白英中总生物碱的含量测定
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[ 2 ] 李非里 ,刘丛强 ,宋照亮. 土壤中重金属形态的化学分析 综述[J ] . 中国环境监测 ,2005 ,21 (4) :21227.
[ 3 ] TESSIER A ,CAMPBELL WG,BAISSON M. Sequential ex2
traction procedure for the speciation of particulate trace metals
表 2 正交试验优选白英中总生物碱提取工艺结果
试验号 乙醇的体积分数/ %
1
1
2
1
3
1
4
2
5
2
6
2
7
3
8
3
9
3
K1
45. 510
K2
38. 473
K3
40. 828
R
2. 346
K1 2
2 071. 152
K2 2
1 480. 195
K3 2
1 666. 892
麝香草酚蓝 ;至分液漏斗中 ,剧烈振摇 ,静置 15 min ;
分取三氯甲烷层 ,放入装有 0. 25 g 无水硫酸钠的量
瓶中 ,振摇 ,静置 ; 精密量取上清液 1 mL ,置 10 mL
量瓶中 ,精密加入 1 mL 0. 01 mol ·L - 1 的 KO H 无水
乙醇 ,用三氯甲烷稀释至刻度 ;随行空白 ,在 600 nm
积物中 重 金 属 的 形 态 特 征 [ J ] . 物 探 化 探 计 算 技 术 ,
2006 ,28 (4) :3632366. [ 6 ] 中国药典 2005 年版[ S] . 一部. 2005 :附录 43244. [ 7 ] 赖伟勇 ,符乃光 ,张俊清 ,等. 海南产与市售六种中药材
考察因素 ,每个因素各取 3 个水平 ,以总生物碱含量
为评价指标 ,应用 L9 (34 ) 正交表安排试验 。因素水 平表见表 1 ,正交试验结果见表 2 和表 3 。
表 1 因素水平表
水平
乙醇的体积分数/ %
因 素 提取次数
乙醇体积/ mL
1
100
1
25
2
80
2
50
3
60
3
100
通过直观分析表明 ,影响因素的主次顺序为提取
处测定吸光度值 。计算得回归方程为 A = 0. 021 3 C
- 0. 005 9 , r = 0. 999 8 ,结果表明士的宁在 10. 20～
35. 70 mg ·L - 1 范围内与吸光度呈良好的线性关系 。
2. 5 正交试验法优选白英中总生物碱的提取工艺
本试验选定乙醇的体积分数 、提取次数和溶剂量作为
液 ,用三氯甲烷溶解 , 定量转移至 25 mL 量瓶中 ,并
用三氯甲烷稀释至刻度 。
2. 3 测定波长的选择 分别精密量取对照品溶液与
供试品溶液 5. 0 mL 至分液漏斗中 ,再依次加入 4 mL
p H4. 0 缓冲液 、2 mL 0. 001 mol ·L - 1 溴麝香草酚蓝
和 5 mL 三氯甲烷 ,剧烈振摇 ,静置 15 min ;分取三氯
260
态为主 ,水溶态 、离子交换态及碳酸盐结合态合计占 总量的 76. 46 % ;样品中汞含量较低 ,各形态汞的含
量合计为 0. 127 mg ·kg - 1 ,水溶态 、离子交换态及碳 酸盐结合态只检测到微量 ,残渣态和有机态占总量的 81. 10 % ;砷盐各形态含量合计为 1. 020 mg ·kg - 1 ,
次数 > 乙醇的体积分数 > 溶剂体积 。选择最优条件
为 :25 mL 无水乙醇回流 2 次 ,每次 2 h 。
验证试验 :按 2. 2 项下制备供试品溶液 ,按 2. 3 项下
测得吸光度值。测得白英中总生物碱含量为 18. 30 mg
·g- 1 ,与上表所得结果比较可见本工艺较为合理。
2. 6 稳定性试验 精密量取供试品溶液 5 mL ,分别
甲烷层 ,放入装有 0. 25 g 无水硫酸钠的量瓶中 ,振
摇 ,静置 ;精密量取上清液 1 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,
