涂片固定在玻片上，可以使用热固定法或化学固定法。
(2)在涂片上滴加碘蓝或甲基蓝溶液，让其渗透细菌细胞。
(3)用水冲洗玻片以去除多余的染色剂。
(4)用纸巾将玻片上的水分吸干。
(5)在显微镜下观察染色的细菌。
2.差异染色差异染色是通过使用多种染色剂及/或特定条件，使不同种类或部分细菌以不同颜色呈现。
主要的差异染色方法有革兰氏染色和酸性忍受染色。
(1)革兰氏染色革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，主要用于将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加革兰氏紫素，让其渗透细菌细胞。
-用碘液固定染色，形成染色颗粒。
-用乙醚或酒精去除多余的染色剂。
-滴加脱色剂，使革兰氏阴性细菌脱色，而革兰氏阳性细菌保持染色。
-用水冲洗玻片以去除脱色剂。
-在显微镜下观察染色的细菌。
(2)酸性忍受染色酸性忍受染色是一种特殊的染色方法，适用于具有特殊的抗酸性结构的细菌，如结核菌和其他抗酸杆菌。
染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加浓硫酸，让其固定和脱水细菌。
-滴加酸性忍受染色液，让其渗透细菌细胞。
-冲洗玻片以去除多余的染色液。
-在显微镜下观察染色的细菌。
3.特殊染色特殊染色方法主要用于染色细菌的特定部分或结构，以使其更清晰可见。
一些常见的特殊染色包括荧光染色、胞外多糖染色和内孢子染色。
(1)荧光染色荧光染色是一种利用荧光染料如荧光素和荧光素同系物染色细菌的方法。
这种染色方法可以给细菌标记上特定的荧光标记物，以在显微镜下观察细菌。
荧光染色是现代生物学和医学研究中常用的方法之一(2)胞外多糖染色胞外多糖染色是一种常见的细菌染色方法，用于染色细菌细胞表面的胞外多糖。
微生物实验染色技术
微生物实验染色技术
微生物实验常用的染色技术有：
1. 革兰氏染色：用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
2. 肥达氏染色：用于观察细菌胞壁结构，对不同菌种有区分性。
染色后革兰氏阳性菌染色成黑色，革兰氏阴性菌为红色。
3. 石蜡包埋：用于制备细胞切片，方便观察细胞结构。
4. 原生质染色：用于观察微生物细胞内部结构，比如核、质粒等。
可用甲苯染液或尼格氏染液染色。
5. 酸性染色：利用染料与细胞核染色质亲合性及电性相异之特性强烈的反应染色。
常用的有苏木精染液、伊红染液，用于观察细胞核。
6. 碱性染色：利用染料与细胞质内基质颗粒亲合性及电性相异之特性强烈反应染色。
常用的有甲苯绿染液、甲苯蓝染液，用于观察细胞质。
细菌常用的染色方法
细菌常用的染色方法细菌是一类微生物，它们在自然界中广泛存在，包括空气、土壤、水体等各种环境中。
为了研究细菌的形态、结构和功能，科学家们发明了各种染色方法。
本文将介绍细菌常用的染色方法，包括革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色。
一、革兰氏染色革兰氏染色是最常用的细菌染色方法之一，它是根据细菌细胞壁的组成差异来区分细菌的。
革兰氏染色的步骤包括：将细菌涂片烘干，然后用碘酒浸泡，再用乙醇洗涤，最后用碱性颜料（如紫色染料）染色。
通过革兰氏染色，细菌可分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。
革兰阳性菌的细胞壁较厚，能保持紫色，而革兰阴性菌的细胞壁较薄，易被乙醇洗去紫色染料，然后再染红色。
革兰氏染色可以帮助科学家们快速区分细菌的类型，对于细菌的鉴定和分类具有重要意义。
二、抗酸染色抗酸染色是一种特殊的染色方法，用于检测结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌。
这些细菌具有特殊的脂质组分，使它们不易被一般染色方法染色。
抗酸染色的步骤包括：将细菌涂片加热，然后用碱性染料（如碱性红染料）染色，再用酸洗去多余染料，最后用蓝色染料（如甲基蓝）染色。
通过抗酸染色，结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌可呈现红色，而其他细菌则呈现蓝色。
这种染色方法对于抗酸杆菌的检测非常重要，可以帮助医生快速诊断结核病等疾病。
三、吉姆萨染色吉姆萨染色也是一种常用的细菌染色方法，它可以帮助科学家们观察细菌的形态和结构。
吉姆萨染色的步骤包括：将细菌涂片用吉姆萨染料（由蓝色和红色组成）染色，然后用水洗去多余染料，最后在显微镜下观察。
通过吉姆萨染色，细菌的细胞壁、细胞质等结构可以呈现出不同的颜色，帮助科学家们研究细菌的形态和结构特征。
吉姆萨染色在细菌学研究中应用广泛，对于揭示细菌的性状和特性非常重要。
