绿色木霉HY-07液体发酵产纤维素酶的研究

：的、；酿酒科技２００８年第２期（总第１６４期）?ＵＱＵＯＲ－ＭＡＫＩＮＧＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＩＬ）ＧＹ２００８Ｎｏ．２（Ｔ０１．１６４）绿色木霉ＨＹ一０７液体发酵产纤维素酶的研究

舒国伟，陈合，谢宏霞，郑艳

（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西咸阳７１００２１）

摘要：以玉米芯为主要原料。通过单因素和正交试验对绿色木霉ＨＹ一７液体发酵产纤维素酶的最佳工艺条件

进行优化。结果表明，最佳产酶条件为：２５０ｍＬ三角瓶添加Ｍａｎｄｅｌｓ无机营养液７５ｍＬ。添加玉米芯２．０％，蛋白胨

Ｏ．０５％，吐温８００．１％，调整ｐＨ值为５．Ｏ；茵龄７８ｈ，接种量４．０％，转速１５０ｒ／ｍｉｎ，２８℃恒温振荡培养１０２ｈ，该条

件下，其酶活为４０１．７ｕ／ｍＬ。比优化前提高了４４．６％。

关键词：纤维素酶；绿色木霉；液体发酵；优化

中图分类号：Ｑ９３—３；Ｑ５５；ＴＱ９２５文献标识码：Ａ文章编号：１００１—９２８６（２００８）０２—００３０—０４

ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎＬｉｑｕｉｄＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＣｏｒｎＣｏｂｂｙＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ

ｖｉｒｉｄｅＨＹ－０７ｔｏＰｒｏｄｕｃｅＣｅｌｌｕｌａｓｅ

ＳＨＵＧｕｏ．ｗｅｉ。ＣＨＥＮＨｅ，ＸＩＥＨｏｎｇ．ｘｉａａｎｄＺＨＥＮＧＹａｎ

（ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ＆ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅｏｆＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉａｎｙａｎｇ，Ｓｈａｎｘｉ７１００２１，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｏｕｇｈｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｔｅｓｔａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｌｉｑｕｉｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ

ｏｆｃｏｒｎｃｏｂｂｙｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａｖ／ｒ／一ｄｅＨＹ－０７ｔｏｐｒｏｄｕｃｅｃｅｌｌｕｌａｓｅｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｃｅｌｌｕｌａｓｅｙｉｅｌｄｗｅｒｅｓｕｍｍｅｄｕｐａｓｆｏｌｌｏｗｓ：７５ｍＬＭａｎｄｅｌｓｉｎｏｒｇａ－ｉｎｃｎｕｔｒｉｔｉｏｎｌｉｑｕｉｄＷａｓａｄｄｅｄｉｎ２５０ｍＬｆｌａｓｋｗｉｔｈ，ｔｈｅｎ２．０％ｃｏｒｎｃｏｂ，０．０５％ｐｅｐｔｏｎｅ，ａｎｄＯ．１％Ｔｗｅｅｎ８０ｗｅｒｅａｄｄｅｄ，ｔｈｅｎｐＨｖａｌｕｅａｄ－ｊｕｓｔｅｄｔｏ５．０ｗｉｔｈｓｅｅｄａｇｅａｓ７８ｈａｎｄ４．０％ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｑｕａｎｔｉｔｙ，ｔｈｅｎｔｈｅｒｏｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄＷａｓａｔ１５０ｒ／ｍｉｎ，ａｎｄａＲｅｒ１０２ｈｃｕｌｔｕｒｅａｔ２８℃，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｐｒｏｄｕｃｅｄｃｅｌｌｕｌａｓｅｒｅａｃｈｅｄ４０１．７ｕ／ｍＬ．４４．６％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｕｎｏｐｔｉｍｉｚａｂｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｅｌｌｕｌａｓｅ；ｔｒ／ｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ；ｌｉｑｕｉｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ

纤维素物质是自然界中含量最丰富的碳水化合物．而人类对其开发利用还非常有限．如用纤维素酶将纤维素降解为可发酵性的糖。再进一步可转化为乙醇、单细胞蛋白及气体燃料等物质．对解决全球面临的能源危机、食品短缺及环境污染等问题具有深远的意义【ｌ卅。纤维素酶的工业化生产有固体发酵法和液体深层发酵法两种，本课题组在前期对分离筛选的绿色木霉ＨＹ一０７的固态发酵工艺条件进行了优化【４】。本文报道了绿色木霉ＨＹ一０７液体发酵产纤维素酶的研究结果。

ｌ材料与方法

１．１菌种

绿色木霉ＨＹ一０７：陕西科技大学生命学院生物工程教研室筛选。

１．２培养基

ＰＤＡ培养基［５１：主要用于活化菌种。

种子培养基：ＣＭＣ－Ｎａ０．７５％，蛋白胨Ｏ．５％。硫酸镁０．０３％，氯化钙０．０３％，磷酸二氢钾０．４％，２５０ｍＬ三角瓶装５０ｍＬ培养基。

基础产酶培养基：在２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬＭａｎｄｅｌｓ无机营养液［６１，玉米芯１．５％，蛋白胨０．１５％，吐温８０Ｏ．２％。

基础产酶条件：装液量５０ｍＬ，菌龄９６ｈ，发酵时间１２０ｈ，接种量５．０％，温度３０℃。

１．３酶活测定用

酶活力单位定义：在ｐＨ４．４，温度５０℃，每小时产生１Ｉｚｍｏｌ葡萄糖的酶量为１个酶活力单位（Ｕ）。

２结果与分析

２．１葡萄糖标准曲线的测定

分别取不同体积的标准葡萄糖液于２５ｍＬ比色管中，加水至１．０ｍＬ，再加入３ｍＬＤＮＳ溶液。在沸水浴中蒸煮５ｍｉｎ，立即冷却，定容后摇匀，以没加葡萄糖的溶液作对照，在５００ｎｎｌ测定其测吸光度，以葡萄糖浓度对

基金项目：陕西省科技攻关项目（项目编号：２００７ⅨＯｌ一１３—２）；成阳市科技攻关项目资助（项目编号：Ｋ０３１１－２）；陕西科技大学自然科学基金项目资助（项目编号：及Ｏ“１７）。

收稿日期：２００７一ｌｌ一２２

作者简介：舒国伟（１９７７一），男，ｌ舀Ｊｌｌ内江人，硕士，讲师，研究方向：功能性食品及酶工程。

　万方数据