食管鳞癌组织中Slug、Vimentin、E-cadherin与血管生成拟态的表达及意义

食管鳞癌组织中Slug、Vimentin、E-cadherin与血管生成

拟态的表达及意义

周芳芳;陈冰

【摘要】目的观察食管鳞癌(human esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白锌指转录因子snail2(Slug)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)与血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的表达,并探讨其临床意义.方法收集120例ESCC组织采用CD34/PAS套染检测VM情况;免疫组化法检测Slug、血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和Vimentin,E-cadherin表达.结果在120例ESCC中Slug的阳性表达与ESCC患者年龄、性别无关(P＞0.05),但与分化程度、淋巴结转移、临床分期、脉管癌栓形成等有关(P ＜0.05);Slug,Vimentin在有VM组阳性表达率明显高于无VM组(P＜0.05),且均与VM表达呈正相关(r=0.473、0.396);E-cadherin在有VM组阳性表达率明显低于无VM组(P＜0.05),与VM表达呈负相关(r=-0.191);VE-cadherin,VEGF在Slug阳性组的阳性表达率明显高于Slug阴性组(P＜0.05),两者均与Slug表达呈正相关(r=0.405,0.445).结论 Slug调控的上皮间质转化可能参与了食管鳞癌中血管生成拟态形成过程,另外Slug的高表达可能提示ESCC患者的不良预后.

【期刊名称】《山西医科大学学报》

【年(卷),期】2017(048)002

【总页数】5页(P144-148)

【关键词】Slug;波形蛋白;E-钙黏蛋白;血管生成拟态;上皮间质转化;食管鳞癌

【作者】周芳芳;陈冰

【作者单位】皖南医学院病理学教研室,芜湖241000;皖南医学院病理学教研室,芜

湖241000

【正文语种】中文

【中图分类】R735.1

血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是一种不依赖于内皮细胞的肿瘤新生血管,是近年来肿瘤血管的研究热点,其在缺氧环境下由HIF-1α[1]诱导VEGF[2]、VE-cadherin[3]等分子的经典信号通路的相关机制已经成熟,但有研究发现,COX-2[4]、TFPI-2[5]、小分子核酸[6]、Mig-7[7]等均参与了血管生成拟态的形成,证实了血管生成拟态的形成机制可能是非常复杂的多信号调控的多条通路的过程;另外在研究

血管生成拟态形成过程中发现肿瘤细胞是通过自身变形和细胞外基质重塑构成血管样结构,因此推测肿瘤细胞可能是通过EMT过程来实现肿瘤细胞的变形从而形成VM,Slug是锌指蛋白家族中成员之一,参与调控多种恶性肿瘤的EMT过程。

本研究通过免疫组织化学法检测食管鳞癌中Slug及EMT相关分子Vimentin、E-cadherin的表达,并结合临床病理特征和分析Slug、EMT相关分子Vimentin、E-cadherin与VM之间的相关性,初步探讨Slug调控的EMT在食管鳞癌中VM形

成过程中发挥的作用,旨在为研究VM形成机制和临床ESCC抗血管治疗提供新思路。

1.1 临床资料

1.1.1 病例来源及特征收集2012-06～2014-06皖南医学院附属弋矶山医院食管

鳞癌手术切除标本120例,其中男性患者96例,占80%;女性患者24例,占20%;年

龄为42-77岁,平均(60.3±7.5)岁;所有患者术前均做过活检,无家族史,术后经由3

位长期从事病理诊断的高年资医师确诊为食管鳞癌,手术前均无放化疗史。

1.1.2 组织学分级和临床分期根据肿瘤的分化程度组织学分级:高分化31例,中分化70例,低分化19例;根据肿瘤浸润食管深度分为:浸润至黏膜层及浅肌层68例,深肌层及外膜层52例;淋巴结转移者41例,无转移者79例;有脉管癌栓形成47例,无脉管癌栓形成73例;根据TNM分期进行临床分期:Ⅰ-Ⅱ期70例,Ⅲ-Ⅳ期50例。

1.2 主要试剂

抗体Slug和VE-cadherin均购自Lifespan Bioscience公司,抗体CD34、VEGF、E-Cadherin以及Vimentin均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;DAB显色试剂盒和二抗试剂盒均购自福州迈新公司,PAS染色试剂盒购自贝索生物公司。

1.3 实验方法

1.3.1 CD34/PAS双重染色法观察食管鳞癌VM ①根据免疫组化SP法,将抗体

CD34免疫组化步骤到DAB显色反应,镜下观察到血管内皮着色后,水流冲洗1 min 终止显色反应。②0.5%高碘酸1滴,还原10 min,水流冲洗10min。③Schiff试剂

1滴,切片放于避光湿盒,置于37 ℃孵箱反应20 min,待目测组织变红色终止反应,

细流水水冲洗20 min。④苏木素复染细胞核2 min。⑤50 ℃温水返蓝1 min,常

规脱水,封片。PAS染色阳性对照为正常胃黏膜呈樱桃红色。

1.3.2 血管拟态(VM)评定方法应用CD34/PAS套染后显微镜观察到由肿瘤细胞构成的管腔样结构,且管壁见不到内皮细胞、腔内可见红细胞或无红细胞、管壁全部

或部分PAS阳性、免疫组化CD34(-)的均可判定为VM;不论管腔内有无红细胞,管壁出现CD34(+)的血管,均判定为内皮依赖性血管。血管拟态的评定由三位长期从

事病理诊断的高年资医师盲法读片。

1.3.3 免疫组化染色及结果判定实验用已知阳性作为对照,阴性对照中PBS代替一