生物荧光标记

荧光标记技术：指利用一些能发射荧光的物质共价结合或物理吸附在所要研

究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。（利用荧光蛋白或荧光蛋白基因作为标志物对研究对象进行标记的分析方法）常用的荧光蛋白为绿色和红色两种，绿色荧光蛋白（GFP）常用的是来源于发光水母的一种功能独特的蛋白质，分子量为27kD，具有238个氨基酸，蓝光或近紫外光照射，发射绿色荧光。红色荧光蛋白来源于珊瑚虫，是一种与绿色荧光蛋白同源的荧光蛋白，在紫外光的照射下可发射红色荧光，有着广泛的应用前景。

荧光标记法可以在同一试验中，分别或同时使用两种不同的荧光蛋白分别或同时研究。

荧光标记技术的原理及特征：当某种常温物质经某种波长的入射光（通

常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。

利用荧光染料与被研究对象（蛋白、多肽等）吸附或共价结合后其荧光特性发生改变，从而反映有关研究对象性能的信息。

常用荧光染料的种类：

1.标准荧光素及其衍生物，如异硫氰酸荧光素（FITC）、羟基荧光素（FAM）、四氯荧光素（TET）等。荧光素异硫氰酸酯(FITC)是一种常用的荧光染料。

2.罗丹明类染料（rhodamine dye）是生物技术中常用的蛋白质分析染料之一，主要包括R101、四乙基罗丹明（RB200）和羧基四甲基罗丹明（TAMRA）等。与荧光素类衍生物相比，罗丹明类具有更强的光稳定性、更高的荧光产量和更低的pH敏感性。

3.菁染料目前研究比较活跃的标记菁染料主要有两类，一类是噻唑橙（thiazole orange, TO）、噁唑橙（oxazole orange, YO）系列及其二聚体染料，另一类是多甲川系列菁染料。

4.其他荧光染料二苯乙烯、萘酰亚胺、香豆素类、吖啶类、芘类等。

同位素示踪法同位素是具有相同质子数，不同中子数的同一元素，互称同位素，即

质量不同而化学性质相同的原子。同位素示踪法：用示踪元素标记的化合物，可以根据这种化合物的放射性，对有关的一系列化学反应进行追踪。这种科学研究方法叫做同位素示踪法，也叫同位素标记法。

应用可用于研究细胞内的元素或化合物的来源、组成、分布和去向等，进而了解细胞

的结构和功能、化学物质的变化、反应机理等。还可用于疾病的诊断和治疗，如碘的放射性同位素可以用来治疗甲状腺肿大。

使用注意事项：一次只能使用一种同位素标记