第九章 三胚层与器官发生

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第九章 三胚层与器官发生

经过原肠作用后，胚胎具有外、中、内三个胚层，它们是动物体的所有器官形成的细胞基础。在脊椎动物中，鱼类、两栖类、爬行类、鸟类甚至哺乳类中都具有相同的器官发生（organogenesis ）模式：外胚层形成神经系统和皮肤；内胚层形成呼吸系统和消化管；中胚层形成结缔组织、血细胞、心脏、泌尿系统等（图9-1）。

第一节 外胚层与中枢神经系统

一、中枢神经系统的发育

中枢神经系统是动物体一切活动的指挥中心。由原肠胚中预定的神经外胚层细胞形成

神经管（neural tube ）的过程称为神经胚形成（neurulation ），处于这一发育阶段的胚胎称为神经胚（neurula ）。由神经外胚层细胞形成神经管的方式有两种，一种为初级神经胚形成（primary neurulation ），即由脊索中胚层引导覆盖在它上面的神经外胚层细胞增殖、内陷，并脱离皮肤外胚层，形成中空的神经管；另一种方式为次级神经胚形成（secondary neurulation ），即神经管起源于胚胎中的一条实心细胞索，该细胞索中心变空以后，形成神经管。胚胎采取哪种神经管形成方式依物种的不同而不同，如大多数鱼类为次级神经管形成，而鸟类神经管的前端部分为初级形成方式，第27体节处到尾部的神经管为次级形成方式。两栖类中，如爪蟾，大多数蝌蚪神经管为初级形成方式，而尾神经管为次级形成。在鼠中，大约从第35体节开始为次级神经管，人的神经管形成方式可能与鼠相同。

受 精

卵 卵 裂 原

肠 胚 外胚层

中胚层 内胚层* 神经管

表皮 软骨

骨 肌肉 结缔组织

循环系统 泌尿生殖系统 表皮 脑 脊髓

腺

毛、齿等

甲、爪 晶状体 呼吸系统 咽

甲状腺 甲状旁腺

消化道

胰

腺

肝

图9-1 脊椎动物三胚层形成的部分器官、系统 （*内胚层只形成这些器官系统的上皮）（仿郑国锠，1992）

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1．初级神经胚形成

初级神经管形成是由脊索中胚层与其上面的外胚层细胞相互作用的结果，由脊索中胚层诱导外胚层细胞形成中空的神经管（图9-2）。各类脊椎动物初级神经管形成的过程相似，图9-3为蛙的初级神经管形成过程，首先，预定的神经外胚层细胞形状发生变化，细胞纵向伸长，使细胞层加厚，形成神经板（neural plate ），神经板大约占整个外胚层的50%。随后，神经板边缘变厚，并向上运动形成神经褶（neural fold ），使神经板中央成为U 型的神经沟（neural groove ），将胚胎分为左右两半（图9-3，图9-4）。两个神经褶向胚胎中央靠拢，最终融合在一起，此时神经板变为神经管，神经管最靠近背侧的部分变为神经嵴细胞（neural crest cell ）。

整个初级神经胚形成过程可分为5个连续的阶段（Schoenwolf,1991a; Catala et al.,

1996）：（1）神经板形成；（2）神经底板（neural floor plate ）形成；（3）神经板变型（shaping ）；（4）神经板弯曲形成神经沟；（5）神经沟封闭形成神经管。 2．次级神经胚形成

次级神经胚形成是指髓索（medullary cord ）的形成以及髓索随后变为中空的神经管。在蛙和鸡中，次级神经胚形成多见于腰椎和尾椎的形成中。在次级神经胚形成时，胚孔背唇细胞并不卷入胚胎内部，而是持续地向腹部生长（图9-5A,B ）。胚孔背唇顶端的生长区域称为索神经铰合区（chordoneural hinge ）（Pasteels,1937），其中包括神经管最后部和脊索后部的祖先细胞。这一区域持续生长的结果使直径为1.2mm 的近似球状的蛙胚变为长度为9mm 的线形蝌蚪。尾尖端细胞直接来源于为胚孔背唇，并由胚孔内表面细胞形成神经肠管（neurenteric canal ），其基部与肛门融合，而背面的部分变为神经管腔（图9-5 C ）。

神经板 神经褶

神经嵴

神经管

表皮

A B C D E

图9-2 两栖动物和羊膜动物神经管形成模式图。

外胚层从最靠近背部的位置向内形成褶，最终形成外侧的表皮和内侧的神经管，其间由神经嵴细胞连接。（自Gilbert,2000）

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图9-3 两栖类的神经胚形成，示早期（左）、中期（中）和后期（右）神经胚 (A)通过胚胎中心的横切面；(B) 通过胚胎中线的纵切面；(C)完整胚胎的背面观。（自Balinsky,1975）

