HIV感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌溶血性的比较
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关 键 词 HIV； 溶 血 性 ； 白 色 念 珠 菌 ； 光 滑 念 珠 菌 ； CD4 细 胞
Comparison of the hemolytic activity between Candida albicans and Candida glabrata isolates in oral cavity of HIV-infected patients LUO Gang * ， XU Ping-ping， DONG Jun-ying． * Guangdong Provincial Stomatological Hospital， Southern Medical University， Guangzhou 510280， China Corresponding author： XU Ping-ping E-mail： pingp3xu＠21cn．com
1．1．4 菌 种 复 苏 将 －70℃ 保 存 的 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 临 床 分 离 株 各 40 株 放 入 37℃ 的 水 浴 箱 中 ，2 min 左 右 完 全 溶 解 后 接 种 到 沙 保 琼 脂 培 养 基上生长，37℃，培养 18 ～ 24 h。 1．2 方法 1．2．1 菌悬液制备 用 10 μL 接种环挑取 SDA 上 的念珠菌菌落，用无菌水制备成菌悬液，用细胞计 数板计数并调整浓度至 1 × 108 个 ／ mL。 1．2．2 溶 血 性 测 定 将 10 μL 菌 悬 液 滴 于 羊 血 培 养基上，37℃、5％ CO2 培养 48 h。 溶血性阳性的菌 株，在透射光下观察菌落周围，可观察到半透明的 与菌落同圆心的溶血环， 测定菌落直径和总直径 （菌落 ＋ 溶血环）并计算溶血指数：溶血指பைடு நூலகம் ＝ 菌 落直径 ／ 总直径。 1．2．3 统计学分析 检测结果采用 SPSS13．0 软件 包进行统计学处理，对溶血性采用析因方差分析， 检验水准 α ＝ 0．05。 2 结果
实 用 医 学 杂 志 2011 年 第 27 卷 第 16 期
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5．6 ± 0．2， 广 州 迪 景 微 生 物 科 技 公 司 ）， 比 浊 仪 （Vitekcorimeter Model DR100；bioMerieux， France）， 恒 温 水 浴 箱 （OLS200 Grant； Grant instruments Ltd． England）， 细 胞 计 数 板 （ 上 海 求 精 生 化 试 剂 仪 器 厂 ）， 振 荡 器 （G-560E；Scientific industries， USA）， 清 洁 超 净 工 作 台 （SW-CJ-IFD 型 ，苏 州 安 泰 空 气 技 术有限公司） 1．1．3 分 组 从 冻 存 的 菌 株 中 挑 选 白 色 念 珠 菌 40 株 。 单 一 白 色 念 珠 菌 感 染 的 20 株 为 单 一 感 染 组 ， 其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细 胞 计 数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ； 与 光 滑 念 珠 菌 混 合 感 染 的 20 株 为 混 合 感 染 组 ，其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细胞计数 ＜ 200 个 ／ mm3 的菌株 10 株。 从冻存的菌 株中挑选光滑念珠菌 40 株。 单一光滑念珠菌感染 的 20 株为单一感染组， 其中 CD4 细胞计数 ＞ 200 个 ／ mm3 的菌株 10 株，CD4 细胞计数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ； 与 白 色 念 珠 菌 混 合 感 染 的 20 株 为 混 合 感 染 组 ，其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细 胞 计 数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 。
白色念珠菌和光滑念珠菌的溶血性比较结果
见表 1 ～ 4。 40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 溶 血 性
表 1 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 株 菌 和 光 滑 念 株 菌 的 溶 血 性 比 较 （感 染 类 型 ＝ 单 一 感 染 时 ）（n ＝ 40）
菌种
菌种
CD4 高
白念
0．375 3 ± 0．055 7
光滑
0．328 5 ± 0．019 1
合计
