开题报告(牛耳大黄醇提物)

四川农业大学本科毕业论文（设计）开题报告

毕业论文（设计）题目牛耳大黄醇提物的止咳祛痰抗炎作用的研究

选题类型应用基础型课题来源自选项目

学院动物医学院专业药学

指导教师叶刚职称讲师

姓名叶江年级2009级学号20091839

1立题依据：

牛耳大黄（Rumex acetosa Linn．），始见于《草木便方》，又名土大黄（《民间常用草药汇编》），四季菜根（《四川中药志》），火风棠（《重庆草药》），羊蹄根（《吉林中草药》），属蓼科（Polygonaceae）植物皱叶酸模Rumex crispus L．的根。原植物名羊蹄草（《天宝本草》），生于沟边湿地、河岸及水甸子旁，4～5月采，分布广西、台湾、福建、四川、青海、甘肃、陕西、山西、山东、河北、辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古等地。根肥厚，黄色，有酸味。饮片呈不规则的片状，直径约0.53cm，周边有纵皱纹，切面淡黄色或灰黄色，具有菊花心，质坚硬。含大黄素（Emodin）、大黄根酸（Chrysophanic acid）、大黄酚苷（Chrysophanein）、1，8-二羟基-3-甲基-9-蒽酮（1，8-Dihydroxy-3-methyl-9-anthrone）。从根中分离出的大黄酸、大黄素及大黄酚在试管内对甲型链球菌、肺炎球菌、流感杆菌及卡他球菌有不同程度的抑制作用。根酊剂在沙伯氏培养基上对犬小孢子菌有显著抑菌作用，最低有效浓度为1.56％～3.12％。性味苦寒，入心、肝、大肠经，具有清热凉血，化痰止咳，通便杀虫之功效。主要治疗急性肝炎，慢性气管炎，吐血，血崩，血小板减少性紫癜，大便燥结，痢疾，秃疮，疔疖。内服：15—30g。外用：捣敷、磨汁涂或煎水洗。[1-2]

现代医学认为咳嗽是人体的一种保护性呼吸反射动作。当呼吸道粘膜受到异物、炎症、分泌物或过敏性因素等刺激时，即反射性地引起咳嗽。而中医认为肺为娇脏，其性清宣肃降，上连咽喉，开窍于鼻，外合皮毛，司呼吸，主一身之气，其气以肃降为顺。肺失宣发或肺失肃降，皆可导致肺气上逆而致咳嗽[3]。目前，在临床上多以可待因、喷托维林为止咳的主要用药，其多为中枢性镇咳药，大多有胃肠道不良反应，如腹胀、恶心、呕吐、食欲不振、便秘等，且可待因服用过多还能造成成瘾性[4]。

现代医学认为痰饮是人体某些疾病在发生和发展过程中产生的病理产物，因病而产生痰饮或痰饮致其他脏腑发生病理变化，均直接影响各器官组织的生理功能[5]。而中医认为痰是机体水液代谢障碍所形成的病理产物，随气升降、到处流行，内而脏腑，外而皮肉筋骨，周身上下无处不到，致病广泛。故有“百病皆有痰作祟”、“怪病多痰”、“痰饮变生诸证”[6]的说法。张仲景在《金匮要略》则有痰饮专篇论述痰饮病，书中云：“其人素盛今瘦。水走肠间，沥沥有

声，谓之痰饮”，可以看作是痰饮病名的最早记载。痰、饮、水同出一源．匀为人体水渣代谢之局部障碍病理产物。因此，中医常有“顽痰怪证”之说。根据痰所停留的部位及影口向的脏腑不同，可导致各种病证。现代医学上，常使用盐酸溴己新、氯化铵等祛痰药。氯化铵是刺激性祛痰药的代表，吞服片剂或剂量过大可引起恶心、呕吐、胃痛等胃刺激症状，长期服用易导致高氯酸血症、代谢性酸血症。而使用盐酸溴己新可能损害胃黏膜屏障，也可激活肠道黏膜溃疡，还会有恶心、胃部不适，偶见血清转氨酶升高等不良反应[7]。

炎症是机体活组织对各种损伤因子所发生的以防御为主的反应。目前,临床上多以糖皮质激素抗炎为主要用药[8]，虽然有较好的疗效，但并不能从根本上阻止疾病的发生和进展，并且长期大剂量使用糖皮质激素几乎不可避免地会引起高血压、低血钾、消化性溃疡出血、穿孔、创口愈合不良、诱发或加重感染、精神兴奋、内分泌功能紊乱等，诸多副作用和并发症，严重的副作用和并发症可导致机体死亡[9-10]。