神经板 神经褶

脊索 原肠腔 内胚层 中胚层

表皮

神经板

中胚层

脊索 肠腔 表皮

内胚层 脊索 神经管

肠腔

中胚层

内胚层 表皮

脊索 神经板

神经褶 表皮 原肠腔

内胚层

中胚层

胚孔

囊胚腔残迹 脊索 神经褶

神经板

肠腔 表皮

内胚层

中胚层

胚孔

神经管

神经板 中胚层 内胚层 表皮 肠腔

肝盲囊

神经板 神经褶

胚孔

神经板

神经褶

胚孔

神经管

融合的 神经褶

(A) 横切面

(B) 纵切面 (C) 背面观

DLHP DLHP MHP

预定表皮

预定神经板

神经板 过度带 脊索

脊索

表皮

形成沟 楔形 细胞

锚定

图9-4 鸡神经胚形成中表皮的弯曲示意图。

(A)当预定表皮细胞向胚胎中央迁移时，在与神经板交接处形成神经褶，并推动神经板向下运动到表皮下方；(B)当神经板中线处的细胞（底板细胞）锚定到脊索上时，神经

褶向上隆起；(C)在中央链接点（MHP ）和两个背部链接点（DLHP ）等三个链接区，细胞变为长楔形。（自Moury and Schoenwolf ，1995）

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在鸡胚中，刚封闭的神经管后端的组织称为尾芽（tailbud ）。与蛙的尾芽相似，这一结构并非为一团未分化细胞。Catala 等（1995）一小片鹌鹑尾芽移植到鸡胚尾芽中，发现早期尾芽就有了限定的发育命运。正如爪蟾那样，鸡胚索神经铰合区也包含脊索和髓索的祖先细胞，这些细胞向后端运动。当髓索中形成的小腔彼此融合以后，就成为中空的神经管。

3．神经管的区域化

神经管形成后，紧接着要进行分化，形成中枢神经系统的不同区域。神经管的分化在三个水平上同时进行。在解剖水平上，神经管及其管腔经膨大和缢缩，形成脑腔和脊髓腔；在组织水平上，神经管壁细胞经重组后形成脑和脊髓的不同功能区；在细胞水平上，神经上皮 细胞本身分化为各种类型的神经元和神经胶质细胞。

（1）脑区的形成 大多数脊椎动物的早期发育是相似的。哺乳动物早期神经管为一笔直管状结构，在其后端尚未形成时，前端已经开始发生变化。在神经管的前端，形成三个初级囊泡，分别为前脑、中脑和菱脑（图9-6）。当神经管后端完成封闭后，视泡（optic vesicles ）从前脑两侧伸展出来，而前脑本身在纵向上形成前部的端脑（telencephalon ）和与之相连的间脑（diencephalon ），端脑最终形成大脑半球（cerebral hemispheres ），而间脑形成丘脑和下丘脑区以及视觉感受区。中脑与前脑不同，它不再分成更小的区域，中脑腔最终发育为中脑水管（cerebral aqueduct ）。菱脑同大脑一样，也在纵向上分化为两个区域，即前面的后脑（metencephalon ）和后面的末脑（myelencephalon ），后脑区最终形成小脑（cerebellum ），负责协调身体的运动和平衡，而末脑形成延脑（medulla ），调节呼吸、消化道和心血管运动。

（2）中枢神经系统的组织结构 大脑皮层神经元是分层排列的，每层神经元有各自的联系方式，功能也各不相同。神经管最初由一层胚性神经上皮细胞构成，这些细胞分裂很快。所有这些细胞都分别与神经管内外壁连在一起，因而细胞呈细长型，但不同细胞的细胞核处于不同高度，因而神经管壁看起来象是由无数层细胞构成。当细胞核位于管壁

囊胚腔

内卷运动 外胚层 脊索

预定神经板

向后延伸运动 晚期背唇

（索神经铰合区） 神经管腔 肠

顶部

底部

脊髓 脊索 索神经 铰合区

神经肠管 肛门 后壁

(A) (B) (C) 图9-5 爪蟾次级神经胚形成中的细胞运动

(A)中原肠胚期中胚层细胞的内卷；(B)晚原肠胚至早神经胚期胚孔背唇的运动。晚期背唇停止内卷，外胚层和中胚层细胞都向胚胎后部运动；(C)在早蝌蚪期，胚孔内表面细胞形成神经肠管，其中一部分成为次级神经管腔。（自Gont et al., 1993）

外部边缘时，细胞处于DNA合成状态（S期），在分裂过程中，细胞核逐渐向神经管内壁迁移（图9-7），并在内壁边缘完成细胞分裂（Sauer，1935），所产生的子代细胞有的不再分裂，它们迁移到神经管的边缘，分化为神经元或神经胶质细胞（Fujita, 1996），并形成第二个细胞层。由于有许多的胚性神经上皮细胞不断加入，因而该层细胞逐渐变厚，称为套层（mantle zone），而此时胚性细胞层为脑室层（ventricular zone），随后成为室管膜（ependyma）（图9-8）。由套层中分化出的神经元，彼此间相互联接，并向远离管腔方向伸出第四轴突，形成一个缺少细胞的边缘区（marginal zone）。最终，神经胶质细胞覆盖在边缘区的轴突上，使其外观呈白色。所以，包括神经元胞体在内的套层通常称为灰质（gray matter），而边缘区层称为白质（white matter）。

前脑中脑菱脑（后脑）端脑间脑中脑后脑末脑

3个初级囊泡5个初级囊泡

脊髓

壁腔

图9-6 人类脑的早期发育。（自Moore and Persaud,1993）

G1S G2M G1

神经管腔

细胞周期时相

图9-7 鸡胚神经管中神经上皮细胞细胞核的位置与分裂时相的关系。处

于分裂期的细胞核位于靠近管腔的区域。（自Sauer, 1935）

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在脊髓和延脑中，同样也为室管膜、套层和边缘层这种三层模式，灰质（套层）逐渐变成周围环绕着白质的蝴蝶状结构，二者共同被结缔组织所覆盖。当神经管成熟时，一条纵沟（界沟，sulcus limitans ）将其分背腹两半，背面的部分接受感觉神经元的神经冲动，而腹侧的部分，控制各种运动（图9-9）。

