紫杉醇的发现及发展.pptx
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从总体上看, 对天然药物紫 杉醇的化学全 合成方法路径 太长、合成步 骤太多,不仅 需要使用昂贵 的化学试剂, 而且反应条件 极难控制,收 率也偏低(最 高产率不超过 2%),因此 不适合工业化 生产。
21
生物合成
❖ 目前生物合成方法有组织和细胞培养、生物转化、 微生物和基因工程等方面。
❖ 组织培养技术初始于20世纪80年代,且其在红豆 杉产业中应用最为广泛,以它为例作简单介绍。
23
❖ 细胞悬浮培养:培养基为含1ppm的2,4-D、0.05ppm 的KT及10%椰乳的B-5培养基
❖ 红豆杉细胞大量培养:培养基与悬浮细胞培养基相 同。在反应器中加入培养液,灭菌后冷却至室温, 接种已经培养30天的悬浮培养细胞,接种量按干细 胞1到2克每升,在25摄氏度下,培养30天,待收获 细胞。
紫杉醇药物的发现及发展
1
主要内容
❖紫杉醇简介 ❖紫杉醇应用现状及前景 ❖紫杉醇的发现历程 ❖几种获取紫杉醇的途径 ❖紫杉醇的应用研究 ❖紫杉醇药物的发展趋势
2
紫杉醇简介
3D model and chemical structure of Taxol (Paclitaxel)
3
紫杉醇简介
❖ 紫杉醇(Paclitaxel,Taxol,太平洋紫杉醇)是 细胞有丝分裂抑制剂,被用于癌症治疗(主要是 卵巢癌和乳ຫໍສະໝຸດ Baidu癌)。
❖结合位点:β-微管 蛋白亚基(N-端第31 位氨基酸和217-231位 氨基酸结合位点)
❖主要作用:导致细胞 周期停滞;诱导细胞 凋亡;LPS活性
5
紫杉醇应用现状及前景
❖ 治疗卵巢癌、乳腺癌的首选药物,对白血病、肺 癌、脑癌、直肠癌等疗效也显著,并且毒性试验 表明它的毒副作用很小,是目前最好的天然抗癌 药物之一。
协会关于紫杉醇合作开发的授权。 ❖ 1992年7月,新药申请文件提交,同年12月获得了
FDA批准,把紫杉醇推上市场,商品名泰素Taxol
10
几种获取紫杉醇的途径
❖ 目前关于紫杉醇的获得方法主要是提取与合成 ❖ 合成包括:化学合成(半合成和全合成),生物
合成 ❖ 提取:在目前发现的所有含紫杉醇的红豆杉属植
国际紫杉醇原料药需求走势图(单位:6公斤)
紫杉醇的发现历程
❖1960年,Dr. Jonathan L. Hartwell, NCI.开启 了从植物中筛选抗肿瘤活性成分项目;
❖ 从样品中发现了一些具有9KB细胞毒性; ❖RTI(Research Triangle Institute)研究T.
brevifolia ❖ 1966年6月,纯组分的分离以及一些物理常数
1
愈伤组织培养
2
愈伤组织的继代培养
3
悬浮细胞培养
4
细胞大量培养
22
❖ 红豆杉外植体的处理:用自来水充分洗净,再用 70%乙醇冲洗表面后切成小块,在70%乙醇中浸泡2 分钟,再转移至0.1%升汞溶液中浸泡20分钟,然后 用无菌水冲洗4到5次,备用。
❖ 愈伤组织诱导及培养:将上述无菌红豆杉嫩茎小块 组织接种于含2ppm的2,4-D、0.5ppm的KT及10%椰 乳的MS培养基中,于25摄氏度的二氧化碳培养箱中 培养40天,PH5.8,即可形成小的愈伤组织块,然后 每隔30天进行一次移植继代培养。每次移植继代培 养均取一块愈伤组织,不另其混杂,如此多次移植 继代培养即可获得多个愈伤组织无性系。
12
化学半合成
首次报道的是Denis等提出的半合成路线:
13
全合成策略:
1:线性战略,由A环到ABC环或由C环到ABC环 2:会聚战略:由A环和C环会聚合成ABC环。
14
全合成策略:
所有的合成路线都是通过若干步反应后得到含有紫杉醇的
母核结构的化合物即Baccatin III, 最后再与 Ojima内酰
最终产率约为0.01%
17
化学全合成:
3)Danishefsky全合成路线(1996):
18
19
已知最短全合成路
整个路线37步,是
线。
4.Wender全合成路线--1997:
化学全合成:
20
5. Kuwajima全合成路线--1998:
化学全合成:
化学全合成:6)Mukaiyama全合成路线(1998):
胺(β-lactam ,3 )进行偶联反应加上侧链,最终得到 目标产物紫杉醇。
15
此路线经历37步,产率为0.1%
化学全合成:
全世界范围内约有四十多个一流团队从事紫杉醇的全合成研究工 作,其中有六个团队成功完成并发表了他们的研究成果:
1)Holton全合成路线(1994):
16
化学全合成:
2)Nicolaou全合成路线(1994):
7
分离过程
8
快速发展