由于目前在止咳祛痰抗炎的治疗中所用到的化学药品，都伴随着诸多的并发症和副作用，而中药有副作用少、来源广泛等特点。迄今为止，中医中药已在动物病症的医疗上积累了大量的临床用药经验，对于诸多病症方面都有着独到之处和独特优势，故此中医中药的应用受到更多的重视与关注。牛耳大黄虽然在兽医临床上使用广泛，但是关于其止咳祛痰抗炎作用却未见报道。本次试验通过研究牛耳大黄醇提物止咳祛痰抗炎作用，以期为牛耳大黄的临床应用和进一步的开发研究提供一定的理论依据。

2研究的主要内容及预期目标

2.1研究主要内容

通过采用浓氨水引咳法，气管酚红排泌法，二甲苯致耳肿胀法，以咳嗽潜伏期、咳嗽次数、酚红排泌量、耳肿胀度为指标来研究牛耳大黄醇提物的止咳祛痰抗炎作用。

2.2预期目标

牛耳大黄醇提物具有一定的止咳祛痰抗炎作用。

3研究方案

3.1实验材料

3.1.1药材

牛耳大黄

3.1.2实验动物

健康昆明种小白鼠75只，体重18～22g。实验期间自由饮水，普通饲料喂养。

3.1.3试剂

无水乙醇，氨水，苯酚红，碳酸氢钠，氢氧化钠，生理盐水。

3.1.4药品

枸橼酸喷托维林片，盐酸溴己新片，醋酸泼尼松。

3.1.5仪器

分光光度计，循环水式多用真空泵，旋转蒸发仪，电子天平，500ml烧杯1个，试管若干，同规格棉球数个，注射器1个，容量瓶（1000ml）一个，容量瓶（10ml）8个，移液管（2.5ml）1支，移液枪一只，打孔器（9mm），超声波提取器，眼科剪，灌胃器。

3.1.6牛耳大黄醇提物的制备

称取牛耳大黄适量，经80％乙醇常温浸没24h，在30℃超声波提取器中提取30min，共提取3次，过滤，合并滤液。用旋转蒸发仪回收乙醇，剩余溶液浓缩后烘干，得牛耳大黄醇提物粉末，4℃冰箱保存备用。根据试验需要，分别用生理盐水将粉末制备成生药浓度为0.5g/ml、1g/ml、2g/ml的悬浮液。[11-12]

3.2小鼠氨水引咳实验

取健康昆明种小白鼠25只，体重20±1.5g，随机分为5组，每组5只。分别为空白对照组，牛耳大黄醇提物高、中、低剂量组，以及阳性对照组。给药途径均采用灌胃方式，空白对照组灌喂蒸馏水0.2ml/10g；牛耳大黄醇提物高剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中生药浓度为2g/ml；牛耳大黄醇提物中剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度1g/ml；牛耳大黄醇提物低剂量组灌喂药液0.2ml/10g，其中含生药浓度0.5g/ml；阳性对照组灌胃咳必清0.5g/kg。每日灌胃给药2次，连续3d。于末次给药40min后，将小鼠置于500ml烧杯中，另在一直径小于烧杯的表面皿内放入一等体积大小的棉球，上面加盖筛网，向棉球中注入0.2ml浓氨水，迅速将烧杯倒置，让氨水刺激小鼠引发咳嗽。观察小鼠的典型咳嗽动作（腹肌收缩，同时张大嘴，有时可能有咳嗽声）者为有咳嗽，否则为无咳嗽，观察指标为开始咳嗽时间（咳嗽潜伏期）、2分钟内咳嗽次数及咳嗽抑制率公式：咳嗽抑制率=[（空白组咳嗽次数—受试组咳嗽次数）/空白组咳嗽次数]×100%。（注意：试验中需保证浓氨水浓度，否则会影响小鼠的引咳效果，所以在更换小鼠组别时，需将棉球更换，换用新制氨水，且每次保持相同的氨水水量，在试验中要尽量保持相同的条件。）[13-15]

表1牛耳大黄醇提物对小鼠的止咳作用(-x±s,n=5)

组别（剂量）咳嗽潜伏期2min内咳嗽次数

空白组蒸馏水

牛耳大黄醇提物高剂量组

牛耳大黄醇提物高剂量组

牛耳大黄醇提物高剂量组

咳必清阳性对照组

（如果P<0.01，则表示有明显的疗效，如果P<0.05，则表示有疗效，P>0.05，则表示疗效不明显或没有疗效。）