图9-8 神经管壁的分化。

发育5周的人类神经管包含三个带：室管膜带、套膜带和边缘带。在脊髓和延脑中（上排），底部的室管膜带为神经细胞和神经胶质细胞的发源地；在小脑中（中排），，在最远端形成外部颗粒层，该层为第二个分裂细胞层，其成神经细胞向后迁移入中间带，形成颗粒细胞；在大脑皮层中，迁移中的成神经细胞和成胶质细胞形成包含有六层的皮质板。CP ：皮质板（cortical plate ），中间带（intermediaiate zone ），M ：边缘带（marginal zone ），E ：室管膜层（ependymal layer ），GL ：颗粒层（ granule layer ），V ：脑室胚性层（germinal layer ），S ：近脑室带（sub ventricular zone ）， EG ：远端颗粒层（external granule layer ），P ：浦肯野细胞层（Purkinje cell layer ）。（自Jacobson,1991）

M I V

神经管 脊髓

小脑

大脑皮层

M

I E

EG P I V

EG M P GL I E

EG

M

P GL I E

I V

M M

I V

CP S M

CP

I S

E

分子层 新皮质 白质

颗粒细胞轴突 的“分子层” M I V

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（3）小脑的组织结构 小脑是调节躯体运动和平衡的中枢，接受来自内耳和肌肉本体感受器传入的神经纤维。神经冲动经过联络神经元和复杂回路向内传播，直到脑的运动中枢，向外侧由脊髓传到相应的运动神经元，分布到肌肉。

小脑的发育过程中，细胞经过迁移、生长分化以及选择性死亡（selective cell death ），形成室管膜、套层和边缘层的三层模式。其中有些神经元可以进入白质中，相互联接成簇，形成核团（nuclei ），每一核团可作为一个整体单位发挥作用，其功能主要是作为小脑外层与其它脑部的一个信息交换站。另外，在小脑发育过程中，成神经细胞（neuroblast ）迁移到其外层，形成外部胚性细胞层（external germinal layer ），其位置靠近神经管的外部边缘。该层细胞外围边缘细胞（1到2个细胞厚），能大量分裂，而内部含有大量分裂期后（postmitotic ）成神经细胞，它们是小脑皮层神经元的祖先细胞，即颗粒细胞（grqnular cell ），它们迁移至白质后，在内颗粒层（internal granular layer ）区产生颗粒细胞神经元。同时，小脑室管套层中产生很多种类的神经元和神经胶质细胞，包括浦肯野细胞（Purkinje neuron ）。每一个浦肯野细胞都有一巨大的树突，象一把折扇一样覆盖在球状胞体之上。一个典型的浦肯野细胞可以与其它神经元之间形成约100,000个突触（synapse ），并可伸出一根细长的轴突，与深层小脑核团细胞相联系。

小脑在发育过程中，形成复杂的主体神经网络（图9-10），这种结构形成对小脑发挥功能至关重要。浦肯野细胞是小脑皮质中唯一的传出神经元，所有神经冲动都是通过它们来调控各种活动的。在哺乳动物中，小脑复杂网络结构的形成，据认为与胶质引导（glial

预定基区 预定翼区

上皮

界沟

联络神经元 背根 边缘层 套层

室管膜层 背根神经节 脊神经 感觉神经元 躯体运动神经元

图9-9 人类脊髓的发育。

A-D ，神经管可分为背区（翼区， A ）和腹区（基区， B ），二者被界沟分开。当来自体节生骨节的成软骨细胞形成脊椎时，神经管分化为室管膜层、套层和边缘带；E ，脊髓的一节。（自Larsen, 1993） A B C D E

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guidence ）机制有关（Hatten, 1990），在整个皮质中，神经元就是通过“胶质轨道”达到各自的最终目的地。图9-11即为祖先颗粒细胞沿着柏格曼胶质细胞的长突内迁的方式。神经元与胶质之间的相互作用较为复杂，其中包括胶质与神经细胞之间的相互识别等一系列事件（Komuro and Rakic, 1992），在它们的相互识别中，涉及到多种蛋白质的作用，其中最重要的为吸附蛋白astrotactin ，如果神经细胞上的这种蛋白被它的抗体所封阻，神经细胞便不能与胶质突发生粘连（Fishell and Hatten, 1991）。

（4）大脑的组织结构 大脑同样也由三层基本结构发育而成，并采取两种不同的发育途径。首先，与小脑的结构相同，在垂直方向上由彼此相互作用的多层细胞构成（见图9-8）。一些套层中的成神经细胞沿着胶质穿过白质，形成第二个神经元细胞层，这一新

颗粒细胞

柏格曼胶质细胞 平行纤维

外颗粒层

核层 浦肯野细胞层 颗粒细胞层 苔状纤维

颗粒细胞

颗粒细胞

柏格曼胶质细胞 攀缘纤维

未迁移的颗粒细胞 不正常的柏格曼胶质细胞

颗粒细胞

浦肯野细胞

图9-10 A.在正常小鼠中，通过颗粒细胞和浦肯野细胞的中继传播，为加强接受传入神经输入信号服务的高度复杂的神经网络。B.在织巢鼠突变体中，颗粒细胞并没有形成颗粒层，因此，由于不同类型神经细胞发育的相互作用，从而大大破坏了神经元的结构和功能。（自丁汉波等，1987 ）

A B

的套层称为新皮层（neopallial cortex）。该皮层最终分化为6层胞体，每层的功能特点、神经元类型以及连接方式互不相同。例如，第4层神经元主要接收丘脑的传入信号，而第6层神经元则负责将信号输出到丘脑。其次，大脑皮层在水平方向上分为40多个区，每个区也都有其各种不同的功能。