发展大事记:发现 之后的快速发展
9
❖ 在1982年至1994年间,紫杉醇的化学合成以及临 床研究获得快速进展。
❖ 1982-1984年进行动物毒性试验。 ❖ 1983-1986年,进行了临床Ⅰ和Ⅱ期试验。随后,
紫杉醇被用于多种实体瘤如乳腺癌、肺癌的研究。 ❖ 1991年,美国百时美施贵宝公司获得了美国癌症
❖ 来源:红豆杉科植物红豆杉的干燥根、枝叶以及 树皮。
❖ 抗癌机制:有丝分裂中的微管抑制剂,具有聚合 和稳定细胞内微管的作用,致使快速分裂的肿瘤 细胞在有丝分裂阶段被牢牢固定,使微管不再分 开,可阻断细胞于细胞周期之G2与M期,使癌细胞 复制受阻断而死亡 。
4
简要机理
❖作用机理:阻滞肿瘤 细胞有丝分裂
❖ 红豆杉生长十分缓慢,上百年才能成材,而我国 20世纪90年代曾大肆砍伐,使野生红豆杉几乎遭 受灭顶之灾,其树皮价格当时也仅仅5元每公斤!
❖ 所以,对于提取紫杉醇作为来源而言,对于生态 的破坏非常严重,另外,红豆杉作为一种再生时 间比较长的植物,其总量是非常有限的,所以采 用其他方式进行替代是非常重要的,现在主要的 替代方法是利用红豆杉的枝叶等可再生的资源, 进行提取紫杉醇前体,进行半合成;还有就是利 用细菌真菌等进行生物合成的方法。
物中以欧洲短叶红豆中紫杉醇含量最高(0.069 %),而最低含量只有 0. 003%,约从 38000 棵紫杉树中方可分离提纯得到 99%纯度的紫杉醇 约 25kg,对于成树其紫杉醇含量为:树皮>树叶 >树根>树干>种子>心材。即使以树皮为原料提 取的话,每提取一公斤紫杉醇就需要活剥10吨树 皮!
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生物合成
❖ 目前生物合成方法有组织和细胞培养、生物转化、 微生物和基因工程等方面。
❖ 组织培养技术初始于20世纪80年代,且其在红豆 杉产业中应用最为广泛,以它为例作简单介绍。
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❖ 细胞悬浮培养:培养基为含1ppm的2,4-D、0.05ppm 的KT及10%椰乳的B-5培养基
❖ 红豆杉细胞大量培养:培养基与悬浮细胞培养基相 同。在反应器中加入培养液,灭菌后冷却至室温, 接种已经培养30天的悬浮培养细胞,接种量按干细 胞1到2克每升,在25摄氏度下,培养30天,待收获 细胞。
紫杉醇药物的发现及发展
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主要内容
❖紫杉醇简介 ❖紫杉醇应用现状及前景 ❖紫杉醇的发现历程 ❖几种获取紫杉醇的途径 ❖紫杉醇的应用研究 ❖紫杉醇药物的发展趋势
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紫杉醇简介
3D model and chemical structure of Taxol (Paclitaxel)
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紫杉醇简介
❖ 紫杉醇(Paclitaxel,Taxol,太平洋紫杉醇)是 细胞有丝分裂抑制剂,被用于癌症治疗(主要是 卵巢癌和乳ຫໍສະໝຸດ Baidu癌)。
❖结合位点:β-微管 蛋白亚基(N-端第31 位氨基酸和217-231位 氨基酸结合位点)
❖主要作用:导致细胞 周期停滞;诱导细胞 凋亡;LPS活性
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紫杉醇应用现状及前景
❖ 治疗卵巢癌、乳腺癌的首选药物,对白血病、肺 癌、脑癌、直肠癌等疗效也显著,并且毒性试验 表明它的毒副作用很小,是目前最好的天然抗癌 药物之一。
协会关于紫杉醇合作开发的授权。 ❖ 1992年7月,新药申请文件提交,同年12月获得了
FDA批准,把紫杉醇推上市场,商品名泰素Taxol
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几种获取紫杉醇的途径
❖ 目前关于紫杉醇的获得方法主要是提取与合成 ❖ 合成包括:化学合成(半合成和全合成),生物
合成 ❖ 提取:在目前发现的所有含紫杉醇的红豆杉属植
国际紫杉醇原料药需求走势图(单位:6公斤)
紫杉醇的发现历程
❖1960年,Dr. Jonathan L. Hartwell, NCI.开启 了从植物中筛选抗肿瘤活性成分项目;
❖ 从样品中发现了一些具有9KB细胞毒性; ❖RTI(Research Triangle Institute)研究T.