0．351 9 ± 0．047 1
F／t 值
2．512
P值
0．029
注：*主效应； ＃ 交互效应
低 0．433 6 ± 0．122 7 0．327 2 ± 0．032 0 0．380 4 ± 0．102 9
2．652 0．024
合计
0．404 4 ± 0．097 5 0．327 9 ± 0．025 7 0．366 2 ± 0．080 3
11．994* 0．001*
F／t 值
1．368 0．110 1．661* 1．816＃
x±s
P值
0．188 0．913 0．206* 0．186＃
均为阳性（图 1、2）。 为单一感染时，光滑念珠菌的 溶 血 性 高 于 白 色 念 珠 菌 （F ＝ 11．921，P ＝ 0．001） （表 1）；为混合感染时，光滑念珠菌的溶血性高于 白 色 念 珠 菌 （F ＝ 11．994，P ＝ 0．001） （ 表 2）；CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 时 ，光 滑 念 珠 菌 的 溶 血 性 高于白色念珠菌 （F ＝ 8．520，P ＝ 0．006）（表 1－3）；
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实 用 医 学 杂 志 2011 年 第 27 卷 第 16 期
·检 验 与 临 床·
HIV感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌 溶血性的比较
罗刚 徐平平 董俊英
摘 要 目 的 ： 探 讨 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 分 离 株 的 溶 血 性 ， 及 其 与 宿 主 机 体 免 疫 力 （用 CD4 细 胞 计 数 表 示 ）的 关 系 。 方 法 ：40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 按 单 一 感 染 或 是 否 与 光 滑 （ 白 色 ） 念 珠 菌 混 合 感 染 及 CD4 细 胞 计 数 的 高 低 进 行 分 组 ， 采 用 羊 血 培 养 基 法 检 测 其 溶 血 活 性 ， 并 进 行 组 间 比 较 。 结 果 ：40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 溶 血 活 性 均 为 阳 性 （100％）， 且 光 滑 念 珠 菌 的 溶 血 性 高 于 白 色 念 珠 菌 。 结 论 ： 溶 血 性 是 念 珠 菌 的 重 要 毒 力 因 子 ，HIV 感 染 者 口 腔 光 滑 念 珠 菌 溶 血 性 高 于 白 色 念珠菌。
【Key words】 HIV； Hemolytic activity； Candida albican； Candida glabrata； CD4 cell
口 腔 念 珠 菌 病 是 HIV 感 染 者 的 常 见 并 发 症 ， 多数学者认为口腔念珠菌病的出现是免疫抑制的 先 兆 ， 预 示 疾 病 即 将 从 HIV 感 染 进 入 到 AIDS 阶 段 ，是 早 期 发 现 和 诊 断 AIDS 的 重 要 线 索 ［1］。 白 色 念珠菌是最常见的分离株 。 ［2－3］ 然而，由于免疫抑制 治疗药物和广谱抗真菌剂的普遍应用， 光滑念珠 菌引起的黏膜和系统性感染的发生率明显增多， 已成为继白色念珠菌之后， 首位最常见的导致念 珠 菌 病 的 菌 种 ［4－5］。
白念 光滑 合计 F／t 值 P值
CD4
高 0．412 9 ± 0．088 0 0．334 9 ± 0．084 0 0．373 9 ± 0．092 8
2．027 0．058
低 0．388 4 ± 0．047 0 0．323 3 ± 0．013 3 0．355 8 ± 0．047 4
4．220 0．002
杂，除宿主免疫因素外，念珠菌本身的毒力变化也 可能参与致病过程。 与念珠菌相关的毒力因素主 要有黏附性、侵袭性的酶、溶血性、形态发生和表 型 转 换 等 ［6］。 本 文 从 是 否 混 合 感 染 和 CD4 细 胞 计 数这两个因素出发， 选取 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 各 40 株 ， 研 究 并 比 较 其 溶 血 性，来探讨其溶血毒力的变化规律。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 菌株 从广州市第八人民医院已确诊的 82 例 HIV 感 染 者 的 唾 液 中 分 离 ， 沙 保 培 养 基 （SDA） 培养而得，并经念珠菌 CHROMagar 鉴定、45℃生长 试验、 玉米吐温 80 培 养 基 培 养 和 念 珠 菌 API 20C AUX 鉴定。 用无菌水－70℃冻存。 1．1．2 试 剂 与 仪 器 沙 保 琼 脂 培 养 基 （Sabourd， sdextrose agar， SDA， 广 州 迪 景 微 生 物 科 技 公 司 ）， 血培养基 （羊血培养基是 7 mL 新鲜羊血加到 100 ml 含 3％葡萄糖的沙保葡萄糖培养基中。 pH 值为
合计