神经元导突

迁移神经元

胶质细胞突

图9-11 神经元在胶质细胞突上的迁移示意图。

（自Rakic,1975）

人类大脑的发育有相当大的适应能力，特别是新皮质的发育中更为显著。人类的大脑甚至在出生以后仍按胎儿的速度发育（Hole et al., 1975）。与其它的灵长类动物相比，要使大脑发育完全，人类的妊娠期应该需要21个而不止9个月（Portmann, 1941），但是，几乎没有妇女的妊娠期达到21个月，因此此时胎儿头部大太，不能通过生殖道。因而，人类胎儿一般在9个月末时就出生，尽管此时大脑并没有发育完全。

二、脊椎动物眼的发育

1．眼的形态发生

眼的发育始于原肠运动期间内胚层和中胚层对预定头部外胚层的诱导作用。在人类中，当胚胎22天时，由间脑向两侧突起形成视泡（optic vesicle）（图9-12），视泡与间脑之间由视柄（optic stalk）相连。随后，突起的视泡与头部外胚层相接触，诱导外胚层增厚形成晶状体板（lens placode）。视泡与外胚层表面紧密接触是形成晶状体的必要条件，如小鼠eyeless突变，就是由于视泡不能接触外胚层而导致眼不能发育（Webster et al., 1984）。

晶状体板形成以后，视泡内陷形成双壁的视杯（optic cup）（图9-12c），同时，外壁细胞形成色素，最终成为色素网膜（pigmented retina），内壁细胞经快速增殖，产生各种胶质细胞、神经节细胞、中间神经元和感光细胞，所有这些细胞一起构成神经视网膜。由神经

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视网膜的神经节细胞发出的轴突在眼的基部会合，经视柄与大脑连接，此时的视柄称为视神经（optic nerve ）。

2．神经视网膜的分化

与大脑和小脑类似，神经视网膜也是由不同类型的神经元分层排列所构成（图9-13），

其中包括光敏和色敏感光细胞（视杆细胞和视锥细胞，rod cell and cone cell ）、神经节细胞胞体以及将刺激从视锥和视杆细胞传向神经节细胞的双极中间神经元。另外，大量米勒细胞（放射状胶质细胞）、无长突神经细胞（amacrine neuron ）、水平细胞（horizontal neuron ）等。

图9-12 脊椎动物眼的发育。

(A)视泡从脑中突出，并接触外胚层；(B 、C)当视泡产生绉褶，晶状体基板发育为晶状体泡时，外面覆盖的外胚层分化为晶状体细胞；(C)随着晶状体泡内凹，视泡变为神经

视网膜和色素视网膜； ( D)晶状体泡将外胚层诱导为角膜。（自 Mann,1964 ）

头部外胚层 初级视泡

前脑 壁 视泡

晶状体基板 晶状

体泡

色素层

神经层

晶状体 (A)4mm 胚胎 (B) 4.5mm 胚胎 (C) 5mm 胚胎 (D) 7mm 胚胎 外成神 经细胞层 内成神 经细胞层

神经节细胞

(A) (B) (C)

神经节细胞层 视神经纤维 内网织层 外网织层 双极神经细胞层 感光细胞体 感光细胞的 视杆和视锥 光线

图9-13 人类视网膜的发育。视网膜神经元在发育中分化为不同的功能层。 (A 、B)视网膜内的成神经细胞开始分离；(C)视网膜中的主要神经元通路。光线在被感光细胞吸收前穿过多层神经元。感光细胞轴突与双极神经元形成突触，将冲动传输到神经节细胞，再由神经节轴突形成的视神经传入大脑。（自Gilbert,2000）

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视网膜的发育与转录因子Pax6有很大的关系。Pax6在前脑的许多细胞中表达，它似乎是所有感光细胞形成所必需的一种因子，对眼的发育起着决定作用。如果将小鼠pax6基因插入到果蝇基因组并随机激活，结果果蝇的眼正是由那些表达小鼠pax6基因的细胞形成（Halder et al., 1995）。在小类和小鼠中，pax6杂合子双眼较小，而隐性纯合子中，眼不能发育（Jordan et al., 1992; Quiring et al., 1994）。

3．晶状体和角膜的分化

在晶状体板向晶状体的发育过程中，逐渐凹陷形成晶状体泡，并与其外面新覆盖的外

胚层接触（图9-12D ），将该外胚层诱导为透明的角膜。在眼的发育中，物理因素也起着重要作用，如眼内液压是确保角膜能正确弯曲的重要因素，使经过角膜的光线能聚焦在视网膜上。

晶状体组织向能够折射光线的透明结构的分化，涉及到细胞结构和形状的变化以及晶状体特异蛋白即晶体蛋白的合成（图9-14）。在分化过程中，晶状体泡后的细胞变长，并在神经视网膜的影响下，形成初级晶状体纤维。在初级晶状体纤维成长的同时，细胞内合成大量的晶状体蛋白，使晶状体蛋白充满整个细胞，并挤出细胞核。随着初级晶状体纤维

图9-14 晶状体细胞的分化

(A)晶状体泡；(B)内层细胞变长，形成初级晶状体纤维；(C)晶状体蛋白填充初级晶状体纤维细胞；(D)从前晶状体上皮分化出新的晶状体细胞；(E)随着晶状体的生长，分化出新的晶状体纤维，这些细胞的细胞核退化。（自Paton and Craig,1974）

初级晶状体纤维

次级晶状体纤维

后晶状体被膜

前晶状体被膜 赤道区 前晶状体

上皮

初级晶

状体纤维 次级晶状体纤维

初级晶状体纤维伸长

晶状体泡腔 晶状体

上皮 (A ) (B) (C ) (D) (E )

的不断生长，最终充满晶状体泡两层细胞之间的空间。

晶状体泡祖先细胞为一群胚性上皮细胞，具有持续的分裂能力。这些细胞在晶状体赤道区域不断地分裂，添加到后面部分，并伸长分化为次级晶状体纤维细胞（图9-14D）。最终，初级和次级晶状体纤维细胞在晶状体内逐步伸长，填充全部晶状体，而覆盖于赤道区前方的细胞为始终保持分裂能力的晶状体上皮细胞。

