生物测定

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农药生物测定课程论文

姓名：万宝荣

学号：2０1０210318

玉米象对4种杀虫剂的生物测定方法研究

摘要:通过对杀铃脲、阿维菌素、印楝种子提取物、水菖蒲粗提物对玉米象胃毒、熏蒸、忌避、触杀室内毒力测定试验的设计的叙述,在实际中通过试验验证，这4种杀虫剂是否对玉米象起到防治效果，为其具体的防治提供依据。

关键词:玉米象；杀铃脲；阿维菌素；印楝种子提取物；水菖蒲粗提物;生物测定

玉米象（SiｔophiｌuｓzeaｍaiｓＭotschｕlsky)属鞘翅目,象甲科。别名米牛、铁嘴。它在我国及世界各地均有分布,寄主为玉米、豆类、荞麦、干果[1]。幼虫只在禾谷类种子内蛀食，成虫还可为害养麦、豆类、干果等[2]。玉米象是我国头号储粮害虫,在粮食仓储期间危害范围最广、危害速度最快，造成损失最大,而且全国各地均有分布[3]。此虫食性极其复杂，一般含淀粉植物的果实或种子均受其危害。在我国主要为害玉米、麦类、稻谷类、高粱等粮食作物,也对中草药材，各种干鲜水果和水果造成损失。其整个幼虫期都在粮粒内蛀食为害，隐蔽性很强，不易防治,成虫则啃食为害谷粒。被危害的粮粒，几乎蛀成空壳或碎屑。大量发生时，虫体自身代谢活动会导致储粮水分增加，粮温升高，引起储粮发热、霉变与结块,造成储粮严重损失，其以玉米、小麦为原料生产的饲料质量较差，也易引起饲料霉变,尤以阴暗潮湿的仓库中危害较重[4]。

由于磷化氢、马拉硫磷等药剂的长期单一使用,使玉米象等储粮害虫对这些药剂产生了严重的抗药性[5]。因此,寻找其他杀虫剂或者植物源杀虫活性物质已成为储粮害虫控制中一个新的研究热点。目前有报道印楝、黑胡椒粉、金桔油、桉叶油、除虫菊等植物提取物对玉米象及其它仓害虫的防治表现出一定的活性［6]。本文通过对2种杀虫剂和2种植物源杀虫活性物质对玉米象的不同毒力测定方法进行初步叙述，为以后仓库害虫有玉米象的防治提供理论依据。

1.玉米象的饲养

①小麦为饲料，饲料使用前置入8Ｏ℃烘箱内消毒2h后,调整含水量为１6％~18％,接入试虫约100头,置于(27±1)℃温箱里饲养,15d后将接人的成虫筛去,约３0d后玉米象成虫大量发生,挑选其中大小基本一致的成虫进行生物测定[７]。

②在(２7±１)℃,相对湿度(75±5)％条件下,以整粒小麦饲养。小麦使用前放人烘箱(６０％）中消毒２h，含水量调至（13±1)％,分装于罐头瓶中［8]。接

入成虫后，置于养虫室饲养,7ｄ后筛去成虫,待新一代成虫大量出现后约２～3周内，筛出成虫供实验用[９]。

2.杀铃脲对玉米象的胃毒毒力测定试验设计

杀铃脲（t ｒｉflumuron ）为苯甲酰脲类新型杀虫剂,属昆虫几丁质合成酶抑制剂,它通过阻碍昆虫正常脱皮变态而达到致死目的[10]。杀铃脲主要应用于防治小麦、棉花、林木等植物上的鞘翅目、双翅目、木虱科等害虫[1１]。

采用饲养混毒法,将原药用丙酮[1]分别配制成几个浓度梯度，分别与灭菌后的小麦均匀混合调湿，待丙酮完全挥发后，将混合后的小麦等量等分装于若干个三角瓶,设置一个只加入等量丙酮的小麦作对照,重复3次。每瓶接玉米象雌、雄若干头，放置于样虫室。每隔2ｄ调查一次，记录成虫中毒症状及死亡后症状。处理一定天数后调查各处理活的成虫数,计算种群抑制率。

100*对照组成虫数

处理组成虫数对照组成虫数种群抑制率-=

然后求LC5０、毒力回归方程。 3.阿维菌素对玉米象熏蒸毒力测定试验设计

阿维菌素（A ｖｅrm ｅctins)是一种大环内酯类抗生素。美国科研人员用阿维菌素对储粮害虫进行实验研究发现,它对麦蛾、印度谷螟、米象、谷蠹、锯谷盗和赤拟谷盗等有明显的防治效果[12]。但国内未见有应用阿维菌素防治储粮害虫的报道。

用托盘天平分别称取一定克数的小麦放置在２0０ｍl 广口瓶内,每瓶放入若干头玉米象。将1.8%阿维菌素EC 配制成不同剂量，喷雾于广口瓶内，并用玻璃棒搅合均匀,重复三次,并设置对照。每天检查一次，挑出死虫，记录存活数量。

数据处理:先计算出

校正死亡率=%100*1对照死亡率

对照死亡率处理死亡率--

然后求出毒力回归方程、T50、LD5０［１3]

４.印楝种子提取物对玉米象忌避活性测定试验设计

目前有报道印楝、黑胡椒粉、金桔油、桉叶油、除虫菊等植物提取物对玉米象及其它仓:害虫的防治表现出一定的活性[14]。

提取印楝种子中的活性物质，将印楝种仁低温干燥,粉碎，取lO0０ｇ粉末置于三角瓶中。加入适量石油醚Ｉ萃取,过滤取石油醚相减压蒸干得到印楝油；取印楝种仁渣，加入一定最甲醇萃取；取甲醇相减压蒸发至１5mL,加入等体积的饱和食盐水,加入乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相于旋转蒸发仪减压蒸干得到印楝乙酸乙酯粗提物［1５]。取印楝乙酸乙酯粗提物经硅胶柱层析和薄层层析分离得到印楝素Ａ相对纯品,经HPLC 测定印楝素A ，采用静态方法萃取超临界CO 。

采用培养皿滤纸涂药法测定印楝素A 和印楝油、印楝乙酸乙酯粗提物和印楝超临界CO 提取物4种提取物对玉米象的忌避活性[１6-18]。将印楝种子4种提取物按照不同剂量设置几个浓度梯度并与丙酮溶液配制,将直径为9cm 的圆形滤纸对折分成两半,吸取１m Ｌ丙酮溶剂浸透一半滤纸，另一半浸入ｌmL 丙酮稀释的不同浓度活性物质中。晾干后，用透明胶带将两半滤纸粘好放入直径为9ｃm 的培养皿中,每个玻璃皿中挑入2０头虫龄及大小一致的

玉米象成虫，用黑色布罩起使虫分散，每个处理重复３次,至于暗处在室温下饲养,分别于不同时间观察，并用以下公式计算忌避率。

忌避率=%100*对照边虫数

处理组虫数对照组虫数 5. 水菖蒲粗提物对玉米象触杀活性的试验设计

水菖蒲(Aco ｒuscala ｍus Ｌ)属天南星科植物，主产于湖南、湖北、辽宁等地［19]。目前国内对该植物用于防治储粮害虫报道较少。Y ａoE [２0］等研究表明，水菖蒲乙醇提取物对玉米象具有较强的驱避和触杀活性，并分离鉴定出主要杀虫活性成分之一(Z ）一as ａron ｅ。

水菖蒲粗提物提取，用将水菖蒲根茎干粉20０g 放人超临界萃取仪的萃取釜中,以液态CO ２为溶剂进行提取，萃取压力、萃取温度以及萃取时间分别为35Ｍ