brevifolia ❖ 1966年6月,纯组分的分离以及一些物理常数
1
愈伤组织培养
2
愈伤组织的继代培养
3
悬浮细胞培养
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细胞大量培养
22
❖ 红豆杉外植体的处理:用自来水充分洗净,再用 70%乙醇冲洗表面后切成小块,在70%乙醇中浸泡2 分钟,再转移至0.1%升汞溶液中浸泡20分钟,然后 用无菌水冲洗4到5次,备用。
❖ 愈伤组织诱导及培养:将上述无菌红豆杉嫩茎小块 组织接种于含2ppm的2,4-D、0.5ppm的KT及10%椰 乳的MS培养基中,于25摄氏度的二氧化碳培养箱中 培养40天,PH5.8,即可形成小的愈伤组织块,然后 每隔30天进行一次移植继代培养。每次移植继代培 养均取一块愈伤组织,不另其混杂,如此多次移植 继代培养即可获得多个愈伤组织无性系。
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化学半合成
首次报道的是Denis等提出的半合成路线:
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全合成策略:
1:线性战略,由A环到ABC环或由C环到ABC环 2:会聚战略:由A环和C环会聚合成ABC环。
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全合成策略:
所有的合成路线都是通过若干步反应后得到含有紫杉醇的
母核结构的化合物即Baccatin III, 最后再与 Ojima内酰
最终产率约为0.01%
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化学全合成:
3)Danishefsky全合成路线(1996):
18
19
已知最短全合成路
整个路线37步,是
线。
4.Wender全合成路线--1997:
化学全合成:
20
5. Kuwajima全合成路线--1998:
化学全合成:
化学全合成:6)Mukaiyama全合成路线(1998):
胺(β-lactam ,3 )进行偶联反应加上侧链,最终得到 目标产物紫杉醇。
15
此路线经历37步,产率为0.1%
化学全合成:
全世界范围内约有四十多个一流团队从事紫杉醇的全合成研究工 作,其中有六个团队成功完成并发表了他们的研究成果:
1)Holton全合成路线(1994):
16
化学全合成:
2)Nicolaou全合成路线(1994):
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分离过程
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快速发展
发展大事记:发现 之后的快速发展
9
❖ 在1982年至1994年间,紫杉醇的化学合成以及临 床研究获得快速进展。
❖ 1982-1984年进行动物毒性试验。 ❖ 1983-1986年,进行了临床Ⅰ和Ⅱ期试验。随后,
紫杉醇被用于多种实体瘤如乳腺癌、肺癌的研究。 ❖ 1991年,美国百时美施贵宝公司获得了美国癌症
❖ 来源:红豆杉科植物红豆杉的干燥根、枝叶以及 树皮。
❖ 抗癌机制:有丝分裂中的微管抑制剂,具有聚合 和稳定细胞内微管的作用,致使快速分裂的肿瘤 细胞在有丝分裂阶段被牢牢固定,使微管不再分 开,可阻断细胞于细胞周期之G2与M期,使癌细胞 复制受阻断而死亡 。
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简要机理
❖作用机理:阻滞肿瘤 细胞有丝分裂
❖ 红豆杉生长十分缓慢,上百年才能成材,而我国 20世纪90年代曾大肆砍伐,使野生红豆杉几乎遭 受灭顶之灾,其树皮价格当时也仅仅5元每公斤!
❖ 所以,对于提取紫杉醇作为来源而言,对于生态 的破坏非常严重,另外,红豆杉作为一种再生时 间比较长的植物,其总量是非常有限的,所以采 用其他方式进行替代是非常重要的,现在主要的 替代方法是利用红豆杉的枝叶等可再生的资源, 进行提取紫杉醇前体,进行半合成;还有就是利 用细菌真菌等进行生物合成的方法。
物中以欧洲短叶红豆中紫杉醇含量最高(0.069 %),而最低含量只有 0. 003%,约从 38000 棵紫杉树中方可分离提纯得到 99%纯度的紫杉醇 约 25kg,对于成树其紫杉醇含量为:树皮>树叶 >树根>树干>种子>心材。即使以树皮为原料提 取的话,每提取一公斤紫杉醇就需要活剥10吨树 皮!
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