直接位于晶状体前方的为一具有色素的肌肉细胞，称为虹膜（iris），它可以控制瞳孔的大小，并决定着眼的颜色。与其它肌肉组织不同的是，虹膜并不来源于中胚层细胞，而是来源于外胚层细胞，它是由视杯的边缘围绕晶状体而形成。

三、神经嵴的发育

（一）神经嵴

神经嵴（neural crest）细胞起源于神经管背部区域，在神经管将要完全闭合时，沿着原来神经板的左右两侧从背部神经外胚层形成神经嵴。如果将鹌鹑的神经板移植到鸡的非神经外胚层中，可诱导神经嵴细胞的形成，它们有一些来源于预定神经板细胞，有一些来源于预定上皮细胞（Mancilla and Mayor, 1996）。这些神经嵴细胞广泛迁移，产生多种多样的分化细胞类型，包括（1）感觉神经元和胶质细胞、交感神经元、副交感神经系统细胞；（2）肾上腺髓质细胞；（3）上皮色素细胞和（4）头部骨骼和结缔组织细胞。神经嵴细胞的发育命运取决于它们迁移情况和所处的位置。神经嵴可以分为4个主要功能域（有所重叠）：

（1）头区神经嵴。这部分神经嵴细胞经背侧面迁移，形成的间充质细胞可分化为软骨、骨、脑神经、胶质细胞以及面部结缔组织。该部分神经嵴细胞也能迁入咽囊（pharyngral pouch），形成胸腺细胞、成牙本质细胞（odontoblast）以及肉耳和颌软骨。

（2）躯干神经嵴。在该部分中，变为黑色素细胞（melanocyte）的神经嵴细胞沿背侧面迁移到外胚层，并继续迁移至腹中线。但是，该部分的大多数神经嵴细胞沿腹侧面通过每一骨环（scleroteme）的前半部分进行迁移，其中有些细胞停留在骨环中，形成背根神经节，有些细胞继续向侧面迁移，形成交感神经节、肾上腺髓质和环绕主动脉的神经簇。

（3）迷走区和骶区神经嵴。该部分神经嵴细胞分化为肠副交感神经节（Pomer anz et al., 1991）。在鸡中迷走区神经嵴位于1-7体节的对侧，而骶区神经嵴位于第28体节之后。

（4）心神经嵴。位于头区神经嵴和躯干区神经嵴之间。有证据表明，在鸡胚中，该神经嵴细胞存在于第1至第3体节，与迷走区神经嵴前面的部分重叠（Kirby 1987; Kirby and Waldo, 1990）。它们可发育成黑色素细胞、神经元、软骨细胞和结缔组织细胞等。另外，该区域的神经嵴细胞形成整个大动脉的肌肉结缔组织壁，和分离肺循环与主动脉的隔膜（Le Lievre and Le Douarin, 1975）。

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（二）躯干区神经嵴

1．躯干区神经嵴细胞的迁移途径

躯干区神经嵴是一个发育中的过渡结构（图9-2），它的细胞在神经管封闭后要分散到其它部位，分化为各种类型的细胞。躯干区神经嵴细胞的迁移途径主要有两条，即背侧面迁移和腹面迁移途径（图9-15），祖先黑色素细胞主要通过第一种途径迁移，而其它神经嵴细胞则主要由第二种途径迁移。

2．神经嵴的迁移机制

任何迁移的细胞都面临了3个问题，迁移是如何开始的？是如何识别迁移途径的？迁移目的地有何特异信号以及迁移是如何结束的？

神经嵴细胞的迁移与一种转录因子，即Slug 蛋白有关，神经嵴细胞在迁移前能合成这种因子。Slug mRNA 的反义寡核苷酸能阻碍神经嵴细胞的迁移（Nieto et al., 1994）。另一个与启动神经嵴细胞迁移有关的因子是N-粘着蛋白（N-cadherin ）。N-粘着蛋白开始分布于神经嵴细胞的表面，在细胞开始迁移时，含量降低，在迁移过程中完全消失，但当神经嵴细胞开始形成背根和交感神经节时，又开始表达该蛋白（Takeichi, 1988; Akitaya and Bronner-Fraser, 1992）。

神经嵴细胞所采取的迁移途径是由细胞外基质控制的（Newgreen et al., 1986）。有一种

体节

后 前

表皮 神经管 脊索 皮生肌节 生骨节 主动脉

尾端

口端

途径1：细胞通过前生骨节向副腹侧迁移

途径2：细胞沿表皮和

皮生肌节之间向背侧面迁移

图9-15 鸡胚神经嵴细胞在躯干中的迁移途径。

途径1：细胞通过前生骨节向副腹侧迁移。这些细胞形成交感神经节、副交感神经节、肾上腺髓质细胞和背根神经节；途径2：细胞沿表皮和皮生肌节之间向背侧面迁移。这些细胞变为黑色素形成细胞。（自Gilbert,2000）

蝾螈突变体，其神经嵴细胞可以形成，但不能迁移，如果将野生型胚胎的神经嵴细胞移植到突变胚胎中，神经嵴细胞也不能迁移，但反过来，将突变型胚胎的神经嵴细胞移植到野生型胚胎中，神经嵴细胞可按正常途径迁移（Spieth and Keller, 1984）。因此，这种突变细胞不能迁移的原因在于细胞迁移的环境，而不在于细胞本身。L?fberg等（1989）发现在细胞外基质中含有2种调控神经嵴细胞迁移的候选关键成份，一种是花生凝集素（peanut agglutinin）受体，它能与糖蛋白中的特定糖基结合。如果将鸡胚用花生凝集素处理，神经嵴细胞可以相同的速度迁入体节的前后两半部分（Krull et al., 1995）。另一组分是一种Eph 相关的受体酪氨酸激酶，它具有引导轴突的作用，同时，它的表达与排斥神经嵴细胞的菱脑节有关（Weinstein et al.,1996）。