精密加入 1 mL 0. 01 mol ·L - 1 的 KO H 无水乙醇液 ,
用三氯甲烷稀释至刻度 ;随行空白 ,在 300～700 nm
波长范围内扫描图谱 。结果表明对照品士的宁在
主要为水溶态和残渣态 ,残渣态和有机态占总量的 35. 49 %。
表 4 栀子中各种化学形态重金属 、砷盐的分布
元素
水溶态/ %
离子 交换态/ %
碳酸盐 结合态/ %
铁锰氧化物 结合态/ %
有机 结合态/ %
残渣态/ %
Cu 23. 14 15. 90
-
16. 36
24. 48 20. 12
Pb 3. 37 11. 16
(1. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016 ;2. 山西生物应 用职业技术学院 ,山西 太原 030031)
摘要 :目的 建立白英中总生物碱的含量测定方法 。方法 用 酸性染料比色法测定白英中总生物碱的含量 ,以士的宁为对 照 ,0. 001 mol ·L - 1 的溴麝香草酚蓝为酸性染料 ,在 p H4. 0 缓 冲液中用三氯甲烷萃取 ,再用 0. 01 mol ·L - 1 KOH 的乙醇液碱 化 ,在 600 nm 处测定吸光度值。结果 士的宁在 10. 20～35. 70 mg ·L - 1范围内与吸光度值呈良好线性关系 ( r = 0. 999 8) ,方法 的平均回收率为 99. 3 %( n = 9) ,RSD 为 1. 3 %。结论 该方法操 作简便、准确、灵敏、重现性好 ,可用于白英药材的质量控制。 关键词 :白英 ;总生物碱 ;士的宁 ;酸性染料比色法 中图分类号 : R927. 2 文献标识码 :A 文章编号 :100422407 (2009) 0420260203
出口绿色行业标准》规定的镉 ≤0. 3 mg ·kg - 1 的标 准 ,说明样品栀子来源植物生境中镉含量可能过高或 栀子来源植物对镉有较强的吸收或较多的蓄积 。
4 讨论 目前还未见专门针对中药材中有害元素形态分
析方法的报道 。因此 ,作者采用了土壤和沉积层中重 金属形态的分析方法 。虽说该种方法用于中药材有
38. 870
42. 071
43. 870
1. 667
1 510. 867
1 769. 995
1 924. 544
1 735. 135
4. 276
指标
12. 99 15. 69 16. 83 10. 25 13. 85 14. 37 12. 01 16. 79 12. 03
∑Xi
124. 811 P 1 730. 860 QT 1 772. 438 ST 41. 578 2
Qi
1 739. 413
Si
8. 553
因 素
提取次数 乙醇体积/ mL
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
35. 247
44. 153
46. 335
37. 977
43. 229
42. 681
598 nm 处有最大吸收 ,供试品溶液在 600 nm 处有最
大吸收 ,未加酸性染料的供试品在此范围内无吸收 ,
故选择 600 nm 作为测定波长 。
2. 4 标准曲线的制备 分别精密量取 2 ,3 ,5 ,6 和 7
mL 对照品溶液 ,依次加入 8 ,7 ,5 ,4 和 3 mL 三氯甲
烷及 4 mL p H4. 0 缓冲液 、2 mL 0. 001 mol ·L - 1 溴
基金项目 :辽宁省科技厅项目 (2007226011) ; 沈阳市科技局 项目 (107116429200)
作者简介 :甄会贤 ,女 ,硕士 ,讲师 3通讯作者 :孙立新 , 女 ,副教授 ,硕士生导师
西北药学杂志 2009 年 8 月 第 24 卷 第 4 期
261
醇回流 2 次 ,每次 2 h ,滤过 ; 合并滤液 ,减压蒸干滤
3. 696
2. 059
1 242. 325 1 949. 468
2 146. 914 1 442. 271