细菌染色方法的研究和应用对于细菌学的发展和医学诊断具有重要意义。
除了上述介绍的革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色，还有许多其他的染色方法，如苏木精-伊红染色、格拉姆-玛尔基纳染色等。
这些方法都有各自的特点和适用范围，在细菌学研究和临床诊断中起到重要的作用。
微生物基本染色方法
基本染色方法1.染色准备：染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。
菌落涂片时，先取生理盐水 1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
2.几种基本染色方法2.1 革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。
染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
2.1.1结晶紫溶液A液：结晶紫2g95％乙醇20mlB液：草酸铵0.8g蒸馏水80ml需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2.1.2碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。
最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
2.1.3 脱色液：95％乙醇。
2.1.4复染液A. 贮存液：沙黄 2.5g95％乙醇100mlB. 应用液： A液 10ml蒸馏水 90ml2.1.5染色方法：A．涂片经火焰固定，加结晶紫液染30s，清水冲去染液。
B．加碘液染30s，水洗。
C．加脱色液，不时摇动约5～10s，至无紫色脱落为止，水洗。
D．加复染液，染30s，水洗。
E．干后镜检。
3、抗酸染色抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。
染厚涂片时，须掌握复染色时间。
如果背景过深，影响镜检。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法(我们使用的方法)。
211066664_了解临床微生物检验的常用染色方法
医药健闻了解临床微生物检验的常用染色方法李玉梅 （自贡市第四人民医院，四川自贡 643000）微生物细胞含有大量的水分（通常在80%以上），对光线的吸收和反射与水溶液差别不大，与周围背景没有明显的明暗差。
所以，除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外，绝大多数情况下都要经过染色后，才能在显微镜下进行观察。
但是，染色就意味着微生物处于死亡状态，其形态、结构也会发生一些变化，并不能完全代替活细胞的真实状况。
基本原理微生物染色通常有化学和物理两种方法。
其中，物理方式通常采用渗透、染料吸附等，化学方法则利用染料与细胞物质进行化学反应。
通常来说，酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。
但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。
细菌的等电点较低，呈现出酸性。
因此，一般细菌学经常会使用碱性染料染色。
染色还可能与菌体结构、膜的状况（通透性、孔大小等）、细胞结构，以及染色时的电解质、温度等有一定关系。
染料染料分为人工和天然两种。
天然染料存在于自然界当中，例如苏木素、胭脂虫红等，通常提取于植物当中。
人工染料一般在煤焦油当中获得，属于苯衍生物。
染料通常为有机酸或碱类，在有机溶剂当中易溶解，水中难溶解，但可以制成盐类而溶于水。
染料还可分为酸性、碱性、中性、单纯四大类。
其中，酸碱染料并不是依据溶液的pH值决定，而是其自身所带的助色基团决定。
将助色基团电离之后，查看电荷的带电情况。
通常而言，碱性染料助色基团为正电荷，酸性染料助色基团为负电荷。
因此，碱性染料通常能电离无色阴离子和有色阳离子，如龙胆紫、亚甲基蓝等；酸性染料通常能电离一些无色阳离子和彩色阴离子，如伊红、苦味酸、加那绿等。
中性染料是一种复合型染料，通常是将酸碱染料进行混合。
单纯染料通常亲和力低，染色的能力通常由被染色物决定，若能够较好地溶于被染色物当中，则染色能力强，且单纯染料难以溶于水，可溶脂肪溶剂，例如紫丹类。
微生物的鉴定与分类方法
微生物的鉴定与分类方法微生物是指在肉眼下无法看到的微小生物，包括细菌、真菌、病毒等多种类型。
微生物在人类社会中具有非常重要的作用，既有益处也有危害。
因此，对微生物进行鉴定和分类是十分必要的，本文将介绍一些微生物的鉴定与分类方法。