3．躯干神经嵴细胞的发育潜能

（1）躯干神经嵴细胞发育多能性的证据躯干神经嵴细胞的一个显著特性就是其发育的多能性，一种神经嵴细胞能产生多种不同的细胞类型。例如，来源于迷走区神经嵴的副交感神经元，能产生乙酰胆碱作为神经递质，因此为胆碱能神经元（cholinergic neuron）；来源于胸神经嵴细胞的交感神经元却产生去甲肾上腺素，为肾上腺素能神经元（adrenegic neuron）。但是如果将鸡胚的颈神经嵴和胸神经嵴相互移植，则以前的胸神经嵴细胞形成胆碱能的副交感神经节（Le Douarin et al., 1975）。Kahn等（1980）发现迁移前的胸神经嵴细胞和迷走区神经嵴细胞都具有合成乙酰胆碱和去甲肾上腺素的酶系，所以，胸神经嵴细胞被植入颈部后，能够发育成胆碱能神经元，同样，迷走区神经嵴细胞被植入胸部后，也能发育为肾上腺素能神经元。

Bronner-Fraser和Fraser（1988）通过细胞追踪实验发现一些离开神经嵴的单个细胞是多能的。他们将荧光标记分子注射到仍处于神经管上方的神经嵴细胞中，然后观察这些标记细胞迁移后的分化情况，结果单个神经嵴细胞分裂所形成的子细胞可分化为感觉神经元、色素细胞、肾上腺髓质细胞和胶质细胞（图9-16）。另外，也有人发现只有部分神经嵴细胞有多能性，而另一些神经嵴细胞只有限定发育命运（Stemple and Anderson, 1992）。

（2）躯干神经嵴细胞限定发育潜能的证据有些神经嵴细胞的发育命运的决定比较早，在它们迁移的过程中就被决定了，并且其发育潜能受神经嵴年龄的影响。鸡胚中迁移最早的躯干神经嵴细胞，可以分化为多种细胞类型，如色素细胞、神经元以及肾上腺细胞等，而迁移较晚的细胞大多数只能形成黑色素细胞。事实上，迁移较晚的神经嵴细胞在它们进入背侧向迁移途径前，似乎已经被决定为黑色素细胞了（Erickson and Coins, 1995）。有证据表明，甚至一些较早迁移的细胞，也有发育潜能的限制。一些研究者（Sieber-Blum and Sieber, 1984; Stocker et al., 1991; Weston et al.,1991）发现相当数量的神经嵴细胞只能形成少数几种细胞类型。Le Douarin和Smith（1988）通过移植实验也发现许多形成背根感觉神经元的神经嵴细胞缺少形成运动神经元的潜能。

这些限定了发育潜能的细胞，在分化时，可能有对不同生长因子的需求。如指定为背根神经节细胞的祖先细胞可能需要由神经管产生的一种脑源神经营养性因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）。如果小鼠胚胎中剔除BDNF基因，则鼠胚中缺少背根神经节，但运动神经元并不受影响（Ernfors et al., 1994; Jones et al, 1994）。指定为形成交感神经节的

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神经嵴细胞分化时不需要BDNF ，但它们需要碱性成纤维细胞生长因子（bFGF ）和胶质神经营养因子。

4．神经嵴细胞的终分化

神经嵴细胞的终分化很大程度上是由细胞的发育环境所控制的。迁入肾上腺髓质中鸡

躯干神经嵴细胞可以向两个方向分化，如果有成骨细胞蛋白7（BMP 7）存在，可分化为肾上腺素分泌细胞（V arley et al., 1995）；如果这些细胞处于糖皮质激素的环境中，则形成肾上腺髓质细胞（图9-17）（Anderson and Axel, 1986）。

（三）头区神经嵴

1．头区神经嵴的迁移途径

面部组织大多数由头区神经嵴细胞发育而来。后脑沿前后轴分为多个菱脑节（rhombomere ），鸡胚脑区神经嵴细胞的迁移与它们所起源的菱脑节有关。这些神经嵴细胞主要有三种迁移途径（图9-18）（Lumsden and Guthrie, 1991）：（1）起源于菱脑２（r ２）的细胞迁移到第1咽囊，也能形成三叉神经节和额鼻突（frontonasal process ）；（2）起源于r4的细胞迁移到第2咽囊，也能形成膝神经节和前庭听神经节；（3）起源于r6的细胞迁入第3和第4咽囊形成胸腺、甲状旁腺、甲状腺以及迷走神经节和舌咽神经节。菱脑3和菱脑5的神经嵴细胞不通过其周围的中胚层迁移，但是它们要么进入程序性死亡，要么加入到其两侧的神经嵴细胞流（Graham et al., 1993; Graham et al., 1994）。

神经嵴

荧光葡聚糖

黑色素细胞 背根神经节

腹根神经膜细胞

交感神经节

肾上腺髓质

注射实验1

注射实验2 注射实验1

注射实验2

(A) (B)

图9-16 躯干神经嵴细胞的发育多能性。

将荧光葡聚糖标记的单个神经嵴细胞注射到神经嵴中，其后代细胞也含有一定的荧光标记分子。(A)在神经嵴细胞开始迁移之前注射标记细胞；(B)两天之后，带有标记的神经嵴细胞的分布。（自Lumsden,1988）