1 868. 780 1 821. 650
1 752. 673 1 737. 796
21. 813
6. 936
空白 1 2 3 3 1 2 2 3 1
[J ]. Analytical Chemistry ,1979 ,51 (7) :844. [ 4 ] 郭玉文 ,蒲丽梅 ,乔玮 ,等. ICP2A ES 在分析飞灰中重金
属化学形态上的应用 [J ] . 光谱学与光谱分析 ,2006 ,26
(8) :154021542. [ 5 ] 徐争启 ,倪师军 ,张成江 ,等. 金沙江 (攀枝花段) 水系沉
7. 94
11. 67
58. 94
7. 01
Cd 1. 59 33. 40 41. 46
8. 17
9. 76
5. 62
Hg
-
-
-
18. 90
45. 67 35. 43
As 23. 53 13. 14 13. 73
14. 12
8. 04 27. 45
从表 3 测定数据可以看出 ,5 种有害元素中 ,样 品栀子中镉含量远远超过了 2001 年 7 月 1 日国家对 外贸易经济合作部出台和实施的《药用植物及制剂进
白英为茄科植物 Sol anum l y rat um Thunb. 的干 燥全草 ,性微寒 ,味苦 ;最早见于《本经》记载 ,列为上 品 ,为传统中药[1] ;具有清热解毒 、祛风化痰 、祛风除 湿等功效 ,用于治疗癌症 、肿瘤 、疱疹 、疟疾 、黄疸 、水 肿 、淋病 、风湿性关节炎 、白带等 。白英含有多种化学 成分 ,主要有甾体生物碱类 、甾体皂苷类等化合物[2] 。 白英总生物碱具有一定的抗癌活性[3] ;脂溶性生物碱 具有明显的抗病原性细菌的作用 ,抗菌效果优于硫酸 黄连素和林可霉素[4] 。文献报道[4 ] 用重量法测定了 总碱的含量 。本课题组从白英中分离得到生物碱士 的宁 ,以士的宁为对照 ,用酸性染料比色法[526] 测定了 白英中总生物碱的含量 ,并比较了 21 种不同来源的 白英中的总生物碱含量 ,为白英的质量控制提供了一 定的理论依据 。 1 仪器与试药 1. 1 仪器 TU21901 双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) 。 1. 2 试药 士的宁标准品 (中国药品生物制品检定 所 ,1107052200306 ,供含量测定用) ; p H4. 0 缓冲液 (上海鹏顺科学仪器有限公司) ;其它试剂均为分析 纯 。21 个不同来源的白英药材均由沈阳药科大学孙 启时教授鉴定为茄科植物 Sol anum l y rat um Thunb. 的干燥全草 。 2 方法与结果 2. 1 对照品溶液的制备 取士的宁对照品约 5 mg , 精密称定 ,置于 100 mL 量瓶中 ,加三氯甲烷溶解并 定容即得 。 2. 2 供试品溶液的制备 取白英粗粉约 0. 5 g ,精密 称定 ,加入 2 mL 氨水浸泡 0. 5 h ;加入 25 mL 无水乙
表 3 方差分析结果
方差来源
在 0 ,4 ,8 ,20 ,24 和 30 h 按上述条件测定吸光度值 ,
RSD 为 1. 2 %。结果表明 ,供试溶液在 30 h 内稳定 。
2. 7 精密度试验 精密量取对照品溶液 5. 0 mL ,共
5 份 ,按上述条件测定吸光度值 , RSD 为 1. 0 %。结
果表明 ,方法的精密度良好 。
害元素形态分析上存在一些缺陷 ,但总体上还是能够 反映药材中有害元素的存在形式与分布情况 。
中药中有害元素的形态分析属于基础性研究工
作 ,能够提供多方面有价值的信息 ,加强这方面的研 究 ,对于促进我国中医药发展具有积极的意义 。 参考文献 :
[ 1 ] 何品晶 ,章骅 ,王正达 ,等. 生活垃圾焚烧飞灰的污染特 性[J ] . 同济大学学报 (自然科学版) ,2003 ,31 (8) :972.
中重金 属 含 量 的 比 较 研 究 [ J ] . 广 东 微 量 元 素 科 学 ,
2004 ,11 (10) :34236.