一、细菌的鉴定与分类方法1. 形态学方法细菌的形态学特征包括菌体的大小、形状、颜色、质地等。
通过显微镜观察细菌的形态特征，可以初步判断细菌的类别。
2. 染色法常用的染色法有革兰氏染色法、酸杆菌染色法等。
这些染色方法可以通过染色后的颜色反映出不同细菌的内部构造和化学成分。
3. 生化试验法利用不同细菌对同一物质的不同反应进行分类。
比如利用MM测试葡萄糖在酵母菌中的代谢反应情况，初步判断出酵母菌的种类。
二、真菌的鉴定与分类方法1. 形态学方法真菌的形态学特征与细菌相似，包括菌体的大小、形状、颜色、质地等。
通过显微镜观察真菌子实体的形态，可以初步判断真菌的类别。
2. 细胞壁化学成分分析法真菌的细胞壁主要由多糖、蛋白质和小分子化合物组成，通过分析细胞壁中的化合物种类和含量，可以对真菌进行分类。
3. 分子生物学方法利用PCR扩增真菌的特定基因或DNA序列，然后对扩增产物进行分析，可以快速准确地对真菌进行鉴定和分类。
三、病毒的鉴定与分类方法1. 组织培养法通过利用感染病毒的细胞进行培养，观察细胞的病变情况并检测病毒复制情况，确定病毒类型。
2. 免疫学方法利用病毒所携带的特异抗原，通过免疫学试验检测血清中的抗体和抗原，对病毒进行鉴定和分类。
3. 分子生物学方法利用PCR扩增病毒的特定基因或DNA序列，然后对扩增产物进行分析，可以快速准确地对病毒进行鉴定和分类。
总之，微生物的鉴定与分类方法有多种，需要根据不同微生物类型采用不同方法。
除了以上三类微生物外，还有其他微生物如真菌的一种子类物质被称作酵母菌,氧化器类蛋白與乙白酒酵母等微生物也需要进行分类和鉴定，才能最大程度地了解其性质和应用前景。
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BASO革兰染液
抗酸染色
萋__纳抗酸染色法步骤: 细菌涂片经火焰固定,加石碳酸复红溶液,加热至 有蒸气出现,切不可沸腾.染液因蒸发减少时,应随时补充,防止染
液蒸干 .持续5 min,水洗,甩干.
滴加3%盐酸乙醇脱色,不时摇动玻片至红色脱落 为止,水洗,甩干. 加吕氏美蓝复染液数滴复染1min,水洗. 干后置显微镜下镜检. 抗酸杆菌呈红色,非抗酸杆菌呈蓝色.
涂片见G-杆菌，形似肠杆菌
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
涂片见G+球菌，呈接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
复染
复染液作为复染以便观察,复染不宜太强,以免 掩盖初染的颜色.
常用染色法
– –
单染色法 只用一种染料染色,常用吕氏美蓝,结晶 紫和稀释石碳酸复红等. 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
应用
用革兰氏染色将几乎所有细菌分为G+和G-细 菌两部分.不同 染色反应细菌细胞壁结构差异 较大,致病性各有特点,对不同抗生素的敏 感性 也有差别.在抗生素敏感试验中有直接的指导 意义.
抗酸染色
抗酸染色是细菌着色后不被盐酸乙醇脱色的染 色方法.
染色方法
) 先将碳酸复红染色,加温促使菌体着色,再用 3% 盐酸乙醇脱色.最后用美蓝复染,末脱色细 菌呈红色为抗酸性细菌,脱色细菌呈蓝 色为非抗酸性细菌.
微生物常用染色法
朱葵向
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
固定
目的是杀菌.凝固细菌蛋白及结构,便于染色.避 免在水洗过程中被水冲掉. 通常用火焰加热固 定,将涂片在火焰中迅速通过3次,以手背皮肤接 触玻片不烫为佳.
染色
根据检验目的不同,选择不同染色方法进行染 色.染色时滴加染色液以覆盖涂面为佳，染色 时间则随时间而定
媒染
使染料固定于被染物引起细胞膜通透性改变. 常用明矾,鞣酸,金属盐和碘作为媒染 剂.也可用加热法促进着色.
BASO抗酸染液
染色法原理
单染色 可选用任何一种碱性染料使细菌着色,观察到 不同细菌形态大小及排列的特征.
染色法原理
复合染色 用两种以上的染料染色,不同的细菌着色不同, 不但通过形态及排列,可通过染色反应性来鉴 别细菌,称为鉴别染色.常用有革兰染色和抗 酸染色.
革兰染色
染色方法:先以结晶紫液初染,后以卢戈氏碘液 媒染,使脱色的细菌 显红色,为G-菌.末脱色细 菌呈紫色为G+菌.
革兰染色
– – – – –
细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. 加碘液媒染1min,水洗,甩干. 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗, 甩干. 加稀释石碳酸复红或沙黄染液数滴进行复染,约30S,水洗. 干后显微镜下镜检观察结果.革兰阳性菌染成紫色,革兰阴 性为红色.