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哺乳动物胚胎中，脑区神经嵴细胞在神经管封闭前就开始迁移（Tan and Morriss-Kay, 1985），这些细胞形成面部间充质（Johnston et al., 1985）。起源于前脑和中脑的细胞形成鼻突、喉凸和第一咽囊间充质。起源于后脑区的细胞形成第二咽囊间充质，进而形成镫骨和面部软骨（图9-18B ）。 头区神经嵴细胞的迁移途径的特异性及发育命运的决定涉及到一系列的基因。Chisaka 和Capecchi （1991）剔除小鼠Hoxa-3基因后，发现胸腺、甲状旁腺缺失或发育不全，颈椎缩短，主心血管畸形。如果剔除Hoxb-1基因，则细胞的迁移途径和面部神经的形成受到影响（Goddard et al., 1996）。 2．头区神经嵴细胞的发育潜能

神经嵴细胞虽然有一定的发育多能性，但并不是所有神经嵴细胞的发育潜能都是相同的。脑区神经嵴细胞与躯干部细胞的发育潜力就不相同。如只有脑区神经嵴细胞才能形成头部软骨。如果将脑区神经嵴细胞移植到躯干部，则可参与躯干部软骨的形成，而在正常情况下躯干部软骨并不是由神经嵴细胞发育而成。

Baroffio 等（1991）发现体外培养的鸡或鹌鹑神经嵴细胞是一个不均一的细胞群，其中一些细胞具有多能性，可以分化为多种类型的细胞，而另一些细胞有分化能力十分有限。

多能神 经嵴细胞

双能神 经嵴细胞

bFGF

糖皮质激素 糖皮质激素

抑制神经分化

祖先嗜铬细胞

嗜铬细胞

（肾上腺髓质细胞）

促进嗜铬特异酶的合成 抑制对糖皮质激素的反应

NGF 感受细胞

交感神经元

NGF 图9-17 一个指定为肾上腺髓质细胞或交感神经元的神经嵴细胞的终分化。 糖皮质激素可能在两种分化途径中都发挥了作用。首先，它能抑制交感神经元分化促进因子的活性；其次，它能肾上腺细胞特异酶的合成。处于碱性成纤维细胞生长因子（bFGF ）和神经生长因子（NGF ）的细胞分化为交感神经元。（自Gilbert,2000）

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第二节 表皮及其衍生物的发育

一、表皮细胞的起源

神经胚形成后，覆盖于胚胎上的细胞形成预定的表皮。起初，该组织厚度只有一层细胞，但在多数脊椎动物中，很快变为一个2层结构。外层形成胎皮（periderm ），胎皮只是临时性的保护结构，在真正的上皮形成之后，它自行脱落。内层称为基底层（basal layer ），该层细胞为一胚性上皮细胞层，是所有表皮的细胞来源（图9-19）。由基底层又分离其外侧的一层细胞，称为棘层（spinous layer ），该两层细胞一起被称为生发层或马尔皮基氏层

图9-18 哺乳动物头部神经嵴细胞的迁移。

(A)鼠第4～6菱脑节的颅神经嵴细胞主要迁移到咽弓，也有少量细胞迁移后形成颅神经节； (B)神经嵴的外胚层间质细胞在人类面部形成的结构。标有数字（1,2,3,4）的为咽囊的软骨，1、2和3分别表示第I 、II 和第III 咽囊，4表示第IV 和第VI 咽囊，有点的区域为由头部神经嵴前段形成的面部骨骼；(C)主动脉和肺静脉间隔的形成。人类后脑神经嵴细胞在妊娠第五周到第4和第6 咽弓，并进入动脉干形成这一间隔。（自Gilbert,1997）

r4

r5

r6

菱

脑

节 神经管

神经节 VII 和VIII

咽囊II

迁移的神经嵴细胞

咽囊III 神经节 IX 和X

面部软骨

1 1 3

4 4

锤骨 砧骨

镫骨

2

茎突

舌骨 甲状软骨 环状软骨 气管环

迁移的神经嵴细胞 神经管 动脉干 心球 降主动脉 脐肠动脉 脐动脉

(A)

(B)

(C)

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（Malpighian layer ）。生发层细胞分裂后，又形成其外测的颗粒层（granular layer ），其中含有角蛋白颗粒。与保留在生发层中的细胞不

一样，颗粒层细胞不再分裂，而是分化为皮肤细胞或角质形成细胞（keratinocyte ）。随着胞龄的增加，颗粒层细胞不断向外推移，而形成角质层（cornified layer ），其细胞变为扁平状，细胞内有大量的角蛋白颗粒，细胞核被推向细胞的一侧。角质层的深度变异较大，通常为10到30个细胞厚。幼体出生以后，旧的角质层细胞脱落，代之以从颗粒层新形成的角质层细胞。在整个一生中，角质层细胞不断地处于更新之中（如人每天脱落的角质细胞大约有1.5g ），新细胞的最终来源为生发层细胞的分裂。由神经嵴细胞形成的色素细胞也停留在生发层中，并在此处将它们的色素囊（黑色素）转移到形成中的角质形成细胞。

皮肤的发育与两种生长因子

密切相关。一种是TGF-α（transforming growth factor-α），它是在基底细胞中合成的，合成后又刺激基底细胞自身的分裂，因此它是一种自分泌发生因子（autocrine growth factor ）。另一种生长因子为KGF （keratinocyte growth factor ，也称为成纤维细胞生长因子7，FGF7），由真皮下的成纤维细胞合成，具有调控基底细胞分裂的作用。如将KGF 基因与角蛋白启动子连接后转入小鼠中，KGF 可变为自分泌生长因子，其结果是该转基因鼠的皮肤比正常的要厚，宽松下垂，基底细胞多，无毛囊（Guo et al., 1993）。