(收稿日期 :2009204213)
西北药学杂志 2009 年 8 月 第 24 卷 第 4 期
白英中总生物碱的含量测定
甄会贤1 ,2 ,李 平2 ,解育静2 ,郝晶晶2 ,齐 伟1 ,孙立新1 3
[ 3 ] TESSIER A ,CAMPBELL WG,BAISSON M. Sequential ex2
traction procedure for the speciation of particulate trace metals
表 2 正交试验优选白英中总生物碱提取工艺结果
试验号 乙醇的体积分数/ %
1
1
2
1
3
1
4
2
5
2
6
2
7
3
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3
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K1
45. 510
K2
38. 473
K3
40. 828
R
2. 346
K1 2
2 071. 152
K2 2
1 480. 195
K3 2
1 666. 892
麝香草酚蓝 ;至分液漏斗中 ,剧烈振摇 ,静置 15 min ;
分取三氯甲烷层 ,放入装有 0. 25 g 无水硫酸钠的量
瓶中 ,振摇 ,静置 ; 精密量取上清液 1 mL ,置 10 mL
量瓶中 ,精密加入 1 mL 0. 01 mol ·L - 1 的 KO H 无水
乙醇 ,用三氯甲烷稀释至刻度 ;随行空白 ,在 600 nm
积物中 重 金 属 的 形 态 特 征 [ J ] . 物 探 化 探 计 算 技 术 ,
2006 ,28 (4) :3632366. [ 6 ] 中国药典 2005 年版[ S] . 一部. 2005 :附录 43244. [ 7 ] 赖伟勇 ,符乃光 ,张俊清 ,等. 海南产与市售六种中药材
考察因素 ,每个因素各取 3 个水平 ,以总生物碱含量
为评价指标 ,应用 L9 (34 ) 正交表安排试验 。因素水 平表见表 1 ,正交试验结果见表 2 和表 3 。
表 1 因素水平表
水平
乙醇的体积分数/ %
因 素 提取次数
乙醇体积/ mL
1
100
1
25
2
80
2
50
3
60
3
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通过直观分析表明 ,影响因素的主次顺序为提取
处测定吸光度值 。计算得回归方程为 A = 0. 021 3 C
- 0. 005 9 , r = 0. 999 8 ,结果表明士的宁在 10. 20～
35. 70 mg ·L - 1 范围内与吸光度呈良好的线性关系 。
2. 5 正交试验法优选白英中总生物碱的提取工艺
本试验选定乙醇的体积分数 、提取次数和溶剂量作为
液 ,用三氯甲烷溶解 , 定量转移至 25 mL 量瓶中 ,并
用三氯甲烷稀释至刻度 。
2. 3 测定波长的选择 分别精密量取对照品溶液与
供试品溶液 5. 0 mL 至分液漏斗中 ,再依次加入 4 mL
p H4. 0 缓冲液 、2 mL 0. 001 mol ·L - 1 溴麝香草酚蓝
和 5 mL 三氯甲烷 ,剧烈振摇 ,静置 15 min ;分取三氯
260
态为主 ,水溶态 、离子交换态及碳酸盐结合态合计占 总量的 76. 46 % ;样品中汞含量较低 ,各形态汞的含
量合计为 0. 127 mg ·kg - 1 ,水溶态 、离子交换态及碳 酸盐结合态只检测到微量 ,残渣态和有机态占总量的 81. 10 % ;砷盐各形态含量合计为 1. 020 mg ·kg - 1 ,
次数 > 乙醇的体积分数 > 溶剂体积 。选择最优条件
为 :25 mL 无水乙醇回流 2 次 ,每次 2 h 。
验证试验 :按 2. 2 项下制备供试品溶液 ,按 2. 3 项下
测得吸光度值。测得白英中总生物碱含量为 18. 30 mg
·g- 1 ,与上表所得结果比较可见本工艺较为合理。
2. 6 稳定性试验 精密量取供试品溶液 5 mL ,分别
甲烷层 ,放入装有 0. 25 g 无水硫酸钠的量瓶中 ,振