0．400 6 ± 0．070 0 0．329 1 ± 0．058 8 0．364 9 ± 0．073 3
11．921* 0．001*
F／t 值
0．775 0．433 0．758* 0．095＃
注：*主效应； ＃ 交互效应
x±s
P值
0．448 0．675 0．390* 0．759＃
表 2 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 株 菌 和 光 滑 念 株 菌 的 溶 血 性 比 较 （感 染 类 型 ＝ 混 合 感 染 时 ）（n ＝ 40）
HIV 感 染 者 易 感 染 口 腔 念 珠 菌 病 的 机 制 较 复
doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725.2011.16.068 基金项目： 广东省医学科学技术研究基金资助项目 （编号： B2007025 ，A2008109 ） 作 者 单 位 ：510280 广 州 市 ， 广 东 省 口 腔 医 院 ，南 方 医 科 大 学 附 属 口 腔 医 院 （ 罗 刚 ， 徐 平 平 ）； 518001 广 东 省 深 圳 牙 科 医 疗 中 心（董俊英） 通 信 作 者 ：徐 平 平 E-mail：pingp3xu＠21cn．com
【Abstract】 Objective To investigate the hemolytic activity of Candida albican and Candida glabrata isolates in oral cavity of HIV-infected patients， and its relationship with the immunity of the patients． Methods Forty Candida albican and 40 Candida glabrata isolates were grouped by infection types and CD4 cell count． The hemolytic activity was measured by sugar-enriched sheep blood agar medium． Results The hemolytic activity of Candida glabrate was significantly higher than that of Candida albicans （P ＜ 0．01）． Conclusion Hemolytic activity is an important virulence factor of Candida． The hemolytic activity of Candida glabrata was higher than that of Candida albicans in oral cavity of HIV-infected patients．
Comparison of the hemolytic activity between Candida albicans and Candida glabrata isolates in oral cavity of HIV-infected patients LUO Gang * ， XU Ping-ping， DONG Jun-ying． * Guangdong Provincial Stomatological Hospital， Southern Medical University， Guangzhou 510280， China Corresponding author： XU Ping-ping E-mail： pingp3xu＠21cn．com
1．1．4 菌 种 复 苏 将 －70℃ 保 存 的 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 临 床 分 离 株 各 40 株 放 入 37℃ 的 水 浴 箱 中 ，2 min 左 右 完 全 溶 解 后 接 种 到 沙 保 琼 脂 培 养 基上生长，37℃，培养 18 ～ 24 h。 1．2 方法 1．2．1 菌悬液制备 用 10 μL 接种环挑取 SDA 上 的念珠菌菌落，用无菌水制备成菌悬液，用细胞计 数板计数并调整浓度至 1 × 108 个 ／ mL。 1．2．2 溶 血 性 测 定 将 10 μL 菌 悬 液 滴 于 羊 血 培 养基上，37℃、5％ CO2 培养 48 h。 溶血性阳性的菌 株，在透射光下观察菌落周围，可观察到半透明的 与菌落同圆心的溶血环， 测定菌落直径和总直径 （菌落 ＋ 溶血环）并计算溶血指数：溶血指பைடு நூலகம் ＝ 菌 落直径 ／ 总直径。 1．2．3 统计学分析 检测结果采用 SPSS13．0 软件 包进行统计学处理，对溶血性采用析因方差分析， 检验水准 α ＝ 0．05。 2 结果
实 用 医 学 杂 志 2011 年 第 27 卷 第 16 期