二、表皮衍生物

汗腺及表皮衍生物是由表皮和真皮在特异位点的相互作用而形成的。毛囊形成的第一步是表皮基底层细胞聚集于一特定部位，随后，基底细胞伸长、分裂并沉入真皮中。真皮细胞对此的反应是在侵入的表皮细胞下形成一个小结（真皮乳头，dermal papilla ），该真皮乳头可刺激基底干细胞更快地分裂，产生的细胞分化形成角质化的毛干（hair shaft ）（Hardy, 1992; Miller et al., 1993）。原先位于表皮细胞中的成黑色素细胞侵入真皮后，分化为黑色素

增厚的质膜 角蛋白

角蛋白颗粒 基板

黑色素细胞

角质层 过度型细胞

颗粒层

棘层

基底层

图9-19 人类皮肤分层示意图。

基底层细胞具有分裂能力，而外层完全角质化的细胞为死细胞，并最终脱落。角质化细胞中的色素来源于基底层内的成黑色素细胞的黑色体。（Montagna and Parakkal,1974）

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细胞，并将色素转移到毛干（图9-20）。与此同时，在毛囊的一侧形成两个隆起，下面的一个由具分裂能力的干细胞组成，当毛干脱落后，就由该处的细胞分裂后形成新的毛干（Cotsarelis et al., 1990）。上面的一个隆起形成皮脂腺。人类胚胎最初的毛发称为胎毛（lanugo ），通常在婴儿出生后脱落，全部或部分被短丝状的毫毛（vellus ）所替代。 除毛发以外，表皮衍生物还有羽毛、鳞片以及汗腺等，它们的形成与毛发相似，也是由真皮和表皮的相似作用所形成。

第三节 中胚层与器官形成

神经胚期，中胚层可以分为5个区域。第一个区域为脊索中胚层，形成脊索，其主要

功能为诱导神经管的形成和建立前-后体轴。第二个区域为体节背中胚层，由该区域中胚层细胞形成体节。第三个区域为居间中胚层，形成泌尿系统和生殖管。第四个区域为侧板中胚层，由它形成心脏、血管、血细胞以及胚外结构等。第五个区域为头中胚层，由它形成一些结缔组织和面部的肌肉系统。

一、脊索和体节的分化

1．轴旁中胚层（paraxial mesoderm ）

原肠作用的主要任务之一就是形成内胚层和外胚层之间的中胚层。脊索形成后（见第

(A) (B) (C) (D) 上皮外胚层 凝聚 间充质 真皮 间充质 形成中的毛管

毛尖 真皮乳头 毛发

皮脂腺

含有毛囊干

细胞的球泡 图9-20 人类胎儿皮肤毛囊的发育

(A)基底上皮细胞稍稍陷入真皮，形成柱形泡状结构；(B)上皮细胞继续增殖，真

皮间充质细胞聚集于初级毛芽的基部；(C)在伸长的毛芽中形成毛干；(D)从毛根中伸出角质化毛干，由副芽形成皮脂腺，其下面的区域中含有能再次形成毛发的毛囊干细胞。（自Hardy,1992; Mullwe et al.,1993 ）

九章）后，其两侧的中胚层细胞带，称为轴旁中胚层，在鸟类中特称为体节板（segmental plate），在哺乳动物中称为不分节中胚层（unsegmented mesoderm）。当原条退化，神经褶开始向胚胎中央聚拢时，轴旁中胚层一团团细胞块，称为体节（somite）。体节只是发育中的一个暂时性结构，但对脊椎动物胚胎分节模式的形成极为重要，如体节决定着神经嵴细胞和脊神经轴突的迁移途径。由体节细胞形成椎骨、肋骨、背部皮肤的真皮、背部骨骼肌、体壁和肢骨骼肌等。

2．体节形成的起始

体节首先在胚胎的前部形成，新的体节从轴旁中胚层的最前端开始，按一定的间隙有规律地形成。因为胚胎的发育速度有一定的变化（如鸡胚在不同孵化温度下的发育速度稍有不同）。因此，体节形成的数目是衡量胚胎发育进程的一个很好的指标。胚胎中体节总数因种而异。

在鸡胚中，体节形成时，由体节板形成一个个的细胞螺环（whorl），称为体节球（somitomere），由体节球细胞压缩形成体节。由细胞结合松散的体节球形成细胞结合紧密的体节这一过程与两种细胞外基质蛋白的合成有关，即纤连蛋白（fibronectin）和N-钙粘着蛋白（N-cadherin）（Dstrosky et al., 1984; Hatla et al., 1987），而这两种蛋白质的合成又受到Notchl和Paraxis基因的调控。Notchl基因可编码一个转录因子，该因子的作用区域为不分节背部中胚层的最前面的区域。小鼠中如果缺乏该转录因子，将致使体节大小明显不一（图9-21）。Paraxis基因也编码一个转录因子，其表达部位为不分节中胚层（鼠）和体节板（鸡）的前部末端。向胚胎中注射Paraxis mRNA的反义寡核苷酸可阻碍胚胎体节的形成（Barnes et al., 1997）。

(A) 存在Notch1

体节轴旁中胚层

Notch蛋白浓度

(B) 不存在Notch1

轴旁中胚层

体节过渡区

前后

图9-21 从体节球向体节的转变

(A)在野生型胚胎中，Notch1基因在最后端未分节的轴旁中胚层中表达；(B)

在Notch1基因的胚胎中，体节大小不一致。（自Conlon et al.,1995）

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