摇 ,静置 ;精密量取上清液 1 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,
精密加入 1 mL 0. 01 mol ·L - 1 的 KO H 无水乙醇液 ,
用三氯甲烷稀释至刻度 ;随行空白 ,在 300～700 nm
波长范围内扫描图谱 。结果表明对照品士的宁在
主要为水溶态和残渣态 ,残渣态和有机态占总量的 35. 49 %。
表 4 栀子中各种化学形态重金属 、砷盐的分布
元素
水溶态/ %
离子 交换态/ %
碳酸盐 结合态/ %
铁锰氧化物 结合态/ %
有机 结合态/ %
残渣态/ %
Cu 23. 14 15. 90
-
16. 36
24. 48 20. 12
Pb 3. 37 11. 16
(1. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016 ;2. 山西生物应 用职业技术学院 ,山西 太原 030031)
摘要 :目的 建立白英中总生物碱的含量测定方法 。方法 用 酸性染料比色法测定白英中总生物碱的含量 ,以士的宁为对 照 ,0. 001 mol ·L - 1 的溴麝香草酚蓝为酸性染料 ,在 p H4. 0 缓 冲液中用三氯甲烷萃取 ,再用 0. 01 mol ·L - 1 KOH 的乙醇液碱 化 ,在 600 nm 处测定吸光度值。结果 士的宁在 10. 20～35. 70 mg ·L - 1范围内与吸光度值呈良好线性关系 ( r = 0. 999 8) ,方法 的平均回收率为 99. 3 %( n = 9) ,RSD 为 1. 3 %。结论 该方法操 作简便、准确、灵敏、重现性好 ,可用于白英药材的质量控制。 关键词 :白英 ;总生物碱 ;士的宁 ;酸性染料比色法 中图分类号 : R927. 2 文献标识码 :A 文章编号 :100422407 (2009) 0420260203
出口绿色行业标准》规定的镉 ≤0. 3 mg ·kg - 1 的标 准 ,说明样品栀子来源植物生境中镉含量可能过高或 栀子来源植物对镉有较强的吸收或较多的蓄积 。
4 讨论 目前还未见专门针对中药材中有害元素形态分
析方法的报道 。因此 ,作者采用了土壤和沉积层中重 金属形态的分析方法 。虽说该种方法用于中药材有
38. 870
42. 071
43. 870
1. 667
1 510. 867
1 769. 995
1 924. 544
1 735. 135
4. 276
指标
12. 99 15. 69 16. 83 10. 25 13. 85 14. 37 12. 01 16. 79 12. 03
∑Xi
124. 811 P 1 730. 860 QT 1 772. 438 ST 41. 578 2
Qi
1 739. 413
Si
8. 553
因 素
提取次数 乙醇体积/ mL
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
35. 247
44. 153
46. 335
37. 977
43. 229
42. 681
598 nm 处有最大吸收 ,供试品溶液在 600 nm 处有最
大吸收 ,未加酸性染料的供试品在此范围内无吸收 ,
故选择 600 nm 作为测定波长 。
2. 4 标准曲线的制备 分别精密量取 2 ,3 ,5 ,6 和 7
mL 对照品溶液 ,依次加入 8 ,7 ,5 ,4 和 3 mL 三氯甲
烷及 4 mL p H4. 0 缓冲液 、2 mL 0. 001 mol ·L - 1 溴
基金项目 :辽宁省科技厅项目 (2007226011) ; 沈阳市科技局 项目 (107116429200)
作者简介 :甄会贤 ,女 ,硕士 ,讲师 3通讯作者 :孙立新 , 女 ,副教授 ,硕士生导师
西北药学杂志 2009 年 8 月 第 24 卷 第 4 期
261
醇回流 2 次 ,每次 2 h ,滤过 ; 合并滤液 ,减压蒸干滤
3. 696
2. 059
1 242. 325 1 949. 468
2 146. 914 1 442. 271
1 868. 780 1 821. 650