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5．6 ± 0．2， 广 州 迪 景 微 生 物 科 技 公 司 ）， 比 浊 仪 （Vitekcorimeter Model DR100；bioMerieux， France）， 恒 温 水 浴 箱 （OLS200 Grant； Grant instruments Ltd． England）， 细 胞 计 数 板 （ 上 海 求 精 生 化 试 剂 仪 器 厂 ）， 振 荡 器 （G-560E；Scientific industries， USA）， 清 洁 超 净 工 作 台 （SW-CJ-IFD 型 ，苏 州 安 泰 空 气 技 术有限公司） 1．1．3 分 组 从 冻 存 的 菌 株 中 挑 选 白 色 念 珠 菌 40 株 。 单 一 白 色 念 珠 菌 感 染 的 20 株 为 单 一 感 染 组 ， 其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细 胞 计 数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ； 与 光 滑 念 珠 菌 混 合 感 染 的 20 株 为 混 合 感 染 组 ，其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细胞计数 ＜ 200 个 ／ mm3 的菌株 10 株。 从冻存的菌 株中挑选光滑念珠菌 40 株。 单一光滑念珠菌感染 的 20 株为单一感染组， 其中 CD4 细胞计数 ＞ 200 个 ／ mm3 的菌株 10 株，CD4 细胞计数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ； 与 白 色 念 珠 菌 混 合 感 染 的 20 株 为 混 合 感 染 组 ，其 中 CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 ，CD4 细 胞 计 数 ＜ 200 个 ／ mm3 的 菌 株 10 株 。
白色念珠菌和光滑念珠菌的溶血性比较结果
见表 1 ～ 4。 40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 溶 血 性
表 1 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 株 菌 和 光 滑 念 株 菌 的 溶 血 性 比 较 （感 染 类 型 ＝ 单 一 感 染 时 ）（n ＝ 40）
菌种
菌种
CD4 高
白念
0．375 3 ± 0．055 7
光滑
0．328 5 ± 0．019 1
合计
0．351 9 ± 0．047 1
F／t 值
2．512
P值
0．029
注：*主效应； ＃ 交互效应
低 0．433 6 ± 0．122 7 0．327 2 ± 0．032 0 0．380 4 ± 0．102 9
2．652 0．024
合计
0．404 4 ± 0．097 5 0．327 9 ± 0．025 7 0．366 2 ± 0．080 3
11．994* 0．001*
F／t 值
1．368 0．110 1．661* 1．816＃
x±s
P值
0．188 0．913 0．206* 0．186＃
均为阳性（图 1、2）。 为单一感染时，光滑念珠菌的 溶 血 性 高 于 白 色 念 珠 菌 （F ＝ 11．921，P ＝ 0．001） （表 1）；为混合感染时，光滑念珠菌的溶血性高于 白 色 念 珠 菌 （F ＝ 11．994，P ＝ 0．001） （ 表 2）；CD4 细 胞 计 数 ＞ 200 个 ／ mm3 时 ，光 滑 念 珠 菌 的 溶 血 性 高于白色念珠菌 （F ＝ 8．520，P ＝ 0．006）（表 1－3）；
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实 用 医 学 杂 志 2011 年 第 27 卷 第 16 期
·检 验 与 临 床·
HIV感染者口腔白色念珠菌和光滑念珠菌 溶血性的比较
罗刚 徐平平 董俊英
摘 要 目 的 ： 探 讨 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 分 离 株 的 溶 血 性 ， 及 其 与 宿 主 机 体 免 疫 力 （用 CD4 细 胞 计 数 表 示 ）的 关 系 。 方 法 ：40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 按 单 一 感 染 或 是 否 与 光 滑 （ 白 色 ） 念 珠 菌 混 合 感 染 及 CD4 细 胞 计 数 的 高 低 进 行 分 组 ， 采 用 羊 血 培 养 基 法 检 测 其 溶 血 活 性 ， 并 进 行 组 间 比 较 。 结 果 ：40 株 白 色 念 珠 菌 和 40 株 光 滑 念 珠 菌 溶 血 活 性 均 为 阳 性 （100％）， 且 光 滑 念 珠 菌 的 溶 血 性 高 于 白 色 念 珠 菌 。 结 论 ： 溶 血 性 是 念 珠 菌 的 重 要 毒 力 因 子 ，HIV 感 染 者 口 腔 光 滑 念 珠 菌 溶 血 性 高 于 白 色 念珠菌。
【Key words】 HIV； Hemolytic activity； Candida albican； Candida glabrata； CD4 cell
