如何看抗体检测结果及检测应用.ppt

应用
动态检测
➢ 4周龄、10周龄猪群，每次20-30样本
➢ 主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体,延迟 转群或免疫等)，如果S/P≥2.5的比例超过5%，则判断该场蓝耳不稳定， 有感染；没有则稳定。
三、伪狂犬
伪狂犬gE：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平 均值必须大于或等于0.3；否则试验无效。
文档密级：内部公开
如何看抗体检测结果及抗体检测应用
一、猪瘟
ELISA原理 ——阻断（竞争）ELISA
阻 断（竞争）ELISA 原理
洗
加
抗
入
体
抗原
样
品
涤 + 酶 标 记
洗 涤 + 底 物
物
例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB
淡 蓝 色
终 止 读 数
蓝 色
猪瘟疫苗的免疫评估—关注两点
阳性率：
➢ 选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认 没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗
➢ 连续采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、 42天检测抗体水平
➢ 要求：CSFAb Block≤30%仔猪占20%-40%时为首免 日龄(依据感染压力和平均阻断率而定)。
二、蓝耳
Leabharlann BaiduELISA原理 ——间接ELISA
应用—净化
母猪群,公猪群(全部) ➢ 过去6-12个月没有使用全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗 ➢ 若S/N≤0.6 则淘汰（对于怀孕母猪:可以先隔离,产后2周淘汰）; ➢ 若0.6<S/N≤0.7 淘汰或隔离2周后重复检测,阳性者淘汰; ➢ 间隔6,12个月重复检测全群,若前后两次检测全部为阴性，则后续 检测不需要全群采样,可以按季度检测:每群随机采样15-20份; ➢ 若季度检测时出现阳性猪只,其所在猪舍则需要全部检测,阳性淘汰
商品猪群 ➢ 免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份 ➢ 要求：gE抗体检测全部为阴性； ➢ gB抗体检测阳性率≥95%
伪狂犬的评级标准：
➢ 伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场
➢ 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳 定场
➢ 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率达到20%以 上，则为阳性不稳定稳定场
间 接 ELISA 原理
洗
加
抗
入
体
抗原
样
品
涤 + 酶 标 记
洗 涤 + 底 物
物
蓝 色
终读 止数
无 色
结果判断
结果判定：蓝耳抗体（S/P≥0.4，判为阳性结果； S/P<0.4，判为阴性结果）
➢ 免疫猪群 0.4＜S/P≤2.5；对于过高抗体种猪，隔离饲养，2周后 采血检测，若抗体处于上升趋势的种猪则淘汰
检测方法
➢ IDEXX PRV gI ELISA S/N≤0.6 阳性，S/N＞0.7阴性0.6<S/N≤0.7 隔离2 周后重复检测
普查结果分析：
➢ 低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化
➢ 高感染群：种猪阳性率10%以上，低于30%，可做净化；高于 30%，通过疫苗控制，来稳定猪群
伪狂犬疫苗的免疫评估—针对阴性场
➢ 猪瘟抗体（阻断率（Blocking）≥40%，判为阳性结果；30%＜ Blocking＜40%，判为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结 果）；
➢ 免疫合格率：阻断率（Blocking）≥50%的，即为免疫合格。免 疫合格的比例即为免疫合格率。
变异系数： Coefficient of Variation (CV)
变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表 示
➢ 公式如下
标准偏差（STDEV）
CV=
平均阻断率
X 100%
➢ CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应
➢ CV≥60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值
猪瘟检测的应用
免疫评估：
➢ 商品猪：猪瘟二免后4-6周 ，要求：阳性率 ≥80%,CV≤40%
➢ 非免疫猪群 S/P值≥0.4 淘汰或隔离饲养
应用
公猪 ➢ 季度性监测全部公猪 ，一年4次 ➢ 要求： S/P≥2.5公猪暂停使用(1-2个月)或PCR确认感染状态
母猪 ➢ 季度性监测母猪 ➢ 要求：S/P应主要在2.5 ≥ S/P ≥0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳)
后备母猪和后备公猪 ➢ 在引进种群前1个月，全群监测 ➢ 要求：S/P≥2.5和S/P≤0.4暂停引入繁殖群
判定结果：如果S/N值低于或等于0.60，样品应判定为阳 性；如果S/N值大于0.70，样品应判为阴性；处于 0.6~0.7的样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。
伪狂犬病毒
gB片段
gE片段
疫苗病毒片段
采样要求
猪群PRV感染状况的普查
➢ 公猪群：全部采样
➢ 生产母猪群：随机采样30个样本
➢ 15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本
商品群
➢ 随机抽样检测（如5周、15周龄猪）或设立非免疫的哨兵 猪（非免疫猪）:20-30头/批作为哨兵猪（监测PRVgE和 PRVgB抗体,评估但不涉及淘汰）
以人为本 以正兴邦
➢ 种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求 ：免 疫合格率≥80%（严格一点，要≥90%）,CV≤40%
➢ 后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种 舍前1个月（6-6.5月龄），要求： Blocking ≥40%， 阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。
猪瘟检测的应用
仔猪首免日龄的确定：