1 752. 673 1 737. 796
21. 813
6. 936
空白 1 2 3 3 1 2 2 3 1
[J ]. Analytical Chemistry ,1979 ,51 (7) :844. [ 4 ] 郭玉文 ,蒲丽梅 ,乔玮 ,等. ICP2A ES 在分析飞灰中重金
属化学形态上的应用 [J ] . 光谱学与光谱分析 ,2006 ,26
(8) :154021542. [ 5 ] 徐争启 ,倪师军 ,张成江 ,等. 金沙江 (攀枝花段) 水系沉
7. 94
11. 67
58. 94
7. 01
Cd 1. 59 33. 40 41. 46
8. 17
9. 76
5. 62
Hg
-
-
-
18. 90
45. 67 35. 43
As 23. 53 13. 14 13. 73
14. 12
8. 04 27. 45
从表 3 测定数据可以看出 ,5 种有害元素中 ,样 品栀子中镉含量远远超过了 2001 年 7 月 1 日国家对 外贸易经济合作部出台和实施的《药用植物及制剂进
白英为茄科植物 Sol anum l y rat um Thunb. 的干 燥全草 ,性微寒 ,味苦 ;最早见于《本经》记载 ,列为上 品 ,为传统中药[1] ;具有清热解毒 、祛风化痰 、祛风除 湿等功效 ,用于治疗癌症 、肿瘤 、疱疹 、疟疾 、黄疸 、水 肿 、淋病 、风湿性关节炎 、白带等 。白英含有多种化学 成分 ,主要有甾体生物碱类 、甾体皂苷类等化合物[2] 。 白英总生物碱具有一定的抗癌活性[3] ;脂溶性生物碱 具有明显的抗病原性细菌的作用 ,抗菌效果优于硫酸 黄连素和林可霉素[4] 。文献报道[4 ] 用重量法测定了 总碱的含量 。本课题组从白英中分离得到生物碱士 的宁 ,以士的宁为对照 ,用酸性染料比色法[526] 测定了 白英中总生物碱的含量 ,并比较了 21 种不同来源的 白英中的总生物碱含量 ,为白英的质量控制提供了一 定的理论依据 。 1 仪器与试药 1. 1 仪器 TU21901 双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司) 。 1. 2 试药 士的宁标准品 (中国药品生物制品检定 所 ,1107052200306 ,供含量测定用) ; p H4. 0 缓冲液 (上海鹏顺科学仪器有限公司) ;其它试剂均为分析 纯 。21 个不同来源的白英药材均由沈阳药科大学孙 启时教授鉴定为茄科植物 Sol anum l y rat um Thunb. 的干燥全草 。 2 方法与结果 2. 1 对照品溶液的制备 取士的宁对照品约 5 mg , 精密称定 ,置于 100 mL 量瓶中 ,加三氯甲烷溶解并 定容即得 。 2. 2 供试品溶液的制备 取白英粗粉约 0. 5 g ,精密 称定 ,加入 2 mL 氨水浸泡 0. 5 h ;加入 25 mL 无水乙
表 3 方差分析结果
方差来源
在 0 ,4 ,8 ,20 ,24 和 30 h 按上述条件测定吸光度值 ,
RSD 为 1. 2 %。结果表明 ,供试溶液在 30 h 内稳定 。
2. 7 精密度试验 精密量取对照品溶液 5. 0 mL ,共
5 份 ,按上述条件测定吸光度值 , RSD 为 1. 0 %。结
果表明 ,方法的精密度良好 。
害元素形态分析上存在一些缺陷 ,但总体上还是能够 反映药材中有害元素的存在形式与分布情况 。
中药中有害元素的形态分析属于基础性研究工
作 ,能够提供多方面有价值的信息 ,加强这方面的研 究 ,对于促进我国中医药发展具有积极的意义 。 参考文献 :
[ 1 ] 何品晶 ,章骅 ,王正达 ,等. 生活垃圾焚烧飞灰的污染特 性[J ] . 同济大学学报 (自然科学版) ,2003 ,31 (8) :972.
中重金 属 含 量 的 比 较 研 究 [ J ] . 广 东 微 量 元 素 科 学 ,
2004 ,11 (10) :34236.
(收稿日期 :2009204213)
西北药学杂志 2009 年 8 月 第 24 卷 第 4 期
白英中总生物碱的含量测定
甄会贤1 ,2 ,李 平2 ,解育静2 ,郝晶晶2 ,齐 伟1 ,孙立新1 3