口 腔 念 珠 菌 病 是 HIV 感 染 者 的 常 见 并 发 症 ， 多数学者认为口腔念珠菌病的出现是免疫抑制的 先 兆 ， 预 示 疾 病 即 将 从 HIV 感 染 进 入 到 AIDS 阶 段 ，是 早 期 发 现 和 诊 断 AIDS 的 重 要 线 索 ［1］。 白 色 念珠菌是最常见的分离株 。 ［2－3］ 然而，由于免疫抑制 治疗药物和广谱抗真菌剂的普遍应用， 光滑念珠 菌引起的黏膜和系统性感染的发生率明显增多， 已成为继白色念珠菌之后， 首位最常见的导致念 珠 菌 病 的 菌 种 ［4－5］。
白念 光滑 合计 F／t 值 P值
CD4
高 0．412 9 ± 0．088 0 0．334 9 ± 0．084 0 0．373 9 ± 0．092 8
2．027 0．058
低 0．388 4 ± 0．047 0 0．323 3 ± 0．013 3 0．355 8 ± 0．047 4
4．220 0．002
杂，除宿主免疫因素外，念珠菌本身的毒力变化也 可能参与致病过程。 与念珠菌相关的毒力因素主 要有黏附性、侵袭性的酶、溶血性、形态发生和表 型 转 换 等 ［6］。 本 文 从 是 否 混 合 感 染 和 CD4 细 胞 计 数这两个因素出发， 选取 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 珠 菌 和 光 滑 念 珠 菌 各 40 株 ， 研 究 并 比 较 其 溶 血 性，来探讨其溶血毒力的变化规律。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 菌株 从广州市第八人民医院已确诊的 82 例 HIV 感 染 者 的 唾 液 中 分 离 ， 沙 保 培 养 基 （SDA） 培养而得，并经念珠菌 CHROMagar 鉴定、45℃生长 试验、 玉米吐温 80 培 养 基 培 养 和 念 珠 菌 API 20C AUX 鉴定。 用无菌水－70℃冻存。 1．1．2 试 剂 与 仪 器 沙 保 琼 脂 培 养 基 （Sabourd， sdextrose agar， SDA， 广 州 迪 景 微 生 物 科 技 公 司 ）， 血培养基 （羊血培养基是 7 mL 新鲜羊血加到 100 ml 含 3％葡萄糖的沙保葡萄糖培养基中。 pH 值为
合计
0．400 6 ± 0．070 0 0．329 1 ± 0．058 8 0．364 9 ± 0．073 3
11．921* 0．001*
F／t 值
0．775 0．433 0．758* 0．095＃
注：*主效应； ＃ 交互效应
x±s
P值
0．448 0．675 0．390* 0．759＃
表 2 HIV 感 染 者 口 腔 白 色 念 株 菌 和 光 滑 念 株 菌 的 溶 血 性 比 较 （感 染 类 型 ＝ 混 合 感 染 时 ）（n ＝ 40）
HIV 感 染 者 易 感 染 口 腔 念 珠 菌 病 的 机 制 较 复
doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725.2011.16.068 基金项目： 广东省医学科学技术研究基金资助项目 （编号： B2007025 ，A2008109 ） 作 者 单 位 ：510280 广 州 市 ， 广 东 省 口 腔 医 院 ，南 方 医 科 大 学 附 属 口 腔 医 院 （ 罗 刚 ， 徐 平 平 ）； 518001 广 东 省 深 圳 牙 科 医 疗 中 心（董俊英） 通 信 作 者 ：徐 平 平 E-mail：pingp3xu＠21cn．com
【Abstract】 Objective To investigate the hemolytic activity of Candida albican and Candida glabrata isolates in oral cavity of HIV-infected patients， and its relationship with the immunity of the patients． Methods Forty Candida albican and 40 Candida glabrata isolates were grouped by infection types and CD4 cell count． The hemolytic activity was measured by sugar-enriched sheep blood agar medium． Results The hemolytic activity of Candida glabrate was significantly higher than that of Candida albicans （P ＜ 0．01）． Conclusion Hemolytic activity is an important virulence factor of Candida． The hemolytic activity of Candida glabrata was higher than that of Candida albicans in oral cavity of HIV-infected patients．